注射用比伐卢定药液微生物方法学验证方案.docx
《注射用比伐卢定药液微生物方法学验证方案.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《注射用比伐卢定药液微生物方法学验证方案.docx（18页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
注射用比伐卢定药液微生物方法学验证方案
项目
人员Item
Personnel
部门/岗位Dept./Position
签名
Signature
日期
Date
方案起草
Preparedby
QC/检验员
年月日
（Y）（M）（D）
方案审核
Reviewedby
QC/经理助理
年月日
（Y）（M）（D）
QA/副经理
年月日
（Y）（M）（D）
QA/经理
年月日
（Y）（M）（D）
方案批准
Approvedby
质量受权人
年月日
（Y）（M）（D）
颁发部门
Issuedby
QA
生效日期
EffectiveDate
年月日
（Y）（M）（D）
分发部门
Distributedto
QC
制作备份：
1份
Copiesprepared:
1pcs
1.概述
对于非最终灭菌产品，由于除菌过滤是最终和唯一的除菌手段，所以对除菌过滤前药液的微生物污染更需严格控制。
根据《微生物负荷监测标准操作规程》（SOP-QA--V00），新建车间除菌过滤前药液需要定期监测微生物负荷量，标准为：
≤10cfu/100ml。
注射用比伐芦定是我公司的冻干制剂，2013年拟在新建207车间生产。
为实现车间投产后药液的同步检验，现提前进行微生物限度检查方法验证，确定检查方法。
根据文件要求，药液日常监测的取样位置为除菌过滤前，注射用比伐芦定药液通过两级0.22μm滤芯过滤进入无菌区，两级滤芯均视为除菌过滤，故应在第一级滤芯前取样。
因207车间仍在筹建之中，实验用样品只能在203车间或实验室配制，药液成分、浓度应与正式投产一致。
2.目的
根据《中国药典》2010年版确定注射用比伐芦定药液微生物限度检查方法。
3.依据及参考文件
3.1《中国药典》2010年版二部附录
J“微生物限度检查法”
3.2《中国药品检验标准操作规》2010年版“微生物限度检查法”
3.3《药品GMP指南》2011年版“无菌药品”
3.4SOP-QC-0213-V01《微生物限度检查法》
3.5SOP-QA-017-V01《验证管理规程》
4.验证小组和各部门职责
4.1验证小组及对应职责
职位
XX
部门
具体职责
组长
代珊
QC
验证总协调工作，并审核验证的数据
组员
常磊
QC
负责验证方案和验证报告的起草，负责验证数据的收集，负责检品的检测与验证记录的填写。
辛海安
QC
负责检品的检测与验证记录的填写。
许维雅
林明凤
朱利安
利
彭艳妃
QC
监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。
吴东琴
QA
负责验证方案和验证报告的归档保存。
监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。
4.2验证委员会
XX
职务
职责
颜杰
质量受权人
1.负责验证方案及报告的批准；
2.负责验证过程中出现的偏差/OOS的批准放行。
定
QA经理
1.负责验证方案及报告的审核；
2.负责验证过程中出现的偏差/OOS的评估。
德志
QA副经理
5.验证时间安排
时间
工作容
2013年01月
方案起草、审批
2013年01月~03月
标准确认、检验方法确认
2013年03月
完成报告
6.验证容
6.1验证前准备
6.1.1培训确认
本次验证容是否已对相关人员进行培训，检查确认结果记录在附件1《培训确认》。
6.1.2文件确认
本次验证前验证方案及相关指导的SOP是否已经批准。
检查确认结果记录在附件2《文件检查确认》。
如无相关文件，则需要增加发放。
6.1.3仪器设备确认
检查所涉及的设备是否符合实验要求，确认结果填写在附件3《设备确认结果》中。
可接受标准：
设备应经验证，在校准有效期。
6.1.4试验器材确认
检查所涉用试验器材，确认结果填写在附件4《试验器材确认结果》中，可接受标准：
试验器材各配件应齐全，无损坏。
6.1.5试验用菌种确认
检查所涉及的试验用菌种是否符合实验要求，确认结果填写在附件5《试验用菌种确认结果》中。
可接受标准：
