软肝颗粒主要药效学实验+论文副本.docx
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软肝颗粒主要药效学实验+论文副本
湖南中医药高等专科学校
药学系2014届毕业论文
软肝颗粒主要药效学实验研究
学生姓名：
汤朵
学号：
2011A330128
指导教师：
李飞艳
专业：
中药制药技术
班级：
11级制药班
完成时间：
2013年12月
软肝颗粒主要药效学实验研究
中文摘要
目的：
主要研究软肝颗粒对于复合因素致大鼠肝纤维增生的影响，为其临床用于慢性肝炎，肝硬化提供实验依据。
方法：
采用60只大鼠，雌雄各半，按体重性别随机分为6组，每组10只。
除正常组外，各组均饲喂纯玉米粉，且前2周加20％猪油，混合0.5％胆固醇，并以30％乙醇为饮料。
于实验第一天每只动物需皮下注射40％CCL4植物油0.5mL/100g体重，每周一及周五注射2次40％CCL4植物油0.3mL/100g体重，给药组于实验第二天开始给药，并于第四周周末断头，断头前须眼眶取血。
取血清测其谷丙转氨酶含量，羟脯氨酸含量及SGPT的活性；并进行处理前称重，处死大鼠，取肝称重，计算脏器系数；得到的实验数据进行统计学处理。
[1]
结果：
软肝颗粒能显著降低肝纤维增生大鼠血SGPT活性，具有保护模型大鼠肝组织的作用；能显著降低肝纤维增生大鼠肝羟脯氨酸含量、肝指数，具有减轻模型大鼠肝组织纤维化的作用。
结论：
软肝颗粒具有祛瘀软坚，疏肝健脾的功效；适用于慢性肝炎，肝硬化，证属肝郁脾虚，气血瘀滞者；症见：
腹胀，胁痛，纳差，乏力。
关键词：
软肝颗粒，复合因素，肝纤维增生，CCL4，统计学分析
引言
肝纤维化是由各种原因（如病毒、乙醇、寄生虫、铜铁沉积等）引起的慢性肝损伤所共有的病理改变，是慢性肝病发展至肝硬化甚至原发性肝细胞癌的必经阶段，是各种慢性肝病的共同病理学基础。
[2]正常肝纤维化结缔组织的生成与分解应保持动态平衡，由于肝组织受损使肝纤维组织弥漫增生大于分解，导致肝纤维化。
随着肝脏病变的发展，肝细胞变性，坏死，再生结节，假小叶和纤维隔形成，肝的正常结构被破坏，导致肝变形变硬。
因此，抗肝纤维化已成为慢性肝病的重要治疗环节。
[3]
软肝颗粒是中药复方医院制剂，其主要成分是由叶下珠、醋鳖甲、黄芪、三七等中药成分组成；该方具有祛瘀软坚，疏肝健脾的功效，适用于慢性肝炎，肝硬化，证属肝郁脾虚，气血瘀滞者；症见：
腹胀，胁痛，纳差，乏力。
方中的君药叶下珠味微苦甘，性凉；入肝脾经，具有清热平肝、清肝明目、利尿、解毒消肿的功效；常用于治疗赤白痢疾、暑热腹泻；外治蛇毒咬伤等作用。
臣药醋鳖甲味咸，性寒；入肝肾经；具有滋阴潜阳、软坚散结的功效；常用于治疗阴虚发热、劳热骨蒸、阴虚风动等作用。
佐药黄芪味甘，性微温，归肺、脾、肾经；功效益气，利水，养血，活血，益寿，保肝；常用于促进和调节免疫功能，促进机体代谢，抗炎等作用；对小白鼠急性CCL4中毒性肝炎具有保护肝脏，防止肝糖原减少的作用。
[4]使药三七味甘微苦，性温，归肝、胃经；功效化瘀止血，补血活血，消肿定痛；常用于止血，抗血栓形成，抗炎，抗心肌缺血等作用；对CCL4造成的肝损伤有保护作用，可抑制血清丙氨酸氨基转移酶的升高。
[5]
本文采用CCL4中毒诱导的大鼠肝纤维化模型，探讨软肝颗粒的抗肝纤维化作用；
CCl4诱发的急慢性化学性肝损伤是研究药物代谢和筛选抗肝病药的常用肝损伤实验模型。
[8]
1实验材料
1.1实验药物
软肝颗粒：
处方组成为叶下珠，醋鳖甲，黄芪，三七等。
具有祛瘀软坚，疏肝健脾。
适用于慢性肝炎，肝硬化，证属肝郁脾虚，气血瘀滞者。
症见：
腹胀，胁痛，纳差，乏力。
中药颗粒剂，实验时采用浸膏粉，每g浸膏粉相当生药量为5.82g生药，批号为20130404，由本院制剂室提供。
按体表面积计算大鼠（200g）相当成人（70kg）用量的0.0018倍。
大鼠的等效剂量为6g×0.0018/0.2（kg）=0.54（g/kg）。
以等效剂量分别作为小剂量、中剂量、大剂量的1、2、4倍。
因此，大鼠的给药剂量分别为（小、中、大剂量）0.54、1.08、2.56g/kg。
软肝颗粒用纯净水配制成0.054、0.108、0.256g/ml，给药体积为10ml/kg。
联苯双酯滴丸：
对复合因素致大鼠肝纤维增生影响阳性对照药，1.5mg/丸。
