杏鲍菇栽培.docx

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杏鲍菇栽培

杏

鲍

菇

的

栽

培

杏鲍菇

一、杏鲍菇概述

A.栽培现状

杏鲍菇是一种优质食用菌，世界各国都非常重视杏鲍菇的开发。

在意大利、法国、印度等国先后进行了杏鲍菇的栽培研究，Kalmar（1958）首次进行栽培试验，Henda（1970）在印度北部克什米尔高山上发现杏鲍菇并进行了段木栽培，Vessey（1971）分离培养出杏鲍菇菌种，Cailleux（1974）利用子实体上菌褶分离获得菌种，Ferri（1977）进行了商业栽培，但只得到有限的成功。

我国三明真菌所从1993年开始对杏鲍菇菌株选育，生物学特性和栽培进行了系统研究，并向全国推广应用。

1998年日本已正式将杏鲍菇列入可供商业栽培和销售的新菇种。

近年来，泰国、美国、日本、我国的台湾省采用调温、调湿的自动化生产工艺进行生产，实现了工厂化生产。

现在，杏鲍菇已推广应用到全国各地，开发出了不同的栽培方式方法，并已进行了反季节生产。

我国生产的杏鲍菇鲜菇和盐渍菇产品已出口到海外。

杏鲍菇个体肥大，肉质脆嫩可口，是味道最好的食用菌之一，有"平菇王"之称。

因此，杏鲍菇是一种有着极大开发前景的食用菌。

B.经济价值

杏鲍菇是一种优质食用菌，世界各国都非常重视杏鲍菇的开发。

在意大利、法国、印度等国先后进行了杏鲍菇的栽培研究，Kalmar（1958）首次进行栽培试验，Henda（1970）在印度北部克什米尔高山上发现杏鲍菇并进行了段木栽培，Vessey（1971）分离培养出杏鲍菇菌种，Cailleux（1974）利用子实体上菌褶分离获得菌种，Ferri（1977）进行了商业栽培，但只得到有限的成功。

我国三明真菌所从1993年开始对杏鲍菇菌株选育，生物学特性和栽培进行了系统研究，并向全国推广应用。

1998年日本已正式将杏鲍菇列入可供商业栽培和销售的新菇种。

近年来，泰国、美国、日本、我国的台湾省采用调温、调湿的自动化生产工艺进行生产，实现了工厂化生产。

现在，杏鲍菇已推广应用到全国各地，开发出了不同的栽培方式方法，并已进行了反季节生产。

我国生产的杏鲍菇鲜菇和盐渍菇产品已出口到海外。

杏鲍菇个体肥大，肉质脆嫩可口，是味道最好的食用菌之一，有"平菇王"之称。

因此，杏鲍菇是一种有着极大开发前景的食用菌。

二、生物学特征

A.形态学特征

杏鲍菇，又叫雪茸，刺芹侧耳。

学名：

Pleurotuseryngii（DC.:

Fr.）Quél

英文名：

BoletusoftheSteppes;KingOysterMushroom.

杏鲍菇隶属于真核真菌界，真菌门，担子菌亚门，真担子菌纲，层菌亚钢，伞菌目，侧耳科，侧耳属。

（一）菌丝

杏鲍菇的一个担孢子萌发的菌丝称为单核菌丝，或称为一次菌丝，该菌丝体为白色，粗壮，单核菌丝在长势上有所差异，有的在生长快、慢上存在差异，有的则在菌落形态特征上形成差异，有的单核菌丝的菌落与双核菌丝的菌落无明显区别（如图形态特征2）；单核菌丝每个细胞内只有一个细胞核，并且无锁状联合（如图形态特征3），单核菌丝是不能结实的，即不能出菇，因此不能作菌种使用。

两条不同交配型的单核菌丝生长接触后，通过细胞质融合，细胞核移动，形成双核菌丝后，才能结实；双核菌丝每个细胞内含有两个细胞核，并有锁状联合特征（如图形态特征4），双核菌丝生长浓密，粗壮，整齐，生长快（如图形态特征5）。