菌种形态特征应良好、菌种代数不得超过第五代。
6.1.6培养基确认
检查所涉及的培养基是否符合实验要求，确认结果填写在附件6《培养基确认结果》。
可接受标准：
培养基应在有效期，应做适用性检查；因目前中国食品药品检定研究院（原中国药品生物制品检定所）没有改良马丁琼脂对照培养基，所以未对改良马丁琼脂培养基进行适应性检查，此次确认只确认该培养其应在有效期。
6.1.7试剂确认
检查所涉用试剂是否符合实验要求，确认结果填写在附件7《试剂确认结果》中。
可接受标准：
试剂应在有效期。
6.1.8器皿确认
检查所涉用器皿是否符合实验要求。
确认结果填写在附件8《器皿确认记录》中。
可接受标准：
一般玻璃器皿要求洁净，无破损，量器要进行校正。
6.1.9验证用培养基、缓冲液、平皿、刻度吸管应置121℃湿热灭菌30分钟。
6.2验证方法
6.2.1菌液制备：
取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中经30~35℃培养18～24小时、白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中经23~28℃培养24~48小时，分别加入0.9%无菌氯化钠溶液10ml洗下菌苔转移至空试管中作为菌悬液原液，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至含菌数50~100cfu/ml的菌悬液。
取黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中经23~28℃培养5~7天，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的0.9%无菌氯化钠溶液10ml洗下孢子吸出，转移至空试管中作为菌悬液原液，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至含孢子数50~100cfu/ml的孢子悬液。
6.2.2菌液计数：
分别取上述5种菌液1ml（50～100cfu）加入培养皿，注入不超过45℃胰酪胨大豆琼脂培养基15～20ml，每种菌液作平行2个平板，于30～35℃倒置培养24~72小时，测定菌数。
6.2.3总菌落数回收率测定：
验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并计算各试验菌每次试验的回收率。
要求回收率不低于70%。
具体拟定方法如下：
6.2.3.1试验组：
先用20mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液加入过滤器中，以润湿滤膜。
取注射用比伐芦定药液100ml，过滤，再用100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，在冲洗液加入1ml试验用菌液（含50~100cfu试验菌），滤干，每种菌平行制备2膜，将滤膜菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平板上培养，置23~28℃倒置培养3天，培养结束后，转移至30～35℃培养2天，测定菌数。
6.2.3.2菌液组：
测定所加的试验菌数。
6.2.3.3供试品对照组：
制备方法同试验组，不加验证菌液。
6.2.3.4稀释剂对照组：
用相应的稀释液替代供试品，按试验组的制备方法和菌落计数法测定菌数。
试验结果：
结果见《总菌落数计数验证结果记录》
6.2.3.5结果判断：
稀释剂对照组的菌回收率均应不低于70%。
若试验组的菌回收率均不低于70%，则可按该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌或酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，采取加大冲洗量或其它方法重新验证。
注：
试验组回收率（%）=（试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数）÷菌液组平均菌落数×100%
稀释剂对照组回收率（%）=稀释剂对照组平均菌落数÷菌液组平均菌落数×100%
6.2.3.6结果统计
实验结果填写在《总菌落数计数验证结果记录》。
7.偏差处理及变更控制
