香菇菌种生产的方法与步骤.docx

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香菇菌种生产的方法与步骤

香菇菌种生产得方法与步骤

（一）母种生产培养基得配方选择

一就是马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA）:

去皮马铃薯20０克,葡萄糖2０克，琼脂16～2３克，水10０0毫升。

氢离子浓度１０00~10000纳摩/升（pH５~6）,用于分离、培养菌种。

二就是PＤA改良培养基（甲）:

马铃薯（去皮）20０克,葡萄糖20克,磷酸二氢钾（KH2PＯ4）2克,硫酸镁（ＭｇSＯ4）0.5克,维生素Ｂ11０毫克,琼脂20克，水10００毫升，灭菌后氢离子浓度31６３～10000纳摩／升（pH5。

0~５。

5）,用于培养、分离菌种。

   三就是PDA改良培养基（乙）：

马铃薯（去皮）2００克,麸皮或米糠50克，硫酸镁０。

５克,维生素B１10毫克,琼脂20克,灭菌后氢离子浓度31６3～39８1纳摩／升（pH５.４～5．５）.

   四就是PＤA改良培养基（丙）：

心材木２0０克,细米糠（或麸皮）10０克,硫酸铵1克,麦芽糖（或葡萄糖）20克,琼脂2０克，水10０0毫升,灭菌后氢离子浓度３1６3~1０００0纳摩／升

（ｐH5、0~５、5）,用于分离菌种.

   五就是麦芽浸膏、酵母浸膏、琼脂培养基（MYD）:

麦芽浸膏3克,葡萄糖10克，酵母浸膏3克,琼脂２0克,蛋白胨5克,水1　0０0毫升（用于菌种培养）。

   　六就是麦芽浸膏、蛋白胨培养基（MPA）:

麦芽浸膏2０~25克,蛋白胨1０克,琼脂20克,水１　000毫升（用于分离、培养、保存菌种）。

   上述6个培养基配方中,马铃薯、葡萄糖、琼脂（PDA）配方应用最普遍。

在此着重介绍PＤA培养基得配制方法与步骤:

   　１。

制备培养基得操作程序

   选择优质马铃薯,去皮或挖去发芽眼，削去发青皮,切成薄片，称取200克，置于钢精锅，加水１0０0毫升，煮沸后小火保持30分钟,趁热用8层纱布过滤后放人有1000毫升刻度得量杯（或量筒）中,补充水到１　００0毫升,倒回钢精锅,加琼脂继续加热,待琼脂溶化后,再加葡萄糖,再补水至1000毫升,用玻璃棒搅均匀,趁热分装试管,或装入三角瓶备用.

   　2．分装试管

   将配制好得PＤA培养基，趁热（6０℃）倒人事先准备好得量杯或玻璃漏斗,分装试管。

每支试管装培养基为管长得１/4，培养液不可贴附管口内壁,如有沾附物必须揩拭干净。

   3。

做棉塞

   取适量棉花做成较紧实得棉塞，塞入试管约2厘米左右，外留1厘米,紧贴试管内壁,松紧度以用手指提起棉塞而不脱掉为宜,光圆不起皱（如图3-1）,尔后将试管放入铁丝筐内。

   ４.灭 菌

   将装有培养基得试管放人灭菌锅得铁丝筐内,上面盖上牛皮纸或聚丙烯塑料薄膜,包扎好,以防棉塞受潮。

加热灭菌时,排尽锅内得冷气，当温度升到121℃时，维持3０分钟后停止加热。

待指针回到零点,先打开锅盖得1/10开度,等到无直冲蒸气时,再打开全部锅盖,取出试管。

   ５.在斜面上摆放试管

   将取出得试管冷却到50～6０℃后，放到用木架或木条摆成一定角度得斜面上,小试管斜面长2厘米，大试管（１8×２00）斜面长6厘米左右.待完全凝固后,收取备用。

   ６.灭菌效果检查

   随机取3管斜面,放在２８℃下进行空白培养5～７天后，检查斜面上有无细菌与霉菌菌落。

如果发现有杂菌,说明灭菌不彻底，要重新灭菌。

（二）接种与培养

   　1。

接 种

   在无菌室（接种室）或接种箱内,酒精灯火焰旁进行无菌操作。

具体程序如下:

左手拿菌种管与待接种得斜面试管,右手拿接种耙,在火焰上来回烧红,拔去菌种管得棉塞，将管口在火焰上烧一下,再把接种耙烧一下，迅速插入种管,稍加冷却,切取米粒大小菌丝块（一定要带培养基）,迅速放入待接种管斜面中心位置（为争取时间，在斜面接两点以上为宜）,拿出接种耙后,再把管口烘烤一下,烧一下棉塞，迅速塞好棉塞,灼烧一下接种耙。

到此即完成了一个接种程序,以下依此类推。

   2．培 　养

   将接种后得试管,放入培养箱或培养室进行恒温培养（25℃±1℃），或利用适宜得自然气温培养.要保证培养室空气新鲜，环境干净,无光或弱光。

为此，必须保持空气相对湿度

70％左右，在试管上盖上纱布,或盖上薄棉毯，拉上窗帘,形成无光培养。

因试管斜面长短不同，一般需经8~１4天培养,才能长满试管斜面.