（二）子实体形态特征

子实体单生或群生，菌盖直径2～15厘米，菌盖初期为拱圆形，成熟后平展，后期菌盖边缘上翘，中部凹，似漏斗状，表面有丝光泽，不粘，幼时为灰黑色，成熟后为浅棕色，或黄白色；菌肉白色，厚；菌褶延生，密，白色，不等长，延长的部位交错呈网状；菌柄中生或偏生，直径0.5～3厘米，长4～13厘米，光滑，白色，中实，骨脆质，菌柄形状棒状至保龄球状；每个担子上着生4个担孢子，孢子印白色，孢子近纺锤形，平滑，大小为10～14微米4～5微米。

B.生活史

杏鲍菇的生活史是指从孢子萌发形成菌丝，菌丝生长发育成子实体，子实体再产生孢子的一个完整的生长过程。

成熟的杏鲍菇子实体弹射出孢子，孢子在一定的温度、水分和营养条件下萌发形成初生菌丝。

初生菌丝生长发育，菌丝相互接合形成次生菌丝，在一定的条件下菌丝扭结形成杏鲍菇原基，原基逐渐分化生长，最后形成完整的子实体。

子实体成熟后又会产生孢子，孢子在适宜的条件下又萌发成菌丝，开始新的生活循环，即成熟的杏鲍菇子实体→产生孢子→孢子萌发→形成菌丝→形成子实体。

这样周而复始地进行生活循环，就是杏鲍菇的生活史。

C.发育周期

（一）菌丝生长期

杏鲍菇播种后，菌丝在较适宜的温度条件下，菌丝体开始在培养料上由表面向深层发展，初生时菌丝生长较慢，菌丝体也较弱，经过一段时间后进入第一个生长高峰期，过后进入低潮期，随后又进入第二生长高峰期。

不同温度下菌丝的生长速度不同。

菌丝在6～30℃下都能生长，最适温度为25℃左右。

杏鲍菇菌丝在生长温度范围内，温度高菌丝生长快，温度低菌丝生长慢，但在较低温度下单合菌丝不能粗壮。

（二）菌蕾形成期

杏鲍菇菌丝生长发育到一定阶段，菌丝生理成熟，由营养生长转入生殖生长，菌丝体开始扭结，形成许多锥状的小菌蕾，颜色乳白色，一般是单个发生，少量丛生。

（三）菌柄生长期

在适宜温度、湿度和通风条件下，菌蕾进一步生长发育，球状物逐渐伸长，形状呈圆锥形上面顶一小球，基部较大，菌柄较粗。

（四）菌盖生长期

随着菌柄的不断生长，菌盖逐渐成为半球形。

菌盖表面较平，颜色土黄色或灰白色。

随着菌盖的生长，其表面逐渐伸平，中间部分稍突起，中间深土褐色，较光滑。

菌盖与菌柄中央生或偏心生。

（五）菌褶生长期

随着子实体的生长，菌褶也在不断生长，菌褶延生、密集、略宽、乳白色，边缘及两侧平滑，有小菌褶。

成熟时为淡黄色。

（六）杏鲍菇成熟期

随着菌柄、菌盖的发育，菌盖不断扩大，当菌盖接近展平时，杏鲍菇已进入成熟期，在菌褶上会弹射出大量的孢子，呈灰白色。

一般杏鲍菇应在成熟初期采收。

D.生活习性

杏鲍菇广泛分布于德、意、法、捷、匈及印度、巴基斯坦等国。

自然条件下，杏鲍菇生长在高山、草原、和沙漠地带，我国新疆及川西等地亦有野生分布，大多着生于朽死的刺芹、阿魏等植物根部及四周土层中，具一定寄生性。

在不同地区引种或不同菌株中分离出的杏鲍菇有其特殊的习性，应在栽培实践中总结经验。

E.环境要求

i.温度

杏鲍菇菌丝生长的温度范围为15～35℃，最适生长温度为25～30℃，在6～16℃和32℃时，菌丝也能够生长，但生长速度明显减慢，在10℃以下和35℃以上菌丝生长停止。

温度是子实体形成和生长发育的重要条件。

子实体原基形成的温度范围为10～20℃，最适温度为12～15℃。

子实体生长发育的温度范围为8～22℃，但也有菌株的子实体生长温度可达到29℃；子实体生长发育的最适温度为12～17℃，温度超过18℃时，子实体生长快，瘦长，菇体组织松软，品质差；在8℃以下时子实体生长缓慢，子实体菌盖颜色加深，呈灰黑色。