确认过程中如果有任何偏差应及时记录，分析原因，评价是否是重大偏差，并提出整改措施。
重大偏差填写《偏差处理单》，并将偏差复印件附于确认报告中。
确认过程中是否有变更，如有变更将变更再确认报告中进行说明。
8.验证结果评价容
对验证结果进行综合评价，容包括但不限于：
确认实验是否有遗漏；确认验证过程中是否有偏差，偏差是否已经采取纠偏措施和预防措施；确认记录是否完整；是否需要进一步补充实验。
评价必须以书面形式写出报告。
附件1：
《培训确认》
培训确认
培训人/
日期
培训对象
部门
职责
签名
代珊
QC
验证总协调工作，并审核验证的数据
彭艳妃
QC
监督验证过程实施及验证过程中的偏差及
OOS处理。
辛海安
QC
负责检品的检测与验证记录的填写。
许维雅
QC
林明凤
QC
朱利安
QC
利
QC
袁文静
QC
吴东琴
QA
负责验证方案和验证报告的归档保存。
监督验证
过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。
评价：
确认人/日期：
QA复核人/日期：
附件2：
《文件检查确认》
文件检查确认
文件名称
文件编号
是否已批准
生测室管理规程
SOP-QC-005-V02
□是□否
培养基管理规程
SOP-QC-017-V01
□是□否
菌种管理规程
SOP-QC-012-V02
□是□否
XG1.D型脉动真空灭菌柜使用、保养标准操作规程
SOP-QC-0343-V01
□是□否
培养箱使用和维护保养标准操作规程
SOP-QC-303-V00
□是□否
电子天平使用标准操作规程
SOP-QC-317-V01
□是□否
洁净工作台使用及维护保养标准操作规程
SOP-QC-304-V00
□是□否
生物安全柜使用、保养标准操作规程
SOP-QC-0386-V00
□是□否
Haier药品保存箱使用及保养标准操作规程
SOP-QC-0395-V00
□是□否
红外电热灭菌器使用、保养标准操作规程
SOP-QC-0389-V00
□是□否
评价：
确认人/日期：
QA复核人/日期：
附件3：
《设备确认结果》
设备确认结果
设备名称
型号
生产厂家及出厂编号
校准有效期至
验证编号
霉菌培养箱
MJ-300BS-II
XX新苗医疗器械制造XX（0812240005）
霉菌培养箱
MJ-300BS-II
XX新苗医疗器械制造XX（1005240001）
生化培养箱
SPX-300BS-II
XX新苗医疗器械制造XX（0405011）
电热恒温培养箱
DHP-9162
XX一恒科技XX（035184）
脉动真空灭菌柜
XG1.DTX-0.36B
新华医疗器械股份XX（20100955）
脉动真空灭菌柜
XG1.DTX-0.36B
新华医疗器械股份XX（20100953）
生物安全柜
BSC-1600ⅡA2
安泰空气技术XX（J10060420）
生物安全柜
BSC-1600ⅡA2
安泰空气技术XX（J10060421）
生物安全柜
BSC-1300ⅡA2
安泰空气技术XX（J10050341）
电子天平
PB602-N
梅特勒-托利多仪器XX（1201130089）
评价：
确认人/日期：
QA复核/日期：
附件4：
《试验器材确认结果》
试验器材确认结果
名称
型号
来源
检查项目及
标准
检查结果
微孔滤膜
孔径0.45μm，直径50mm
高得泰林XX
完整，无破损
封闭式无菌检查薄膜过滤器
STV2、
STV3型
XX白石药检仪器厂
完整，洁净，
无破损
评价：
确认人/日期：
QA复核人/日期：
附件5：
《试验用菌种确认结果》
试验用菌种确认结果
菌种名称及编号
来源
保存方法
及条件
菌种代数（不得超过第五代）/形态特征
金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]
中国药品生物制品检定所
培养基斜面2-8℃
大肠埃希菌[CMCC（B）44102]
中国药品生物制品检定所
培养基斜面2-8℃
枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]
中国药品生物制品检定所
培养基斜面2-8℃
白色念珠菌[CMCC（F）98001]
市药品检验所
培养基斜面2-8℃
黑曲霉
[CMCC（F）98003]
市药品检验所
培养基斜面2-8℃
评价：
确认人/日期：
QA复核人/日期：
附件6：
《培养基确认结果》
培养基确认结果
培养基名称