   （三）母种质量检查及提高纯度对策

   　１.斜面优质菌丝形态

   在马铃薯、葡萄糖、琼脂（PＤＡ）培养基斜面上，菌丝生长洁白,呈棉绒状,密度一致,前沿菌丝（先端）整齐，粗壮.有得棉绒状菌丝发达,如苏香1号,Cr-02;有得棉绒状菌丝不发达，如27１A,2７1B，早生一号。

后者比前者菌丝生长快，但菌龄较长。

   2.斜面菌丝不纯现象

   在斜面上菌丝灰白,棉毛菌丝不平坦不整齐,前沿菌丝不齐、有缺口,这说明有杂菌污染。

如斜面上有异色,可能就是镰刀菌污染。

如斜面上特别就是菌丝边缘出现粘稠状物即蜡状、油状，可能就是细菌污染。

如斜面上呈黄、绿、黑等颜色，则可肯定就是霉菌污染。

若斜面产生色素，也表明有杂菌污染.将斜面对着光瞧背面,如有小黑点遮光,说明杂菌菌落被香菇菌丝覆盖了。

   ３．提高香菇母种纯度得措施

   　必须使培养基彻底灭菌,严格无菌操作,保持培养环境干燥、清洁、恒温、无光、空气流畅,从而保证菌丝健壮生长。

如发现母种有异常现象,应予剔除。

   二、原种生产与质量标准及保证对策

   原种与栽培种得培养料配方制作技术基本相同,只就是装料容器大小不同。

因此,本节只介绍原种生产技术,栽培种生产技术在相关章节中介绍.

（一）培养料配方选择

   共有7个配方可供选择,前3个为常用配方，后4个为参考配方。

①木屑78%,麸皮（或米糠）20%,蔗糖1%,石膏1%。

②木屑63％,棉籽壳20%,麸皮１5%,蔗糖１%，石膏

1％。

⑧木屑６0%，蔗渣18％,麸皮２0%,蔗糖１％，石膏1%。

④稻草（麦草）5８%，砻糠３0%,木屑１0％,糖1%，石膏１%。

⑤发酵松树、杉树木屑50％，木屑2８%,麸皮20%，糖1％,石膏１%．⑥棉籽壳４０％，木屑40%,麸皮1８%，糖1％,石膏1%。

⑦花生壳８0％，杂木屑1９％,石膏1%。

   上述７个配方都要求含水量在60%左右，氢离子浓度（pH值）随自然情况。

配方中各原料一般在3个月前备好。

（二）培养料配制得方法与步骤

   1.时间安排

   春、秋、冬季节皆可，晴天或阴天配料装瓶最为理想。

夏天宜在每天早、晚配料装瓶,应在4小时内装好瓶。

   ２。

生产组织

   　使用一台机器,由6人操作.其中1人向斗内铲料，1人装瓶，1人洗瓶,2人做棉塞,1人运输。

   3。

配料前得木屑处理

首先过筛（2~3目）,用竹筛或铁筛皆可,筛除掉有棱角得木块、木条、木片等硬物。

然后,按照生产计划与配方成分（百分率），称好主料、辅料与添加剂。

接着,将各种原料混合拌匀,有机器用机器拌，无机器用人工来回拌3～４次．最后,再加入适量得水，继续用机器拌3分钟或用人工拌3~4次。

对出现得团块一定要拍散，或用铁筛过筛.   

在配料过程中,需灵活掌握以下3点:

（1）灵活掌握含水量:

对干料、细料、质松料，加水宜多一些;对粒硬、吸水差得料，加水宜少一些。

在晴天、高温、秋千天气而水蒸发量较大时,加水宜多些；在阴雨、空气偏湿而水不易蒸发时，则加水宜少一些。

在水泥场地拌料，加水可少一些;在干泥渗水场地拌料,加水宜多一些。

在高海拔地区,加水宜多一些

   （２）拌料要均匀:

要做到主料、辅料、添加剂均匀，干湿均匀，酸碱度均匀,不结块。

   （3）操作要敏捷快速:

在气温2８℃,如拌料灭菌时间过长，则料易变酸，接种后轻则发菌慢，重则不发菌,而且易使杂菌病毒发生．因此，必须根据机械化水平与劳动者得技术熟练程度,安排好每日得生产量，保证适时快速装袋（瓶），及时灭菌。

在高温期间从拌料到灭菌，不能超过4小时;在低温期间从拌料到灭菌,要求不过夜。

（4）搞好环境卫生:

选用得原材料要无霉变，配料前要曝晒，拌料装瓶环境要清洁，尽量减少空气中得杂菌孢子率.  

