GPC操作步骤.docx

1、GPC操作步骤GPC操作步骤 1. 操作前准备 1.1. 标样及样品的配制 1.1.1. 在分析前一天称好一定重量的标样和样品，置于样品瓶中，加入流动相，室温放置 12-24小时。通常将2个相差大的分子量标样配在一起。一般校准曲线有8个不同分 子量，总共4个标样。 1.1.2. 使用前缓慢水平摇动样品瓶，使样品浓度均匀，且瓶壁无气泡。 提示:配制标样应该严格按照标样的说明书来操作。严禁超声和加热。标样的浓度应该选在合适的范围，通常根据分子量来确定。标样的有效期请参考说明书。 1.2. 流动相的准备 1.2.1. 使用色谱纯级溶剂和超纯水来配制流动相。0.45um滤膜过滤后，超声脱气。 提示:超

2、声15min，恢复到室温后才可使用。 2. 分析操作步骤 2.1. 开机及平衡过程 2.1.1. 打开空调，使室内温度保持在25?左右。 2.1.2. 打开电脑及仪器(包括输液泵LC-20AD、自动进样器SIL-20A、检测器RID-10A、 柱温箱CTO-20A)。 提示:在打开仪器的时候，通常控制器最后开。如果控制器装在输液泵内部， 则该输液泵最后开。2.1.3. 运行LCsolution。 双击电脑桌面，打开LCsolution程序，点击第一个图标。 Login窗口点击OK，无密码。 2.1.4. 点击“Instrument Parameters View”中“Normal”，设定方法参

3、数。 仪器参数窗口设定方法参数: , 流动相流速(pump a flow):1ml/min , 测定时间(time):大于溶剂峰出峰时间2-3min , 柱温(oven temperature):40?(与检测器温度相同) 选中Advanced窗口，pump，pressure:max:8mPa(参照柱子说明书，两根柱子串 ) 联则相加 点击Download按钮，出现对话框选择是，将参数下载到仪器。 提示:“Instrument Parameters View”中“Advanced”为各设备的运行参数，参考相关 说明书制定。 2.1.5. 输液泵排气:逆时针拧开LC-20AD排液阀，按purge

4、按钮，3min后自动结束，顺时 针拧紧排气阀。 提示:排液阀拧开不要超过180度，否则反而容易在purge时引入气泡。 2.1.6. 进样器冲洗:按自动进样器上purge按钮，25min后自动结束; 提示:自动进样器清洗液使用与流动相相同溶剂，但是去除了添加的盐和酸等物质。 2.1.7. 平衡GPC柱:待2.1.5结束后，按(Instrument On/Off)使仪器按照方法参数开始运 转，一般60min左右基线可以走平。 提示:可以与2.1.6步同时进行。 2.1.8. 示差检测器平衡 2.1.8.1. 按R flow on/off键冲洗参比池。 2.1.8.2. 20min后，按R flo

5、w on/off键停止冲洗，反复点击3-4次以消除池内气泡。 2.1.8.3. 调零，等基线平稳后检查balance值，如果大于50，就进行光路平衡，如果小于 50，不必进行。 2.1.8.4. 在仪器监视窗口查看检测器能量应处于6000和9000之间，否则在面板上调节电压 使之坐落在该范围内。 提示:2.1.8可以在2.1.7步流动相彻底置换色谱柱中溶液后开始进行。 2.1.9. 待基线基本稳定，按Zeros Detector A键调零。 2.2. 分析操作过程 2.2.1. 放入样品瓶，记录放置孔号。 提示:样品架应推倒底，瓶垫应该白色朝上。 2.2.2. 编辑批处理表 2.2.2.1.

6、右侧助手烂点击“Batch processing” 2.2.2.2. New; 2.2.2.3. 输入第一个样品进样器孔号(Vial#)，右键fill detail; 2.2.2.4. 跳出窗口中依次填入行数(由第1行到第6行)、第一个样品孔号(2)与重复次数 点击“OK”; );次(1 2.2.2.5. 依次输入sample name(样品名)、sample ID(样品编号); 2.2.2.6. method file列中输入方法文件(*.lcm文件)，左键选定列，右键单击，选择fill down 向下填充; 2.2.2.7. 确定数据文件保存地址及名称; 2.2.2.8. 输入进样体积:5

7、0l-100l(标样浓度高则进样量少，低则进样量多;所有的标准 品和代测样品应该采用相同的进样体积); 2.2.2.9. 保存批处理文件。 2.2.3. 运行批处理表。点击Batch start按钮，开始进样。 提示:测试过程中可按助手栏中“Pause”暂停，插入样品后保存批处理表，按restart;也可按“Stop” 停止，对话框弹出选择“停止这一针分析”和“停止这个样品表的分析”。 提示:手动进样器点击single start进行单次进样。 2.3. 分析完冲洗及关机过程 2.3.1. 第二天将会再次使用 2.3.1.1. 点击仪器控制栏图标，停止温控。 2.3.1.2. 使流动相以0.5