来源
检查项目
及标准
批号/有效期至/检查结果
营养琼脂培养基
三药科技开发公司
1.应在有效期
2.应做适用性检查
胰酪胨大豆琼脂培养基
三药科技开发公司
1.应在有效期
2.应做适用性检查
改良马丁琼脂
培养基
三药科技开发公司
应在有效期
评价：
确认人/日期：
QA复核人/日期：
培养基名称
来源
检查项目
及标准
批号/有效期至/检查结果
营养琼脂培养基
三药科技开发公司
1.应在有效期
2.应做适用性检查
胰酪胨大豆琼脂培养基
牛牛基因技术XX
1.应在有效期
2.应做适用性检查
改良马丁琼脂
培养基
三药科技开发公司
应在有效期
评价：
确认人/日期：
QA复核人/日期：
附件7：
《试剂确认结果》
试剂确认结果
试剂名称
规格
来源
检查项目及标准
批号/有效期至
pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
250g/瓶
三药科技开发公司
应在有效期
氯化钠
500g/瓶
化学试剂厂
应在有效期
新洁尔灭溶液
500ml/瓶
恒健制药XX
应在有效期
洗必泰
5kg/箱
九泰制药XX公司
应在有效期
吐温80
500ml/瓶
XX市大茂化学试剂厂
应在有效期
评价：
确认人/日期：
QA复核人/日期：
附件8：
《器皿确认结果》
器皿确认结果
容器名称
规格型号
检查项目
及标准
检查结果
培养皿
Φ9cm
洁净，无破损
烧杯
1000ml、500ml
洁净，无破损
蓝盖瓶
500ml、250ml、100ml
洁净，无破损
试管
18mm×180mm、
30mm×200mm
洁净，无破损
刻度吸管
10ml、5ml、2ml、1ml
洁净，无破损
量筒
500ml、100ml
洁净，无破损
应校准
评价：
确认人/日期：
QA复核人/日期：
附件9：
《总菌落数计数验证结果记录》
总菌落数计数验证结果记录
检品名称：
批号：
验证日期：
检验方法：
试验菌种
菌种编号
菌液组
（验证加菌数）
试验组
（检品+验证加菌数）
稀释剂对照组
（稀释剂+验证加菌数）
供试品对照组
（检品本底菌数）
试验组菌回收率%
稀释剂对照组菌回收率%
皿1
皿2
平均
皿1
皿2
平均
皿1
皿2
平均
皿1
皿2
平均
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
备注：
试验组的回收率（%）=（试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数）÷菌液组的平均菌落数×100%
稀释剂对照组的回收率（%）=稀释剂对照组的平均菌落数÷菌液组的平均菌落数×100%
回收率应不低于70%
结果评定：
检验人/日期：
复核人/日期：
附件10：
《检验记录》
检验记录
品名：
注射用比伐芦定药液批号：
来源：
实验环境：
℃、RH%
检验标准：
《中国药典》2010年版二部检验日期：
年月日
1.仪器
细菌培养箱型号（编号）：
；校准有效期至：
霉菌培养箱型号（编号）：
；校准有效期至：
2.试液、培养基
培养基名称：
胰酪胨大豆琼脂培养基配制编号：
有效期至：
试液名称：
pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液配制编号：
有效期至：
标准规定：
总菌落数不得过10cfu/100ml。
3.检验方法：
薄膜过滤法
先用20mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液加入过滤器中，以润湿滤膜。
取本品100ml，过滤，再用100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗。
阴性对照：
取相应稀释液，不过滤供试液，其它操作同上，阴性对照不得长菌。
4.总菌落数计数结果
总菌落数培养：
在23～28℃培养3天，培养时间日时至日时；培养3天结束后，转移至30～35℃培养2天，培养时间日时至日时。
名称
供试液
阴性对照
培养24h
培养48h
培养72h
培养96h
培养120h
测定结果
总菌落数：
cfu/100ml
备注
检验结论：
□符合规定；□不符合规定。
培养24h
记录人/日期
培养48h
记录人/日期
培养72h
记录人/日期
培养96h
记录人/日期
培养120h
记录人/日期
检验人/日期：
复核人/日期：
升级会员 