生物化学实验习题及解答.docx
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生物化学实验习题及解答
生物化学实验习题及解答
LT
改变C、加热、紫外线照射、超声波等可以引起蛋白质变性D、变性蛋白质粘度增加，易被酶水解，易沉淀
11、双链DNA热变性后（）
A、黏度下降B、沉降系数下降C、浮力密度下降D、紫外吸收下降
12、酶的活化和去活化循环中，酶的磷酸化和去磷酸化位点通常在酶的哪一种氨基酸残基上？
（）
A、天冬氨酸B、脯氨酸C、赖氨酸D、丝氨酸
13、在生理条件下，下列哪种基团既可以作为H的受体，也可以作为H的供体？
（）
A、His的咪唑基B、Arg的胍基C、Cys的巯基D、Trp的吲哚基
三、填空
1、脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（）色物质，而其他氨基酸与茚三酮产生（）色的
物质。
2、通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的（）、（）、（）三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。
3、移液枪在每次实验后应将刻度调至（），让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命，并严禁吸取（）。
4、使用离心机时，如有噪音或机身振动时，应立即（），并且离心管须对称放入套管中，防止机身振动，若只有一支样品管，则另外一支要用（）代替。
5、测定蛋白质浓度的方法主要有（）、（）、（）。
6、利用蛋白质不能通过半透膜的特性，使它和其他小分子物质分开的方法有（）和（）等。
7、核酸在260nm附近有强吸收，这是由于（）。
8、双键DNA热变性后，或在pH2以下，或在pH12以上时，其OD260（），同样条件下，单键DNA的OD260（）。
9、硝酸纤维素膜可结合（）链核酸。
将RNA变性后转移到硝酸纤维素膜上再进行杂交，称（）印迹法。
10、常用二苯胺法测定（）含量，用苔黑酚法测定（）含量。
11、变性DNA的复性与许多因素有关，包括（）、（）、（）、（）、（）。
12、温度对酶活力影响有以下两方面：
一方面（），另一方面（）。
13、维生素C是（）酶的辅酶，另外还具有（）作用。
14、在分光光度计的使用或检定中，（）的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标，它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。
（）的误差越大，测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性。
四、问答
1、紫外分光光度法测定核酸含量的原理。
2、蛋白质变性与沉淀的关系。
3、牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
4、试述凝胶成像系统操作时应注意的事项。
++
5、若样品中含有蛋白质和核苷酸等杂质，如何排除干扰？
6、体液血糖测定有哪些方法？
?
7、DNA在电场中的迁移率取决于哪些因素？
8、琼脂糖凝胶有哪些注意事项？
9、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么？
10、何谓Rf值？
影响Rf值的主要因素是什么？
11、蛋白质分离和纯化的一般方法？
12、如何正确选择核酸电泳指示剂？
参考答案
一、名词解释
1、指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示。
2、按照在移动相和固定相（可以是气体或液体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。
3、通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯
化技术。
4、在去污剂十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰氨凝胶电泳。
SDS-PAGE只是按照分子的大小，而不
是根据分子所带的电荷大小分离的。
5、生物大分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。
蛋白质在受到光照，热，有机溶济
以及一些变性济的作用时，次级键受到破坏，导致天然构象的破坏，使蛋白质的生物活性丧失。
6、在一定的条件下，变性的生物大分子恢复成具有生物活性的天然构象的现象。
7、核酸分子变性过程中，紫外吸收达到最大增量一半时的溶解温度。
8、能催发相同的反应类型但其理化性质及免疫学性质不同的酶。
9、反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。
是酶的特征物理学常数之一。
近似表示酶与底物的
亲和力。
10、DNA双链解链，分离成两条单链的现象。
11、既DNA由单链复性、变成双链结构的过程。
来源相同的DNA单链经退火后完全恢复双链结构的过程，同源DNA之间`DNA和RNA之间，退火后形成杂交分子。
12、当双螺旋DNA熔解（解链）时，260nm处紫外吸收增加的现象。
二、基础理论单项选择题
1、A；2、C；3、B；4、A；5、A；6、B；7、B；8、C；9、D；10、A；11、A；12、D；13、A；
三、填空
1、黄、紫
2、Trp、Tyr、phe
3、最大、强挥发性、强腐蚀性的液体。
4、切断电源，即时排除故障；等质量的水
5、双缩脲法、Folin-酚试剂法、凯氏定氮法
6、透析、超滤
7、在嘌呤碱基和嘧啶碱基中存在共轭双键
8、增加、不变
9、单、Northern
10、DNA、RNA
11、样品的均一度、DNA的浓度、DNA片段的大小、温度的影响、溶液的离子强度
12、温度升高，可使反应速度加快；温度太高，会使酶蛋白变性而失活
13、羟化、解毒
14、透射比或吸光度、透射比或吸光度
四、问答
1、答：
核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。
一般在260nm波长下，每1ml含1μgRNA溶液的光吸收值为0.022~0.024，每1m1含1μgDNA溶液的光吸收值约为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。