总之，杏鲍菇子实体生长的温度范围较窄，并且对温度较敏感，错过原基形成的温度，将不再出菇。

ii.水分

杏鲍菇菌丝生长的培养基含水量范围为45％～80％，最适生长的含水量为65％～70％；当含水量低于55％时，将不出菇；含水量高于80％时，菌丝生长速度减慢，并且不整齐。

子实体生长发育期间，在适宜的空气相对湿度下才能健康地生长，原基形成期间，适宜的空气相对湿度为90％～95％，子实体生长发育阶段，适宜的空气相对湿度为80％～90％；在采收前，将空气相对湿度控制在75％～80％之间，可降低子实体内水分，有利于保鲜和延长货架寿命。

iii.光照

杏鲍菇菌丝生长期间，光照强度在700勒克斯以内对菌丝生长的影响不明显，当光照强度超过1000勒克斯时，就会使菌丝生长速度减慢。

原基形成和子实体生长阶段，适宜的光照强度为500～1000勒克斯，即保持菇房内明亮。

iv.营养

杏鲍菇是一种木腐菌，具有较强的分解木质素、纤维素能力。

杏鲍菇菌丝生长最适碳源为葡萄糖、蔗糖等，适宜生长的氮源为蛋白胨、酵母粉、玉米粉和麸皮等。

栽培时，适宜用的原料为棉籽壳、木屑、玉米芯、蔗渣、豆秆和农作物秸秆等，其中以棉籽壳、玉米芯为好，在上述原料中加入含氮丰富的麸皮，或玉米粉，或米糠等组成栽培基质。

此外，在培养基中加入含蛋白质高的棉籽粉、菜籽饼粉等可提高产量，使子实体增大。

v.空气

杏鲍菇菌丝生长和子实体生长发育均较耐二氧化碳。

在菌丝生长阶段，培养后期袋内或瓶内二氧化碳浓度增加，有利于菌丝生长速度加快。

原基形成期间，需要在二氧化碳浓度低，空气新鲜的环境条件，否则在袋口或瓶口上长出大量的气生菌丝，原基在气生菌丝上形成，将会影响产量。

子实体生长阶段，虽然较耐二氧化碳，但以空气新鲜，二氧化碳浓度低为好，以免遇到高温高湿时，受到病菌侵染。

vi.酸碱度

杏鲍菇菌丝喜欢在偏酸性培养料中生长，pH范围为3.5～8，最适菌丝生长的pH为6.5～7.0为好，出菇时最适宜pH值为5.5～6.5。

在生长时，则要将pH调到6.5～8为宜，其原因是在菌丝生长过程中代谢出有机酸类物质，降低培养基的pH。

三、品种介绍

A.保龄球形

菌柄较粗，且长，长8～12厘米，中部膨大，两端较细，菌柄白色，肉质较疏松；菌盖黄褐色至灰褐色。

其子实体商品性状好，是生产上常用菌株。

B.短柄形

菌柄较短，长为4～6厘米，菌柄近基部膨大，白色，肉质较疏松；菌盖灰黑色或浅灰黑色。

出菇温度范围广，较耐高温，但子实体商品形状较差。

C.鼓缒状形

菌柄近基部膨大，上端渐细，长8～12厘米，白色，肉质较紧实；菌盖浅褐色至灰黑色。

出菇温度范围较宽，也是生产上常用菌株。

D.棍棒形

菌柄上下等粗，细长，长8～11厘米，白色，肉质紧实；菌盖浅黄褐色至灰褐色。

该类菌株子实体生产温度范围较窄，子实体商品性状好，也是生产上常用菌株。

E.菌盖灰黑色形

菌柄白色，长7～13厘米，粗壮，近基部膨大，肉质较紧实，菌盖灰黑色。

四、制种技术

A.菌种的分类

杏鲍菇的菌种是人工培育的、供进一步繁殖用的纯菌丝体，一般分为三级，即母种、原种、栽培种。

（一）母种

利用杏鲍菇的子实体经组织分离或孢子分离培育而成，一般盛装在玻璃试管内。

直接分离培育而成的称为一级母种，转管扩大1次而成的母种称为二级母种。

生产中常用三级或四级母种。

母种转扩次数的多少，从理论上讲，对食用菌自身的生活力影响不大。