临床用于慢性迁延型肝炎伴ALT升高者，也可用于化学毒物、药物引起的ALT升高。
浙江万邦药业股份有限公司生产，批号：
A02130114；用法用量：
口服，每次5丸，每日三次，每5丸相当于22.5mg生药。
大鼠用等效剂量为2mg/kg，实验时使用等效剂量2倍量，4mg/kg，用纯净水配制。
1.2实验动物
SPF级SD大鼠60只，♀♂性各半，体重150-180g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号：
SCXK（湘）2011-0003，合格证号：
43004700001896。
动物在本院动物室SPF级动物室喂养，实验动物设施许可证号：
SYXK（湘）2011-0004，合格证号：
00045732。
动物给予普通颗粒饲料，自由进食，进水，动物进行适应性喂养。
1.3仪器与试剂
AB204电子天平：
瑞士梅特勒—托利多公司产品。
S22pc可见分光光度计：
上海掕光技术有限公司产品。
全自动生化分析仪：
KONE-PRO，芬兰康艺仪器公司生产。
CCL4：
广州化学试剂厂产品，批号20130102，分析纯。
金健食用调和油：
金健米业产品，批号：
130308。
1.4统计分析方法
采用SPSS17.0统计分析软件进行统计学分析。
计量资料均采用均数±标准差（
±S）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较，方差齐，采用LSD（L）法进行分析，方差不齐的实验数据采用Dunnett’s法进行统计学处理。
2方法与结果
软肝颗粒对大鼠肝纤维增生影响的实验研究
大鼠适应性喂养后，取SD大鼠60只，体重200g左右，雌雄各半，按性别体重随机分成6组，每组10只；参照文献方法制备大鼠肝纤维增生摸型[6]，1组为空白对照组，2组为模型对照组，3-5组分别为软肝颗粒小、中、大剂量组，6组为联苯双酯滴丸阳性对照组，每组10只大鼠。
除空白对照组外，各组均饲单纯玉米粉（前两周加猪油20﹪），混以0.5﹪胆固醇，并以30﹪乙醇为饮料。
于实验第一天每只动物皮下注射40﹪CCL4植物油溶液0.5ml/100g体重，每周一至周五注射两次40﹪CCL4油溶液0.3ml/100g体重。
各给药组于实验的第2天开始给药，在第四周末处理称重；称重后摘眼球取血，测其血清谷丙转氨酶活性、肝组织羟脯氨酸含量。
断头处死大鼠，取肝组织称重，计算脏器系数。
结果见表1、2、3。
从表1可见，与空白对照组比较，肝纤维增生模型大鼠血SGPT活性显著升高，出现肝功能损害表现。
软肝颗粒小、中、大剂量组均能显著降低肝纤维增生大鼠血SGPT活性，具有保护模型大鼠肝组织的作用。
阳性对照药联苯双酯滴丸亦有相同作用。
表1：
软肝颗粒对肝纤维增生大鼠血SGPT活性的影响（
±SD）
组别
剂量
动物数
SGPT指数
（g生药/kg）
（只）
（u/L）
空白对照组
模型对照组
10ml/kg
10ml/kg
10
10
68.60±18.06
235.70±62.60##
软肝颗粒
0.54
10
174.50±29.94**
软肝颗粒
1.08
10
159.00±52.33**
软肝颗粒
2.56
10
168.10±20.10**
联苯双酯滴丸
4mg/kg
10
166.40±41.81**
与空白对照组比较：
##P<0.01与模型对照组比较：
*P<0.05，**P<0.01
从表2可见，与空白对照组比较，肝纤维增生模型大鼠肝羟脯氨酸含量显著升高，出现肝纤维化改变。
软肝颗粒小、中、大剂量组均能显著降低肝纤维增生大鼠肝羟脯氨酸含量，具有减轻模型大鼠肝组织纤维化的作用。
阳性对照药联苯双酯滴丸亦有相同作用。
表2：
肝颗粒对肝纤维增生大鼠肝羟脯氨酸含量的影响（
±SD）
组别
剂量
动物数
肝羟脯氨酸
（g生药/kg）
（只）
（μg/mg）
空白对照组
模型对照组
10ml/kg
10ml/kg
10
10
0.398±0.214
1.900±0.480##
软肝颗粒
0.54
10
0.873±0.253**
软肝颗粒
1.08
10
0.923±0.379**
软肝颗粒
2.56
10
0.885±0.179**
联苯双酯滴丸
4mg/kg
10
1.043±0.216**
与空白对照组比较：
##P<0.01与模型对照组比较：
*P<0.05，**P<0.01
