GPC操作步骤.docx

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GPC操作步骤

GPC操作步骤

1.操作前准备

1.1.标样及样品的配制

1.1.1.在分析前一天称好一定重量的标样和样品，置于样品瓶中，加入流动相，室温放置

12-24小时。

通常将2个相差大的分子量标样配在一起。

一般校准曲线有8个不同分

子量，总共4个标样。

1.1.2.使用前缓慢水平摇动样品瓶，使样品浓度均匀，且瓶壁无气泡。

提示:

配制标样应该严格按照标样的说明书来操作。

严禁超声和加热。

标样的浓度应该选在合适的范围，通常根据分子量来确定。

标样的有效期请参考说明书。

1.2.流动相的准备

1.2.1.使用色谱纯级溶剂和超纯水来配制流动相。

0.45um滤膜过滤后，超声脱气。

提示:

超声15min，恢复到室温后才可使用。

2.分析操作步骤

2.1.开机及平衡过程

2.1.1.打开空调，使室内温度保持在25?

左右。

2.1.2.打开电脑及仪器（包括输液泵LC-20AD、自动进样器SIL-20A、检测器RID-10A、

柱温箱CTO-20A）。

提示:

在打开仪器的时候，通常控制器最后开。

如果控制器装在输液泵内部，则该输液泵最后开。

．

2.1.3.运行LCsolution。

双击电脑桌面，打开LCsolution程序，点击第一个图标。

Login窗口点击OK，无密码。

2.1.4.点击“InstrumentParametersView”中“Normal”，设定方法参数。

仪器参数窗口设定方法参数:

流动相流速（pumpaflow）:

1ml/min

测定时间（time）:

大于溶剂峰出峰时间2-3min

柱温（oventemperature）:

40?

（与检测器温度相同）

选中Advanced窗口，pump，pressure:

max:

8mPa（参照柱子说明书，两根柱子串

）

联则相加．

点击Download按钮，出现对话框选择是，将参数下载到仪器。

提示:

“InstrumentParametersView”中“Advanced”为各设备的运行参数，参考相关

说明书制定。

2.1.5.输液泵排气:

逆时针拧开LC-20AD排液阀，按purge按钮，3min后自动结束，顺时

针拧紧排气阀。

提示:

排液阀拧开不要超过180度，否则反而容易在purge时引入气泡。

2.1.6.进样器冲洗:

按自动进样器上purge按钮，25min后自动结束;

提示:

自动进样器清洗液使用与流动相相同溶剂，但是去除了添加的盐和酸等物质。

2.1.7.平衡GPC柱:

待2.1.5结束后，按（InstrumentOn/Off）使仪器按照方法参数开始运

转，一般60min左右基线可以走平。

提示:

可以与2.1.6步同时进行。

2.1.8.示差检测器平衡

2.1.8.1.按Rflowon/off键冲洗参比池。

2.1.8.2.20min后，按Rflow

on/off键停止冲洗，反复点击3-4次以消除池内气泡。

2.1.8.3.调零，等基线平稳后检查balance值，如果大于50，就进行光路平衡，如果小于

50，不必进行。

2.1.8.4.在仪器监视窗口查看检测器能量应处于6000和9000之间，否则在面板上调节电压

使之坐落在该范围内。

提示:

2.1.8可以在2.1.7步流动相彻底置换色谱柱中溶液后开始进行。

2.1.9.

待基线基本稳定，按ZerosDetectorA键调零。

2.2.分析操作过程

2.2.1.放入样品瓶，记录放置孔号。

提示:

样品架应推倒底，瓶垫应该白色朝上。

2.2.2.编辑批处理表

2.2.2.1.右侧助手烂点击“Batchprocessing”

2.2.2.2.New;

2.2.2.3.输入第一个样品进样器孔号（Vial#），右键filldetail;

2.2.2.4.跳出窗口中依次填入行数（由第1行到第6行）、第一个样品孔号

（2）与重复次数

点击“OK”;）;次（1．

2.2.2.5.依次输入samplename（样品名）、sampleID（样品编号）;

2.2.2.6.methodfile列中输入方法文件（*.lcm文件），左键选定列，右键单击，选择filldown

向下填充;

2.2.2.7.确定数据文件保存地址及名称;

2.2.2.8.输入进样体积:

50μl-100μl（标样浓度高则进样量少，低则进样量多;所有的标准

品和代测样品应该采用相同的进样体积）;

2.2.2.9.保存批处理文件。

2.2.3.运行批处理表。

点击Batchstart按钮，开始进样。

提示:

测试过程中可按助手栏中“Pause”暂停，插入样品后保存批处理表，按restart;也可按“Stop”停止，对话框弹出选择“停止这一针分析”和“停止这个样品表的分析”。

提示:

手动进样器点击singlestart进行单次进样。

2.3.分析完冲洗及关机过程

2.3.1.第二天将会再次使用

2.3.1.1.点击仪器控制栏图标，停止温控。

2.3.1.2.使流动相以0.5mL/min流速流入填充柱，直至柱温冷却至室温;