但实践证明，转扩次数太多，尤其是连续多次转扩，不仅影响菌丝生活力，而且也影响产量。

所以，生产中母种应以转扩5代以内较为有利。

1支母种可转扩30～50支二级母种，1支二级母种又可转扩30～50支三级母种。

选购母种时一定要选择具有良好信誉的制种单位。

（二）原种

由母种转扩而成，容器一般选用标准菌种瓶、葡萄糖瓶或其他无色透明的容器。

培养料有棉籽壳、玉米芯、木屑等再加进一些辅料。

1支母种可以扩接4～5瓶原种。

（三）栽培种

由原种转扩而成，容器一般为塑料袋。

生产中多采用聚丙烯或聚乙烯塑料袋作为菌种袋，其特点是成本低，使用方便，便于机械化操作。

1瓶原种可扩接20袋左右的栽培种。

从母种到栽培种，菌丝由弱到强，菌丝体的数量由少到多，菌丝的生命力也不断增强，生产上用栽培种直接播种，菌种用量因栽培模式的不同而有较大的差异，熟料栽培用种量一般为5%左右，生料栽培为10%～15%。

B.生产时间安排

杏鲍菇菌种生产时间的安排应根据栽培时间而决定。

杏鲍菇出菇的最好温度是10～15℃，因此应根据子实体出菇的温度来计算制种时间。

母种应在原种制作前15天制作，原种制作应在栽培种制作期前40天左右进行，栽培种应在生产期前50天左右进行制作。

C.制种设备与设施

a）装料工具

（一）计量用具

台秤、天平、量筒、量杯。

（二）容器

铝锅、盆、盘、烧杯、铁桶。

（三）工具

镊子、小刀、拌料工具和接种用具等。

（四）加热用具

电炉、煤炉或其他加热用具。

（五）生产机械

拌料机、装袋机、接种机械

b）灭菌设备

制种用灭菌设备分为高压灭菌设备和常压灭菌设备两大类。

培养母种的培养基必须使用高压灭菌设备，才能达到灭菌的目的。

常压灭菌设备容量大，一次性灭菌的料瓶和料袋多，有利于大规模生产菌种。

（一）手提式高压灭菌锅

手提式高压灭菌锅是一种小型灭菌设备，主要用于母种培养基的灭菌，一次可装150支（18毫米×180毫米）试管装培养基，即1500毫升培养基。

手提式高压锅根据加热方式分为煤加热和电加热两种，煤加热是将其放置在煤炉上加热，电加热是利用锅内电管加热。

手提式高压锅由锅体、内桶和锅盖三部分组成，锅盖上安装有压力表，放气阀和安全阀；放气阀是用于手动排除锅内气体的阀门；安全阀是用于稳定压力的阀门，根据压力的高低自动排气和关闭阀门；压力表用来显示锅内气体的压力大小，内锅是用于盛装灭菌物的。

（二）常压灭菌灶

常压灭菌结构多种多样，体积大小也不一样。

这里介绍一种用汽油桶制作的小型灭菌灶，其他大型常压灭菌灶将在后面介绍。

汽油桶常压灭菌灶，体积较小，并且可以灵活增大，适合于小规模生产菌种。

选一个完整的汽油桶，将顶盖环割去掉，在距桶底25厘米处制一个横隔，下层装水，上层装料瓶或料袋，在横隔处焊接一个细铁管，用于排放气体，另外还需准备一根厚为0.08厘米的塑料筒膜。

若需要增加灭菌的料瓶或料袋数量，在上端再重叠半个汽油桶，或者圆形铁框。

加热设施可制作烧块煤或烧蜂窝煤的灶，其中以蜂窝煤作燃料较为方便，一次性加足28个煤，煤烧结束后，即灭菌结束。

c）接种用具

（一）接种工具

组织分离和多孢分离菌种的工具主要为手术刀、镊子、酒精灯、接种钩和接种环等。

母种扩大繁殖的工具为接种钩，接种钩由接种棒和铁钩组成，接种棒需购买，钩要自己制作，用一根1500瓦的电炉丝制作，将电炉丝拉直后剪成5厘米长的小节，在距前端0.5厘米处弯曲成直角状钩，并将前端磨尖，安装在接种棒上即成接种钩。

