注射用比伐卢定药液微生物方法学验证方案.docx

1、注射用比伐卢定药液微生物方法学验证方案项目人员 ItemPersonnel部门/岗位Dept./Position签名Signature日期Date方案起草Prepared byQC/检验员年月日 (Y) (M) (D) 方案审核Reviewed byQC/经理助理年月日 (Y) (M) (D)QA/副经理年月日 (Y) (M) (D)QA/经理年月日 (Y) (M) (D)方案批准Approved by质量受权人年月日 (Y) (M) (D)颁发部门Issued byQA生效日期Effective Date年月日 (Y) (M) (D)分发部门Distributedto QC制作备份：1份Co

2、pies prepared: 1pcs1.概述对于非最终灭菌产品，由于除菌过滤是最终和唯一的除菌手段，所以对除菌过滤前药液的微生物污染更需严格控制。根据微生物负荷监测标准操作规程（SOP-QA-V00），新建车间除菌过滤前药液需要定期监测微生物负荷量，标准为：10cfu/100ml。注射用比伐芦定是我公司的冻干制剂，2013年拟在新建207车间生产。为实现车间投产后药液的同步检验，现提前进行微生物限度检查方法验证，确定检查方法。根据文件要求，药液日常监测的取样位置为除菌过滤前，注射用比伐芦定药液通过两级0.22m滤芯过滤进入无菌区，两级滤芯均视为除菌过滤，故应在第一级滤芯前取样。因207车间仍

3、在筹建之中，实验用样品只能在203车间或实验室配制，药液成分、浓度应与正式投产一致。2.目的根据中国药典2010年版确定注射用比伐芦定药液微生物限度检查方法。3.依据及参考文件3.1中国药典2010年版二部附录J“微生物限度检查法”3.2中国药品检验标准操作规2010年版“微生物限度检查法”3.3药品GMP指南2011年版“无菌药品”3.4SOP-QC-0213-V01微生物限度检查法3.5 SOP-QA-017-V01验证管理规程4.验证小组和各部门职责4.1验证小组及对应职责职位XX部门具体职责组长代珊QC验证总协调工作，并审核验证的数据组员常磊QC负责验证方案和验证报告的起草，负责验证数

4、据的收集，负责检品的检测与验证记录的填写。辛海安QC负责检品的检测与验证记录的填写。许维雅林明凤朱利安利彭艳妃QC监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。吴东琴QA负责验证方案和验证报告的归档保存。监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。4.2验证委员会XX职务职责颜杰质量受权人1.负责验证方案及报告的批准；2.负责验证过程中出现的偏差/OOS的批准放行。定QA经理1.负责验证方案及报告的审核；2.负责验证过程中出现的偏差/OOS的评估。德志QA副经理5.验证时间安排时间工作容2013年01月方案起草、审批2013年01月03月标准确认、检验方法确认2013年03月完成报告6.

5、验证容6.1验证前准备6.1.1培训确认本次验证容是否已对相关人员进行培训，检查确认结果记录在附件1培训确认。6.1.2文件确认本次验证前验证方案及相关指导的SOP是否已经批准。检查确认结果记录在附件2文件检查确认。如无相关文件，则需要增加发放。6.1.3仪器设备确认检查所涉及的设备是否符合实验要求，确认结果填写在附件3 设备确认结果中。可接受标准：设备应经验证，在校准有效期。6.1.4试验器材确认检查所涉用试验器材，确认结果填写在附件4试验器材确认结果中，可接受标准：试验器材各配件应齐全，无损坏。6.1.5试验用菌种确认检查所涉及的试验用菌种是否符合实验要求，确认结果填写在附件5 试验用菌种

6、确认结果中。可接受标准：菌种形态特征应良好、菌种代数不得超过第五代。6.1.6培养基确认检查所涉及的培养基是否符合实验要求，确认结果填写在附件6 培养基确认结果。可接受标准：培养基应在有效期，应做适用性检查；因目前中国食品药品检定研究院（原中国药品生物制品检定所）没有改良马丁琼脂对照培养基，所以未对改良马丁琼脂培养基进行适应性检查，此次确认只确认该培养其应在有效期。6.1.7试剂确认检查所涉用试剂是否符合实验要求，确认结果填写在附件7试剂确认结果中。可接受标准：试剂应在有效期。6.1.8器皿确认检查所涉用器皿是否符合实验要求。确认结果填写在附件8器皿确认记录中。可接受标准：一般玻璃器皿要求洁净