此法操作简便，迅速。
若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测光误差较大，故应设法事先除去。
2、答：
沉淀可以是由蛋白质变性从而产生沉淀，也可以是由于盐析。
蛋白质变性是指光照，热，有
机溶济以及一些变性剂（如重金属盐）的作用时蛋白质的空间结构被破坏，使得蛋白质丧失活性，该过程不可逆。
盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属盐，使得蛋白质沉淀析出，这是由于加入盐降低了蛋白质得溶解度而析出，该过程可逆，加水蛋白质又会溶解。
二者本质上是不同的。
3、答：
牛奶含有半乳糖、蛋白质、脂肪成分。
蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀，再通过离心而获得，糖类小分子由于处于清夜中而分离，沉淀物中所含有的脂肪通过有机溶剂抽提而去除，最终得到纯白色、晶状酪蛋白。
方法：
取新鲜牛乳，用酸碱调PH到酪蛋白的等电点沉淀析出酪蛋白，然后洗涤，醇醚吸水至干燥得粉末称重，计算提取率。
步骤：
保温→调PH→沉淀→离心→洗涤→干燥→称量
4、答：
1）紫外凝胶照相时要防止EB污染仪器，在紫外透射灯样品台上垫上蓝色和白色胶片，开关凝胶成像系统前面板那、操作GeneSnap软件之时都不可以戴手套。
白光透射光源放置在紫外透射光源上面时要把蓝色和白色胶片取出。
2）注意开机顺序，先开凝胶成像系统，再打开电脑进入GeneSnap软件。
3）在使用紫外光源照相的过程中，不可以打开凝胶成像系统前面板。
5、答：
用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）使蛋白质变性，RNA通过RNase消化清除。
6、答：
测定血糖的方法常用的有三种：
静脉血浆葡萄糖（VPG），毛细血管全血葡萄糖（CBG）和静脉全血葡萄糖（VBG）。
7、答：
1）DNA的分子大小及构型：
?
8^不同构型DNA的移动速度次序为：
供价闭环DNA（covalentlyclosedcircular，cccDNA）>直线DNA>开环的双链环状DNA。
2）琼脂糖浓度：
一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。
DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。
凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。
3）DNA分子的构象：
当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。
相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。
"4）电源电压：
琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。
5）嵌入染料的存在：
荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15％。
6）离子强度影响：
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。
8、答：
1）缓冲液的使用要正确，长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。
2）琼脂糖的影响。
3）凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致。
4）样品加入量的多少。
5）电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照物进行判定是必要的。
6）DNA样品中的盐浓度也影响DNA的迁移率。
7）DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度、迁移分子的形状及大小。
9、答：
考马斯亮蓝G-250（CoomassiebrilliantblueG-250）染料，在游离状态下溶液呈棕红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色。
蛋白质含量在0~1000μg范围内，蛋白质-色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法进行定量分析。
考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）是比色法与色素法相结合的复合方法，简便快捷，灵敏度高，稳定性好，是一种较好的蛋白质常用分析方法。
生物化学实验理论考试题答案
1.醋酸纤维薄膜电泳时点样端应靠近电极的哪一端，为什么？
答；电泳时点样端应靠近负极，因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。
2.用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的作用,为什么？
答；空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。
溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。
3.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜的电泳原理？
答；血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为8.6时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。
4.何谓Rf值？
影响Rf值的因素？
答;Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。
Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关，对同一种物质来讲Rf是一个常量。
5.什么是盐析？
盐析会引起蛋白质的变性吗？
一般用什么试剂?