此外，也可用自行车辐条制作，将一端敲扁平，另一端敲扁平后并弯曲成锄状或者成钩状。

接种原种的工具也是自己制作的，取一根较粗的钢棒，或者用三轮车辐条制作，长为30厘米，将一端加热烧红变软后，敲扁平，再弯曲成直角，弯曲部分长为0.3厘米。

接种栽培种和生产袋的接种工具其形状同原种接种工具，只是要粗一些，用直径为0.8厘米的钢筋或不锈钢棒制作，一端制成锄状，另一端弯曲成半月形，以便握着接种钩用力钩取菌种。

（二）接种设备

接种操作需在无菌环境条件下进行，为了使接种的环境达到无菌的目的，就需要相应的设备，如接种箱，接种室和超净工作台等。

1、接种箱

接种箱体积小，易消毒彻底达到无菌环境，并且操作人员接触消毒药物少，夏季还可免受高温，是食用菌菌种生产中常用接种设备。

接种箱根据大小分为单人接种箱和双人接种箱。

单人接种箱：

单人接种箱体积较小，仅供1人操作。

主要用于母种和原种的接种操作。

接种箱用木方条、层板和玻璃等材料制作。

先用木方条制作框架，再用层板制作箱底层和四周隔板。

箱体下部分为长方体，上部分为梯形结构，上部分的一侧为斜面状，另一侧为垂直面。

箱高70厘米，长125厘米，下层宽60厘米，顶部宽30厘米。

斜面部位安装玻璃，制作成活动窗，便于开启放入接种工具、培养基和菌种等。

在有斜面状的一侧下部分中心位置开两个圆孔，圆孔直径为20厘米，圆孔中心与中心之间相距36厘米，即两手肩间距离，在两个圆孔上钉上白布制作袖套。

在接种箱内分别安装一盏紫外线灯和电灯。

双人接种箱：

双人接种箱体积较大，在两侧都开有接种操作孔，二人面对面操作接种，或一人分别在两侧接种操作。

双人接种箱下部分为长方体，上部分为梯形，上部分两侧为斜面状，并安装上玻璃，为活动窗体结构。

长160厘米，高75厘米，下部分宽76厘米，顶部宽50厘米。

其他制作方法同单人接种箱。

接种箱要求密封严，漏出气体少，才有利于用消毒剂熏蒸杂菌。

箱体上缝隙较大的，需用不干胶布封严。

2、超净工作台

超净工作台主要用于母种的转接用接种设备。

是利用鼓风机吹风，使空气通过预过滤器和高效过滤器后，除出空气中微生物，使操作区处于无菌状态。

使用时，接通电源，开机30分钟后使用，但操作时，也要在酒精灯旁。

超净工作台分为平流式和垂直流式两种，平流式超净工作台的风是从对面向外流动，垂直流式的风是从上向下流动。

3、接种室

接种室是指用一间房间专门用于接种的场所。

接种室的体积较大，有利于大规模的菌种生产，但接种室的体积也不宜过大，一般长3～4米，宽2～3米，高为2.5米。

接种室分为内外两部分，内为接种间，在内部设置操作平台，外为缓冲间，用于阻止空气直流和更换工作服。

缓冲间宽为1米，入口处的门要错开，并且门要制作成平行移动门。

在接种间和缓冲间均安装30瓦的紫外线灯。

此外，生产者可用普通民房作接室，但要求密闭效果较好，若体积较大，密闭效果较差的，可用塑料薄膜来隔离改造。

d）培养设备

菌种需在适宜的温度下培养，才能生长快，健壮。

气温偏低时，又能加热升温；温度高时，又可散热降温，这就需要一个良好的培养设备和设施。

（一）恒温培养箱

恒温培养箱常用于母种的培养。

恒温培养箱具有良好的保温和恒温效果，但不具备降温效果，适宜在冬季气温低时进行保温培养菌种。

恒温培养箱是利用电来加热升温，可调节恒定在不同的温度下（右图:

培养设备1）。

此外，也可用木板来制作简易的保温培养箱，大小为长100厘米，高130厘米，宽80厘米，箱壁为双层结构，中间填充木屑等作保温层，在箱底部安装电热丝或2个100瓦的电灯泡作发热源，在顶部开一个小孔，用于放置温度计。

（二）培养室

培养室适宜原种和栽培种的保温发菌。

培养室要求具有良好的调温、遮光和除湿效果。

用砖和水泥制作一个小房间，或将一般的房屋改装成小型培养室。

冬季保温用培养室不宜过大，以8～10平方米，高为1.8～2.0米为宜。

培养室内安放培养架，培养架宽为50厘米，层间距为40厘米，高为1.6米。

培养室内加热保温装置设施为，在室内放一个蜂窝煤炉，炉上放置一根铁管，铁管穿过墙体，利用铁管作烟道发热来升高室内温度（右图:

培养设备2）。

（三）电热毯保温

生产的菌种数量较少时，可用电热毯来保温发菌，保持温度在22～25℃之间。

其做法是：

先在桌面上铺一层棉絮，放上电热毯，再在其上铺一层棉絮，然后横卧排放好菌种，再在菌种上盖上一层棉絮，利用电热毯加热来保温。

但要常检查温度，当温度上升到30℃以上时，要及时断开电源降温，防止出现40℃以上高温烧死菌种。

e）消毒用品

杏鲍菇在制种过程中常用消毒药品有以下几种：

（一）酒精

酒精是常用的消毒剂，具有脱水作用，能使蛋白质变性或沉淀，致使菌体死亡。

无水酒精杀菌力很低，一定浓度的酒精杀菌力较高。

70%（以重量计算）或77%（以容积计算）的酒精杀菌效果最好。

表面干燥的物品，用70%～75%的酒精消毒效果较好；表面湿润的物品则需用80%～90%的酒精才能起到较好的杀菌效果。

工业酒精的浓度常为95%，用作消毒时要用水稀释至75%左右。

（二）甲醛

甲醛一般为36%～40%的水溶液，也叫福尔马林，具有强烈的刺激味，一般呈白色或无色，有杂质时易聚合成白色结块沉淀于容器底部。

甲醛能使微生物蛋白质变性，对菌丝和孢子有强烈的杀伤作用。

接种箱和接种室常采用熏蒸法消毒，效果较好。

常用量为1立方米空间用8～10毫升。

使用时将甲醛溶液倒入一容器内，加热使甲醛挥发，利用甲醛气体杀灭微生物。

也可用2份甲醛溶液加1份高锰酸钾发生反应产生的热量将甲醛挥发。

甲醛气体对人体有一定的刺激作用，使用时应注意防护。

（三）高锰酸钾

高锰酸钾是一种强氧化剂，外观呈紫色针状结晶0．1%的高锰酸钾水溶液就有杀菌作用，常用于物品的表面消毒，配制的溶液不宜久效。

常和甲醛配合使用，利用甲醛气体对接种箱或接种室进行杀菌消毒。

（四）新洁尔灭

新洁尔灭是一种有消毒作用的表面活性剂，一般使用浓度为0．25%的水溶液，用做皮肤和器具的消毒。

（五）硫磺

硫磺为淡黄色结晶或粉末，易燃，燃烧时发蓝色光，产生二氧化硫，对杂菌有杀伤能力。

常用于培养室和接种室消毒，即每立方米空间用量15克左右，使用时增加环境湿度可提高杀菌效果。

（六）石灰

石灰分生石灰和熟石灰两种，生石灰对环境有一定的消毒作用，培养料中加入1%～2%的生石灰粉对杂菌有抑制作用，3%～5%的石灰水溶液可抑制多数霉菌的生长和繁殖。

（七）多菌灵

多菌灵是杏鲍菇生产中常用的杀菌剂，一般为50%或25%的可湿性粉剂。

多菌灵为高效低毒的内吸杀菌剂，残效期长，能有效地防治多种杂菌。

生产中通常使用0．1%的（含量为50%）多菌灵可湿性粉剂加入培养料中，对杂菌防治效果比较明显。