7、，无破损，量器要进行校正。6.1.9验证用培养基、缓冲液、平皿、刻度吸管应置121湿热灭菌30分钟。6.2验证方法6.2.1菌液制备：取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中经3035培养1824小时、白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中经2328培养2448小时，分别加入0.9%无菌氯化钠溶液10ml洗下菌苔转移至空试管中作为菌悬液原液，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至含菌数50100cfu/ml的菌悬液。取黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中经2328培养57天，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的0.9%无菌氯化钠溶液10ml洗

8、下孢子吸出，转移至空试管中作为菌悬液原液，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至含孢子数50100cfu/ml的孢子悬液。6.2.2菌液计数：分别取上述5种菌液1ml（50100cfu）加入培养皿，注入不超过45胰酪胨大豆琼脂培养基1520ml，每种菌液作平行2个平板，于3035倒置培养2472小时，测定菌数。6.2.3总菌落数回收率测定：验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并计算各试验菌每次试验的回收率。要求回收率不低于70%。具体拟定方法如下：6.2.3.1试验组：先用20ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液加入过滤器中，以润湿滤膜。取注射用比伐

9、芦定药液100ml，过滤，再用100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，在冲洗液加入1ml试验用菌液（含50100cfu试验菌），滤干，每种菌平行制备2膜，将滤膜菌面朝上贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平板上培养，置2328倒置培养3天，培养结束后，转移至3035培养2天，测定菌数。6.2.3.2菌液组：测定所加的试验菌数。6.2.3.3供试品对照组：制备方法同试验组，不加验证菌液。6.2.3.4稀释剂对照组：用相应的稀释液替代供试品，按试验组的制备方法和菌落计数法测定菌数。试验结果：结果见总菌落数计数验证结果记录6.2.3.5结果判断：稀释剂对照组的菌回收率均应不低于70%。若试验组的菌回收率

10、均不低于70%，则可按该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌或酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，采取加大冲洗量或其它方法重新验证。注：试验组回收率（%）=（试验组平均菌落数供试品对照组平均菌落数）菌液组平均菌落数100%稀释剂对照组回收率（%）= 稀释剂对照组平均菌落数菌液组平均菌落数100%6.2.3.6结果统计实验结果填写在总菌落数计数验证结果记录。7. 偏差处理及变更控制确认过程中如果有任何偏差应及时记录，分析原因，评价是否是重大偏差，并提出整改措施。重大偏差填写偏差处理单，并将偏差复印件附于确认报告中。确认过程中是否有变更，如有变更将变更再确认报告中进行说明。

11、8.验证结果评价容对验证结果进行综合评价，容包括但不限于：确认实验是否有遗漏；确认验证过程中是否有偏差，偏差是否已经采取纠偏措施和预防措施；确认记录是否完整；是否需要进一步补充实验。评价必须以书面形式写出报告。附件1 ：培训确认培训确认培训人/日期培训对象部门职责签名代珊QC验证总协调工作，并审核验证的数据彭艳妃QC监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。辛海安QC负责检品的检测与验证记录的填写。许维雅QC林明凤QC朱利安QC利QC袁文静QC吴东琴QA负责验证方案和验证报告的归档保存。监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。评价：确认人/日期： QA复核人/日期：附件2：文件检

12、查确认文件检查确认文件名称文件编号是否已批准生测室管理规程SOP-QC-005-V02是否培养基管理规程SOP-QC-017-V01是否菌种管理规程SOP-QC-012-V02是否XG1.D型脉动真空灭菌柜使用、保养标准操作规程SOP-QC-0343-V01是否培养箱使用和维护保养标准操作规程SOP-QC-303-V00是否电子天平使用标准操作规程SOP-QC-317-V01是否洁净工作台使用及维护保养标准操作规程SOP-QC-304-V00是否生物安全柜使用、保养标准操作规程SOP-QC-0386-V00是否Haier 药品保存箱使用及保养标准操作规程SOP-QC-0395-V00是否红外电

13、热灭菌器使用、保养标准操作规程SOP-QC-0389-V00是否评价：确认人/日期： QA复核人/日期：附件3 ：设备确认结果设备确认结果设备名称型号生产厂家及出厂编号校准有效期至验证编号霉菌培养箱MJ-300BS-IIXX新苗医疗器械制造XX(0812240005)霉菌培养箱MJ-300BS-IIXX新苗医疗器械制造XX(1005240001)生化培养箱SPX-300BS-IIXX新苗医疗器械制造XX（0405011）电热恒温培养箱DHP-9162XX一恒科技XX（035184）脉动真空灭菌柜XG1.DTX-0.36B新华医疗器械股份XX（20100955）脉动真空灭菌柜XG1.DTX-0.