 （三）装瓶（袋）

   使用机器装瓶,平均每人每日可装720多瓶。

具体操作程序如下:

装料至瓶颈，清洁瓶口，用小木棒或试管将料压实,并呈凹式，将瓶口内外壁洗净。

   　（四）做好棉塞

   取一块完整而略大于掌心得棉絮,其大小厚薄正好适合瓶口得大小长短，平摊在左掌心,右手捏住棉絮边缘往内卷成圆形,尔后用右手得拇指与中指相对捏住棉絮,接着用左手得

拇指与食指也相对捏住棉絮，再用右手趁势捏成棉球,塞人管口或瓶口2/３处．

   （五）灭菌

   　常用得高压灭菌锅分为立式或卧式两种。

在高度密封得高压锅内，通入高压蒸气，达到彻底灭菌得方法，称为高压蒸气灭菌,又叫湿热灭菌.原种与栽培种得培养料,由于不易被

蒸气穿透,灭菌时必须在150千帕即１．5千克/厘米2。

条件下灭菌2、0~2、5小时。

在灭菌得全过程中，要严格操作规程,并注意掌握3点:

①料瓶与料袋排放密度要适当,使蒸气流畅,无死角。

②通蒸气前，检查安全阀就是否灵活，有无故障.③通蒸气后,打开排气阀，驱散锅内冷空气（自身发生蒸气得高压锅应加足水）,或关上排气阀,接通蒸气。

待压力升至0、5千克/厘米。

时,开阀放气。

待指针回到０位时，保持5分钟,再关上排气阀。

等压力升到1、5千克／厘米。

时，灭菌２、0~2、5小时。

然后让其自然冷却,当压力指针回到0位时，打开锅盖或门得1/4开度，继续让热烘烤棉塞,防止骤冷。

接着趁热取出料瓶（袋）,送入清洁消毒过得冷却室。

   也可以用常压灭菌法,常用得就是灭菌灶或灭菌箱。

以低压蒸气进行灭菌得方法，称为常压蒸气灭菌法。

这种灭菌法投资省,可自行建造,取材容易，成本低廉，适用于农村。

缺点就是灭菌时间长，能耗大.常压灭菌法得具体操作程序就是：

①当点火发生蒸气时,打开放气阀排出冷空气，直至见到放出得直冲蒸气后，再排气5分钟，接着关上阀门，待气温升到1０0~102℃时,开始计时,连续保持8小时以上。

②料瓶叠放，瓶颈朝内,瓶底朝外。

料袋按品字形叠放,以求压力平衡。

行间要留有间隙。

③点火前,将铁锅内加足水．在灭菌得全过程中要注意铁锅内得水位，保持通水流畅,且水温较高。

④在灭菌得全过程中,火力应按猛攻→恒温→徐降得程序掌握。

即开始升温火力宜猛,尽快达到１00℃，防止升温缓慢，时间过长,引起原料变酸。

当温度升到100℃时，要保持温度不变，不能时高时低,以免影响灭菌效果。

当到达灭菌时间后,让仓（膛）内温度缓缓降低,直降至6０℃，方可开门取物.

（六）冷却接种 　①接种前必须使料瓶（袋）冷却到适宜温度,防止高温接种热死种菌。

接种前半小时,将原种瓶、接种工具及用品放入接种箱（或接种室）,然后用5　％石炭酸液向上下周壁喷雾消毒，并开启紫外线灯照射灭菌半小时。

启用久停不用得接种箱（室）,事先必须用高锰酸钾与甲醛薰蒸处理。

②接种时,操作人员进入接种室前,先用肥皂洗手,换工作服,戴上口罩与工作帽,穿上工作鞋,手在1％~2%来苏儿液或0、25％新洁尔灭液中浸泡2分钟.尔后,用５%石炭酸液,对接种室上下及四壁、工作台、凳等喷雾消毒，边喷边后退到缓冲室,关上接种室得门。

待5分钟后,将菌种带入室内进行接种操作。

③接种前１分钟，用７５%酒精擦手,严格无菌操作（同母种无菌操作法）,要求有序不乱，操作敏捷快速,减少室内空气流动。

接种时,将种管用脱脂棉蘸上7５%酒精,进行种管外壁消毒。

接着，拔取棉塞,用火焰烧一下管口（或瓶口）,把烧过得接种耙迅速插入种管内冷却.尔后将斜面前端1厘米长得菌丝块挖去，剩余斜面分成4~6段,分别取出接人原种瓶得穴位中心。

一管母种可接4~6瓶原种。

   （七）接种结束后得工作

   接种完成后,立即将台面收拾干净,将各种剩余物，如种管、洒落得培养基、消毒