（八）金星消毒液

该品是一种液体消毒剂，接种室或接种箱常采用200～300倍液喷雾，每瓶消毒液可拌250千克培养料。

（九）克霉灵

克霉灵是一种新型的食用菌专用杀菌剂，对多种霉菌的杀伤和抑制作用较强，是目前比较好的杀菌剂之一。

D.母种的制备技术

a）培养基制作

任选一种培养基配方，根据配方中所需原料进行准备。

下面以PDA培养基为例进行介绍。

首先，将新鲜马铃薯去皮挖去芽眼，切成薄片，称取200克，放入铝锅内，加水1000毫升，加热煮沸，煮至马铃薯片熟而不烂为止，即煮沸15～20分钟。

然后用4层纱布过滤，去掉马铃薯片，取滤液使用。

将滤液再装入铝锅内，加入琼脂20克，加热煮沸，边煮沸边搅拌，防止琼脂粘锅底和液体溢出，煮至琼脂完全溶化成液体为止。

再加入20克葡萄糖，加热搅拌使其完全溶解并混合均匀。

最后加水补足蒸发掉的水，补水至1000毫升，搅拌混合均匀后，趁机热分装入试管内。

（三）分装及棉塞制作

利用分液漏斗进行分装，将分液漏斗固定在木架上，漏斗下端用乳胶管和细玻璃管连接，用止水夹夹着乳胶管。

在漏斗内装入配制好的培养基液体；然后将培养基分装入干净的试管内，每支试管内装入的培养基高度为试管的1／4。

若试管口部位粘着有培养基的，用干净纱布擦去培养基后，再塞上棉塞，直立放入灭菌锅内桶内。

此外，棉塞可事先制作好，经灭菌和固型后使用，这样有利于快速制作培养基。

其做法是，先将试管洗净，倒置放入框内滴干水分，然后再制作棉塞，棉塞可用棉花和化纤棉制作。

取一小团棉花平铺在桌面上，卷曲成柱状，再将两端向内折叠成短柱状后，塞入试管内。

制作好的带棉塞试管，需经固型后使用，这样取出的棉塞才不松散开来，便于再次塞入试管内。

棉塞固型的方法有两种，一种是干热固型法，即在140～160℃的烘箱内保持2～3小时；另一种是湿热固型法，将棉塞在手提式高压锅内灭菌1小时，其做法同培养基的灭菌。

经固型处理后，装入框内置于干燥处备用。

（四）灭菌

分装好的培养基要及时进行灭菌处理，不宜放置过久，否则培养基内会长出大量细菌，以当日制作的培养基，当天灭菌为妥。

母种培养基的灭菌必须在高压锅内进行，在常压灭菌灶内是不能起到灭菌作用的。

将装有培养基并带有棉塞的试管直立放入手提式高压锅内的内桶内，在表面盖上报纸或牛皮纸，放入高压锅内，盖严锅盖。

加热烧开锅内水产生蒸汽升高压力。

在灭菌过程中，首先要排除掉锅内冷空气，才能达到灭菌的目的。

其做法是，当压力第一次上升到0.05兆帕时，停止加热，缓慢开启排气阀放出气体，当气体排完后关闭阀门，再加热升高压力，再次上升到0.05兆帕时，再排气一次。

然后继续加热，当压力上升到0.147兆帕时，即安装阀自动排气后，开始计时，在此压力下维持40分钟，即可达到灭菌之目的。

灭菌时间到后，停止加热，缓慢打开排气阀门排出气体，排气量切勿过大，否则出现减压过快，培养基喷出试管，打湿棉塞，甚至掀掉棉塞。

当气体被完全排除，压力表指针回到"0"时，打开锅盖，揭去纸，稍冷却后，在培养基尚未凝固之前，取出制作成斜面培养基。

（五）斜面培养基制作

当培养基冷却到60℃左右，即不太烫手时，趁热制作成斜面培养基。

一旦冷却凝固后就无法制作成斜面培养基，就需再次加热熔化后，再制作成斜面培养基。

斜面培养基制作方法是：