2.3.1.3.点击“intrumenton/off”

2.3.1.4.依次关闭程序、电脑和仪器。

2.3.2.仪器长时间不用

2.3.2.1.点击仪器控制栏图标，停止温控。

2.3.2.2.换上保存溶剂，以0.5mL/min流速流入填充柱，时间为3-4倍方法时间，直至柱温

冷却至室温;

2.3.2.3.点击“intrumenton/off”

2.3.2.4.将填充柱从仪器上拆下，两端用堵头堵住，放置在包装盒中。

2.3.2.5.依次关闭程序、电脑和仪器。

提示:

柱子的使用和保藏应该按照柱子使用说明书来操作。

更换溶剂时注意缓冲盐不要析出和溶剂之间的互溶性。

3.分子量计算过程

以sample目录下的演示文件为例介绍分子量校正曲线制作及操作过程。

3.1.校正曲线制作

首先双击桌面LCsolution图标，单击GPCPostrun，打开GPCPostrun

Analysis窗口。

所有的操作均在该窗口中进行。

标准品数据文件。

GPC文件，打开GPC_Data-001双击数据资源管理器窗口1（

（001,002,003,004均为分子量标准品数据文件，每个标准品数据文件中含有两个不同分

子量的标准品，因此有两个峰。

005为未知品数据文件）

2（单击工具栏DataAnalysisParameters图标

出现DataAnalysisParameters窗口，使用如图所示的积分参数。

图标。

Program窗口中的DataAnalysisParameters单击

设定积分时间程序，确保只有标准品的峰被积分出来。

通常将溶剂峰开始时间20min输入Time列，在Command列中选择IntegrationOff，这样溶剂峰就不被积分。

设好后单击OK按钮。

单击DataAnalysisParameters窗口的Advanced按钮。

按钮。

单击确定。

OK，单击5000为Max.Slices设定

3（单击助手栏ApplytoMethod按钮。

给方法文件取个名字GPC_test，单击保存按钮。

按钮。

OK窗口，直接单击SelectMethodParameters出现．

单击如图所示的按钮，关闭GPC_Data-001数据文件。

提示是否保存数据文件，选择是。

4（单击数据资源管理器窗口Method标签，显示方法文件。

方法文件，出现方法文件编辑窗口。

GPC_test双击刚才保存的．

5（窗口中显示了以前的分子量校准曲线信息，先将以前的信息清除掉。

如果（没有以前的单击校准表查看窗口Edit按钮，切换到编辑模式。

）信息，跳过这一步

，删除所有行。

DeleteRow选中所有列，鼠标右键单击，选择．

单击View按钮，切换到查看模式。

出现对话框，直接单击确定。

这样就将以前的信息清除掉了。

．

6（单击工具栏DataAnalysisParameters图标。

出现数据分析参数编辑窗口，选择Curve类型为三次方曲线。

单击GPCCalculation标签。

采用窄分布校正法时，在上图QFactor一栏输入RQF值（Q因子比）。

采用普适校正法时，在上图Viscosity栏中输入标样的α和K值。

并点击CalibrationCurve

值。

K和α，输入样品的settings，点击Mark-Houwink标签，选中

将GPCCalculation选项打勾。

单击确定。

出现窗口，直接单击确定。

7（单击ChromatogramView窗口的Multiview标签，切换到显示多色谱图界面。

单击DataExplorerer窗口的Data标签，显示所有的数据文件。

选中001-004这四个数据文件。

将选中的四个数据文件拖到MultiView窗口中，同时显示四个色谱图的八个峰。

．

8（单击校准表查看窗口的Edit按钮，切换到编辑模式。

单击校准表查看窗口右下角的Pickup按钮。

出现GPCMethodEdit窗口，单击Allpeaks按钮选择所有积分出来的峰。

按钮，新建校准表。

New单击

校准表中出现所有峰的保留时间，检查确认是否正确。

输入各个峰所对应的分子量。

单击View按钮。

CalibrationCurveView出现制作好的校准曲线图谱和方程。

9（单击工具栏Save按钮，保存方法文件。

出现对话框，单击是。

3.2.样品平均分子量计算

1（双击打开未知品数据文件GPC_Data-005。

单击Method标签。

方法拖到右边的色谱图窗口中，加载方法参数。

GPC_test将刚才保存的．

出现选择方法参数对话框，直接单击OK。

2（单击工具栏MolecularWeightDistribution按钮。

查看分子量计算结果。

按钮查看数据文件中的报告。

DataReport单击助手栏3（

显示包含在数据文件中的报告。

单击File菜单，打开报告格式文件，可以修改报告格式。

选择CalculationResults目录。

（该目录中存放的都是针对单个GPC数据文）

件的报告模板

选择如图所示的报告格式文件。

（共有四种不同格式的报告格式文件可供选择）

单击助手栏Preview按钮。

在打印前预览报告。

单击打印按钮，就可以打印出报告。

．