8、mL/min流速流入填充柱，直至柱温冷却至室温; 2.3.1.3. 点击“intrument on/off” 2.3.1.4. 依次关闭程序、电脑和仪器。 2.3.2. 仪器长时间不用 2.3.2.1. 点击仪器控制栏图标，停止温控。 2.3.2.2. 换上保存溶剂，以0.5mL/min流速流入填充柱，时间为3-4倍方法时间，直至柱温 冷却至室温; 2.3.2.3. 点击“intrument on/off” 2.3.2.4. 将填充柱从仪器上拆下，两端用堵头堵住，放置在包装盒中。 2.3.2.5. 依次关闭程序、电脑和仪器。 提示:柱子的使用和保藏应该按照柱子使用说明书来操作。更换溶剂时注意缓

9、冲盐不要析出和溶剂之间的互溶性。 3. 分子量计算过程 以sample目录下的演示文件为例介绍分子量校正曲线制作及操作过程。 3.1. 校正曲线制作 首先双击桌面LCsolution图标，单击GPC Postrun，打开GPC Postrun Analysis窗口。所有的操作均在该窗口中进行。 标准品数据文件。GPC文件，打开GPC_Data-001双击数据资源管理器窗口1( (001,002,003,004均为分子量标准品数据文件，每个标准品数据文件中含有两个不同分 子量的标准品，因此有两个峰。005为未知品数据文件) 2( 单击工具栏Data Analysis Parameters图标 出

10、现Data Analysis Parameters窗口，使用如图所示的积分参数。 图标。Program窗口中的Data Analysis Parameters单击 设定积分时间程序，确保只有标准品的峰被积分出来。通常将溶剂峰开始时间20min输入Time列，在Command列中选择Integration Off，这样溶剂峰就不被积分。设好后单击OK按钮。 单击Data Analysis Parameters窗口的Advanced按钮。 按钮。单击确定。OK，单击5000为Max.Slices设定 3( 单击助手栏Apply to Method按钮。 给方法文件取个名字GPC_test，单击保存

11、按钮。 按钮。OK窗口，直接单击Select Method Parameters出现 单击如图所示的按钮，关闭GPC_Data-001数据文件。提示是否保存数据文件，选择是。 4( 单击数据资源管理器窗口Method标签，显示方法文件。 方法文件，出现方法文件编辑窗口。GPC_test双击刚才保存的 5( 窗口中显示了以前的分子量校准曲线信息，先将以前的信息清除掉。如果( 没有以前的 单击校准表查看窗口Edit按钮，切换到编辑模式。)信息，跳过这一步 ，删除所有行。Delete Row选中所有列，鼠标右键单击，选择 单击View按钮，切换到查看模式。 出现对话框，直接单击确定。这样就将以前的信

12、息清除掉了。 6( 单击工具栏Data Analysis Parameters图标。 出现数据分析参数编辑窗口，选择Curve类型为三次方曲线。 单击GPC Calculation标签。 采用窄分布校正法时，在上图Q Factor一栏输入RQF值(Q因子比)。 采用普适校正法时，在上图Viscosity栏中输入标样的和K值。并点击Calibration Curve 值。K和，输入样品的settings，点击Mark-Houwink标签，选中 将GPC Calculation选项打勾。单击确定。 出现窗口，直接单击确定。 7( 单击Chromatogram View窗口的Multi view标签

13、，切换到显示多色谱图界面。 单击Data Explorerer窗口的Data标签，显示所有的数据文件。 选中001-004这四个数据文件。 将选中的四个数据文件拖到Multi View窗口中，同时显示四个色谱图的八个 峰。 8( 单击校准表查看窗口的Edit按钮，切换到编辑模式。 单击校准表查看窗口右下角的Pick up按钮。 出现GPC Method Edit窗口，单击All peaks按钮选择所有积分出来的峰。 按钮，新建校准表。New单击 校准表中出现所有峰的保留时间，检查确认是否正确。 输入各个峰所对应的分子量。 单击View按钮。 Calibration Curve View出现制作

14、好的校准曲线图谱和方程。 9( 单击工具栏Save按钮，保存方法文件。 出现对话框，单击是。 3.2. 样品平均分子量计算 1( 双击打开未知品数据文件GPC_Data-005。 单击Method标签。 方法拖到右边的色谱图窗口中，加载方法参数。GPC_test将刚才保存的 出现选择方法参数对话框，直接单击OK。 2( 单击工具栏Molecular Weight Distribution按钮。 查看分子量计算结果。 按钮查看数据文件中的报告。Data Report单击助手栏3( 显示包含在数据文件中的报告。 单击File菜单，打开报告格式文件，可以修改报告格式。 选择Calculation Results目录。(该目录中存放的都是针对单个GPC数据文) 件的报告模板 选择如图所示的报告格式文件。(共有四种不同格式的报告格式文件可供选择) 单击助手栏Preview按钮。 在打印前预览报告。单击打印按钮，就可以打印出报告。