从表3可见，与空白对照组比较，肝纤维增生模型大鼠肝脏指数显著升高，说明肝纤维化后，肝重量增加，使肝脏指数升高。
软肝颗粒小、中、大剂量组均能显著降低模型大鼠肝指数，进一步说明其具有减轻模型大鼠肝组织纤维化的作用。
阳性对照药联苯双酯滴丸亦有相同作用。
表3：
软肝颗粒对肝纤维增生大鼠肝脏指数的影响（
±SD）
组别
剂量
动物数
肝脏指数
（g生药/kg）
（只）
（s）
空白对照组
模型对照组
10ml/kg
10ml/kg
10
10
4.892±0.473
6.381±1.230##
软肝颗粒
0.54
10
5.551±1.035*
软肝颗粒
1.08
10
5.328±0.668**
软肝颗粒
2.56
10
5.222±0.766**
联苯双酯滴丸
4mg/kg
10
5.391±0.405**
与空白对照组比较：
##P<0.01与模型对照组比较：
*P<0.05，**P<0.01
3结果
试验结果显示，软肝颗粒能显著降低肝纤维增生大鼠血SGPT活性，具有保护模型大鼠肝组织的作用；能显著降低肝纤维增生大鼠肝羟脯氨酸含量、肝指数，具有减轻模型大鼠肝组织纤维化的作用。
软肝颗粒药效学试验为其功能主治：
祛瘀软坚，疏肝健脾的功效；及适用于慢性肝炎，肝硬化，证属肝郁脾虚，气血瘀滞等提供了真实的实验依据。
4讨论
肝纤维化（HepaticFibrosis,HF）是指由各种致病因子引起的肝脏结缔组织异常增生,导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉积的病理过程,病毒性肝炎及酒精等化学毒物长期损伤肝脏,导致慢性炎症和肝细胞受损伤后修复,均可形成不同程度的肝纤维化。
[7]肝纤维化多数是可逆的,但目前临床尚缺乏高效、无毒或低毒的治疗药物。
近年来,中医针对肝纤维化发生的多个环节进行综合治疗,取得了较多进展,呈现广阔的应用前景.[8]本试验结果显示，CCl4诱导的慢性肝纤维化大鼠有明显的肝损伤及慢性肝纤维化表现。
给予软肝颗粒治疗后，软肝颗粒明显能显著降低肝纤维增生大鼠血SGPT活性，具有保护模型大鼠肝组织的作用；能显著降低肝纤维增生大鼠肝羟脯氨酸含量、肝指数，具有减轻模型大鼠肝组织纤维化的作用。
肝硬化的临床表现特点，可属中医的“膨胀”“胁痛”“积聚”等病症。
其病程缠绵，病情复杂，症状多变，既有正气的耗损，又有气滞血瘀的表现，实属本虚标实，虚实夹杂的病症。
在病变过程中，脾失健运，清阳不升，水谷精微不能输布以奉养它脏，病延日久，肝脾日虚，进而累及于肾，以主肝肾阳虚，这也是徽瘕积聚向膨胀发展的病理基础。
因此，气滞，血瘀，水停是肝硬化的三个重要病理变化。
[9]中医认为血瘀是肝纤维化的基本病机,以疏肝健脾、活血化瘀、软坚散结为主要治疗原则。
中药复方抗肝纤维化的研究,最早就是从活血化瘀类药开始的,随着研究的深入,目前已发展了疏肝解郁、清热利湿、软坚散结、扶正祛瘀、滋补肝肾等多种治法[10]。
本实验研究的中药复方软肝颗粒就是以祛瘀软坚，疏肝健脾的治法治疗肝纤维化的。
方中的叶下珠、醋鳖甲具有活血化瘀、软坚散结的功效；黄芪为补中益气要药,扶正固表,三七行气止痛,有明显的保肝作用。
全方共奏祛瘀软坚，疏肝健脾的功效。
我国是肝病大国，每年为此支出的医疗费用已成为社会的沉重负担，因此研究肝纤维化的发生发展已成为肝病工作者的迫切工作。
有报道认为，一旦发生肝硬化，10年生存率为80﹪，如出现失代偿，10年生存率仅为25﹪,约1.9﹪~6.7﹪可发展成HCC，治疗难度较大。
[11]近年来研究证实，中医中药在治疗此病方面体现出巨大的优势，成为抗纤维化领域中研究的热点之一。
国内外学者致力于中医药抗肝纤维化的研究，发现中药在抗肝纤维化治疗中具有明显的优势，包括单味药，复方的研究[12]。
现代医学认为,肝纤维化是肝细胞外基质（ECM）合成和降解失衡,而导致其过度沉积的结果。
ECM主要包括胶原蛋白、蛋白多糖和糖蛋白[13]。
其中,羟脯氨酸（Hyp）在胶原中含量丰富,其在肝脏中的含量可反映胶原代谢的变化情况,与肝纤维化程度相平行,为肝纤维化诊断的重要指标。
HA是ECM蛋白多糖的一个组分,是反映肝脏内皮细胞功能、肝纤维化及肝硬变的指标,具有早期诊断价值。
[14]。
参考文献
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