14、36B新华医疗器械股份XX（20100953）生物安全柜BSC-1600A2安泰空气技术XX（J10060420）生物安全柜BSC-1600A2安泰空气技术XX（J10060421）生物安全柜BSC-1300A2安泰空气技术XX（J10050341）电子天平PB602-N梅特勒-托利多仪器XX（1201130089）评价：确认人/日期： QA复核/日期：附件4：试验器材确认结果试验器材确认结果名称型号来源检查项目及标准检查结果微孔滤膜孔径0.45m，直径50mm高得泰林XX完整，无破损封闭式无菌检查薄膜过滤器STV2、STV3型XX白石药检仪器厂完整，洁净，无破损评价：确认人/日期： QA复核

15、人/日期：附件5：试验用菌种确认结果试验用菌种确认结果菌种名称及编号来源保存方法及条件菌种代数（不得超过第五代）/形态特征金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003中国药品生物制品检定所培养基斜面2-8大肠埃希菌CMCC（B）44102中国药品生物制品检定所培养基斜面2-8枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501中国药品生物制品检定所培养基斜面2-8白色念珠菌CMCC（F）98001市药品检验所培养基斜面2-8黑曲霉CMCC（F）98003市药品检验所培养基斜面2-8评价：确认人/日期： QA复核人/日期：附件6：培养基确认结果培养基确认结果培养基名称来 源检查项目及标准批号/有效期至/检查结果营养琼

16、脂培养基三药科技开发公司1.应在有效期2.应做适用性检查胰酪胨大豆琼脂培养基三药科技开发公司1.应在有效期2.应做适用性检查改良马丁琼脂培养基三药科技开发公司应在有效期评价：确认人/日期： QA复核人/日期： 培养基名称来源检查项目及标准批号/有效期至/检查结果营养琼脂培养基三药科技开发公司1.应在有效期2.应做适用性检查胰酪胨大豆琼脂培养基牛牛基因技术XX1.应在有效期2.应做适用性检查改良马丁琼脂培养基三药科技开发公司应在有效期评价：确认人/日期： QA复核人/日期：附件7：试剂确认结果试剂确认结果试剂名称规格来源检查项目及标准批号/有效期至pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液250g/瓶三药科

17、技开发公司应在有效期氯化钠500g/瓶化学试剂厂应在有效期新洁尔灭溶液500ml/瓶恒健制药XX应在有效期洗必泰5kg/箱九泰制药XX公司应在有效期吐温80500ml/瓶XX市大茂化学试剂厂应在有效期评价：确认人/日期： QA复核人/日期：附件8：器皿确认结果器皿确认结果容器名称规格型号检查项目及标准检查结果培养皿9cm洁净，无破损烧杯1000ml、500ml洁净，无破损蓝盖瓶500ml、250ml、100ml洁净，无破损试管18mm180mm、30 mm200mm洁净，无破损刻度吸管10 ml、5 ml、2 ml、1ml洁净，无破损量筒500ml、100ml洁净，无破损应校准评价：确认人/日

18、期： QA复核人/日期：附件9：总菌落数计数验证结果记录总菌落数计数验证结果记录检品名称：批号：验证日期：检验方法：试验菌种菌种编号菌液组（验证加菌数）试验组（检品+验证加菌数）稀释剂对照组（稀释剂+验证加菌数）供试品对照组（检品本底菌数）试验组菌回收率%稀释剂对照组菌回收率%皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿2平均金黄色葡萄球菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉备注：试验组的回收率（%）=（试验组平均菌落数供试品对照组平均菌落数）菌液组的平均菌落数100%稀释剂对照组的回收率（%）=稀释剂对照组的平均菌落数菌液组的平均菌落数100%回收率应不低于70%结果评定：检验人/日期：复核

19、人/日期：附件10：检验记录检验记录品名：注射用比伐芦定药液批号：来源：实验环境：、RH %检验标准：中国药典2010年版二部检验日期：年月日1.仪器细菌培养箱型号（编号）：；校准有效期至：霉菌培养箱型号（编号）：；校准有效期至：2.试液、培养基培养基名称：胰酪胨大豆琼脂培养基配制编号：有效期至：试液名称： pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液配制编号：有效期至：标准规定：总菌落数不得过10cfu/100ml。3.检验方法：薄膜过滤法先用20ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液加入过滤器中，以润湿滤膜。取本品100ml，过滤，再用100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗。阴性对照：取相应稀释液，不过滤供试液，其它操作同上，阴性对照不得长菌。4. 总菌落数计数结果总菌落数培养：在2328培养3天，培养时间日时至日时；培养3天结束后，转移至3035培养2天，培养时间日时至日时。名称供试液阴性对照培养24h培养48h培养72h培养96h培养120h测定结果总菌落数： cfu/100ml备注检验结论：符合规定；不符合规定。培养24h记录人/日期培养48h记录人/日期培养72h记录人/日期培养96h记录人/日期培养120h记录人/日期检验人/日期：复核人/日期：