答;盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。
盐析不会引起蛋白质的变性，因为蛋白质的结构并未发生改变，去掉引起盐析的因素蛋白质仍能溶解；一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析
6.简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？
答;还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。
7.影响蛋白质沉淀的因素是什么？
沉淀和变性有什么联系？
答;水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。
这些因素包括溶液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。
变性蛋白质不一定沉淀，沉淀的蛋白质不一定变性。
沉淀时蛋白质可能仍然保持天然构像，而变性是蛋白质的高级结构被破坏失去活性。
8.简述薄层层析法分离糖类的原理/?
答;薄层层析的实质就是吸附层析，也就是在铺有吸附剂的薄层上，经过反复地被吸附剂吸附以及被扩展剂扩展的过程。
而吸附剂对不同的物质的吸附力不同，从而使糖在薄层上的涌动速度不同达到分离的目的
9.等电点的定义？
蛋白质在等电点时有哪些特点？
答;当溶液的PH为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为零，此时的PH值就是该蛋白质等电点。
蛋白质在等电点时的溶解度最小。
10.蛋白质显色黄色反应的原理是什么?
反应结果为什么深浅不一？
答;含有苯环的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黄色的物质，而且不同蛋白质中所含的苯环数量不同，造成与试剂反应的程度不同，因此呈现颜色深浅不一。
11.RNA水解后的三大组分是什么？
怎样各自验证的？
答;核糖，磷酸，嘌呤碱。
核糖+苔黒酚—Fe（浓HCI）绿色物质；磷酸+钼酸铵——蓝色；嘌呤碱+硝酸银——白色
12.等电点时为什么蛋白质溶解度最低？
答;蛋白质形成胶体二等条件是带电荷，从而在外表面形成水化膜，导致各胶体颗粒不结合，当PH等于PI时，静电荷为零，蛋白质分子之间不存在排斥，则聚集沉淀，所以在等电点时溶解度最小。
13.鸡蛋清可以用作铅汞中毒的解毒剂是为什么?
答;由于重金属离子能与蛋白质中带负电基团如—COOH等作用，生成难溶重金属的蛋白质盐，减少机体对重金属的吸收。
14.血清醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白依次分为哪几条带？
哪带电泳最
快？
影响电泳速度有哪些？
答;有血清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、r-球蛋白；其中血清蛋白点用最快。
影响因素蛋白质所带电荷数，分子大小与形状以及缓冲液浓度。
15.什么是抑制剂？
什么是变性剂？
区别是什么？
答;凡是能使酶活性降低而不使酶失活变性的物质成为抑制剂；凡是能引起蛋白质变性失活的物质叫变性剂。
抑制剂只是抑制蛋白质的特性而变性剂则破环蛋白质的结构。
16简述橘皮中提取果胶原理？
答；果胶不溶于乙醇的原来将其沉淀得到果胶。
17离心管如何在天平上平衡？
操作离心时应注意什么?
答;把放在小烧杯中的离心管（包括盖子）和管套放在平衡的天平上，用胶头滴管取离心液调平。
注意点：
配平、等重的试管放在对称的位置；启动时要先盖好盖子，停止后才能开盖；有不正常的声音时应按STOP键,而不是POWER键；禁止把小而中的东西放在离心机上以防伤人。
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