临床检验技师考试临床检验基础讲义第一章血液样本采集和血涂片制备.docx

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临床检验技师考试临床检验基础讲义第一章血液样本采集和血涂片制备

第一章　血液样本采集和血涂片制备

　　考纲

一、血液生理概要

二、采血方法

三、抗凝剂选择

四、血液涂片制备

五、血液细胞染色

六、方法学评价

七、质量控制

　　一、血液生理概要

　　1.血液组成

　　血液标本类型

　　①全血　适用于临床血液学检查。

　　②血浆　全血+抗凝剂+离心　适用于内分泌激素、血栓与止血检查。

　　③血清　全血+离心（静置）　适用于临床化学和免疫学检查。

　　　　　　不加抗凝剂，血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。

　　血浆与血清的区别

　　2.血液理化性质

　　①血量：

正常人血量约为（70±10）ml/kg体重，成人约4～5L，约占体重的6%～8%。

　　②颜色：

严重CO中毒或氰化物中毒者血液呈樱红色。

餐后，尤其是高脂膳食后，血浆呈乳白色。

溶血患者血浆呈红色。

　　③酸碱度：

pH7.35～7.45

　　3.血液特性：

悬浮稳定性、黏滞性（纤维蛋白原、球蛋白）、凝固性。

　　4.血液生理功能：

具有运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能。

　　二、采血方法

（一）静脉采血法

　　1.概述

　　通常采用肘部静脉、手背静脉、内踝静脉或股静脉。

小儿可采颈外静脉血液。

为避免血小板激活，要使用塑料注射器和硅化处理后的试管或塑料试管。

　　2.操作方法和注意事项

（二）皮肤采血法（毛细血管采血法）

　　采血针

　　1.概述

　　部位→手指（WHO推荐左手无名指指端内侧）和耳垂。

　　2.操作方法

（1）准备：

取合适试管，加适量稀释液。

取微量吸管和乳胶吸头相连，检查连接处是否漏气，或取一次性微量吸管备用。

（2）按摩：

轻轻按摩左手中指或无名指指端内侧，使局部组织自然充血。

　　（3）消毒：

用75%乙醇棉签擦拭采血部位，待干。

　　（4）针刺：

用左手拇指和食指固定采血部位使皮肤和皮下组织绷紧，右手持一次性消毒采血针自指端腹内侧刺入，深度2～3mm，立即出针。

　　（5）拭血：

待血液自然流出后，用无菌干棉球擦去第1滴血。

　　（6）吸血：

用一次性微量吸管吸血，然后用无菌干棉球压住伤口止血。

如血流不畅，可用左手自采血部位远端向指端稍施压使血液流出。

　　（7）稀释：

用无菌干棉球擦净微量吸管外部，将吸管伸入装有稀释液的试管底部，慢慢排出吸管内的血液，并用上清液冲洗管内余血2～3次，最后将试管内的液体混匀。

　　3.注意事项

　　①所选择采血部位无烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症等。

　　②本试验具有创伤性，必须严格按无菌技术操作，防止采血部位感染，做到一人一针一管，避免交叉感染，最好用一次性器材。

　　③皮肤消毒后，应待75%乙醇挥发后采血，否则流出的血液扩散而不成滴。

　　④因第1滴血混有组织液，应擦去。

如血流不畅切勿用力挤压，以免造成组织液混入，影响结果的准确性。

　　⑤进行多项检查时，采血的顺序依次为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数等。

　　【口诀-SUN】

　　静脉肘部是首选，放血别忘拔针头，皮肤通常选手指，婴儿踇趾或足跟，多项检查小板先。

　　（三）真空采血法

　　真空采血装置有套筒式、头皮静脉式两种。

真空定量采血容器，根据需要标有不同的色码，适于不同检验项目。

　　常用彩色真空采血容器的用途

盖子颜色

添加抗凝剂

注意事项

用途

红色

无

凝块形成约30～60min

化学、血清学、血库

紫色

EDTA

须颠倒混匀6～8次

全血细胞计数（CBC）

淡蓝色

枸橼酸钠

须颠倒混匀；血液与抗凝比例为9:

1

凝血检查（PT、APTT、因子测定）

绿色

肝素钠、肝素锂、肝素铵

根据实验需要，选择不同类型的肝素

化学

灰色

氟化钠

不能用于其他化学检查

葡萄糖、糖耐量

黄色

多茴香脑磺酸钠

须颠倒混匀8次

血培养

黑色

枸橼酸钠

血液与抗凝剂比例为4：

1

血沉

　　质量控制

　　1.患者：

患者活动情况、精神状态、药物、年龄、性别、种族、样本采集时间、吸烟、季节等都会影响检测结果。

　　2.采血：

止血带结扎时间应小于1分钟，如超过2分钟，大静脉血流受阻而使毛细血管内压增高，使分子质量＜5000的物质逸入组织液，或缺氧引起血液成分的变化，使检查结果增高或减低。

　　3.溶血：

因容器不洁、接触水、强力振荡、操作不慎等可引起溶血，使红细胞计数、血细胞比容、血浆或血清化学成分（如钾、镁、转氨酶、胆红素）等多项指标检验结果发生变化。

　　4.样本处理：

血液样本采集后应立即送检，并尽快进行检查，样本保存不当直接影响实验结果。

血浆在4℃保存24h后，某些凝血因子活性减少95%。

低温（4℃）保存血液可使血小板计数结果减低。

因此，应根据实验项目确定最佳的保存条件。

　　5.实验结果分析：

分析结果时，应考虑药物、饮食等因素对结果的影响。

同时，应密切结合临床。

　　三、抗凝剂选择

　　1.乙二胺四乙酸（EDTA）盐

　　常用有钠盐或钾盐。

　　①抗凝原理：

螯合钙离子。

　　②使用方法：

量为1.5～2.2mg/ml血液。

　　③适用范围：

对血细胞形态、血小板计数影响很小。

　　根据国际血液学标准化委员会（ICSH）建议，CBC抗凝剂用EDTA-K2。

不适于凝血检查、血小板功能试验。

　　2.草酸盐

　　①抗凝原理：

草酸钙沉淀。

　　②适用范围　双草酸盐

　　血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等检查。

　　不适于血小板计数、白细胞分类计数。

　　3.肝素

　　①抗凝原理：

　　加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固。

　　②使用方法：

每毫升血液肝素用量为（15±2.5）U，多为肝素钠盐或钾盐。

　　③适用范围：

红细胞渗透脆性试验。

　　不适于CBC、细胞形态学检查。

　　4.枸橼酸盐

　　①抗凝原理：

能与血液中钙离子结合形成螯合物。

　　②使用方法：

配成109mmol/L的浓度。

　　1:

9------凝血

　　1:

4------红细胞沉降率

　　③适用范围：

凝血检查、红细胞沉降率、输血保养液。

　　四、血液涂片制备

　　一张良好的血片

　　①厚薄适宜

　　②头体尾明显

　　③细胞分布均匀

　　④血膜边缘整齐

　　⑤并留有一定空隙

　　血涂片的制备

　　①手工推片法　25°～30°夹角

　　血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容。

　　②厚血膜涂片法疟原虫、微丝蚴等。

　　五、血液细胞染色

　　瑞氏染色法

　　1.染料组成

　　染料组成

　　酸性染料伊红（E-）钠盐阴离子

　　碱性染料亚甲蓝（M＋）氯盐阳离子

　　将适量伊红、亚甲蓝溶解在甲醇中。

　　甲醇的作用：

一是溶解亚甲蓝和伊红；二是固定细胞形态。

　　2.染色原理　物理吸附与化学亲和作用

　　③中性颗粒　呈等电状态与E-和M+结合→淡紫红色

　　④红细胞

　　原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

　　3.pH值的影响

　　细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色。

　　①pH＜pI→Pr带正电荷多→易与E-结合→染色偏红

　　②pH＞pI→Pr带负电荷多→易与M+结合→染色偏蓝

　　磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8）

　　保证细胞受色时恒定最佳pH条件

　　4.注意事项

（1）血涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

（2）冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以防染料沉着在血涂片上。

冲洗时间不能过久，以防脱色。

如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。

　　（3）染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。

染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

　　六、方法学评价

　　1.血涂片制备

　　用血量少、操作简单，是应用最广泛的方法。

　　疟原虫、微丝蚴等检查可采用厚血膜涂片法。

　　2.血液细胞染色

　　瑞氏染色法：

最经典、最常用。

对于细胞质成分、中性颗粒等可获得很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差。

　　吉姆萨染色法：

对细胞核、寄生虫（如疟原虫等）着色较好，结构更清晰，但对细胞质成分的着色能力略差。

　　瑞-吉姆萨复合染色：

使细胞胞质、颗粒、胞核等均获得满意的染色效果。

　　瑞氏染料的质量规格用吸光度比值（rA）来评价。

　　新配制染料rA接近2，降到（1.3±0.1）染料即可使用。

　　新鲜配制的染料偏碱，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待亚甲蓝逐渐变为天青B，贮存时间愈久，染色效果愈好。

在贮存过程中，必须加塞，以防甲醇挥发和氧化成甲酸。

所用甲醇须为AR级，若其中含过多丙酮，会使染色偏酸，白细胞着色不良。

　　七、质量控制

　　1.血涂片制备

　　血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之则愈薄。

　　血细胞比容增高、血液黏度较高时，采用小血滴、小角度、慢推；血细胞比容减低、血液较稀时，应采用大血滴、大角度、快推。

　　2.血液细胞染色

　　染色深浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH值密切相关。

　　血清与血浆的区别是

　　A.血清缺少某些凝血因子

　　B.血浆缺少某些凝血因子

　　C.血清缺少凝血酶

　　D.血浆缺少凝血酶

　　E.血清缺少纤维蛋白

『正确答案』A

『答案解析』血清与血浆的差别是：

血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。

　　婴幼儿做血常规检查时，多使用的采血部位是

　　A.颈外静脉

　　B.耳垂毛细血管

　　C.足跟毛细血管

　　D.肘部静脉

　　E.以上都是

『正确答案』C

『答案解析』手指采血操作方便，检查结果比较恒定，世界卫生组织（WHO）推荐采集左手无名指指端内侧血液，婴幼儿可采集大踇趾或足跟内外侧缘血液，严重烧伤患者，可选择皮肤完整处采血。

　　下列说法错误的是

　　A.采血前要仔细检查针头是否安装牢固

　　B.采血前要仔细检查针筒内是否有空气和水分

　　C.使针头与皮肤成30°角斜行快速刺入皮肤

　　D.抽血时针栓可以外抽和内推

　　E.取下注射器针头，将血液沿试管壁缓缓注入抗凝管中

『正确答案』D

『答案解析』抽血时只能外抽，不能内推。

　　导致溶血的因素不包括

　　A.抽血速度太快

　　B.血液注入容器时未取下针头

　　C.注入抗凝管后剧烈振荡混匀

　　D.注射器干燥

　　E.取血后直接放入4℃冰箱

『正确答案』D

『答案解析』注射器中有水会导致溶血，干燥不会。

　　血液标本4℃保存，可使血液分析仪

　　A.红细胞计数结果减低

　　B.红细胞分布宽度增加

　　C.血小板计数结果增加

　　D.血小板计数结果减低

　　E.白细胞计数结果减低

『正确答案』D

『答案解析』血浆在4℃保存24h后，某些凝血因子活性减少95%，低温（4℃）保存血液可使血小板计数结果减低。

　　影响血涂片时血膜厚度的因素有

　　A.血滴大小

　　B.血黏度高低

　　C.推片角度

　　D.推片速度

　　E.以上都是

『正确答案』E

『答案解析』制备涂片时，血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之则愈薄。

血细胞比容增高、血液黏度较高时，应采用小血滴、小角度、慢推，可得满意结果；血细胞比容减低、血液较稀时，应采用大血滴、大角度、快推。

　　瑞氏染色中起溶解作用的有机溶剂是

　　A.无水乙醇

　　B.甲醇

　　C.氯仿

　　D.二甲苯

　　E.乙二醇

『正确答案』B

『答案解析』瑞氏染色中甲醇的作用：

一是溶解亚甲蓝和伊红；二是固定细胞形态。

　　下列有关瑞氏染色法的叙述中，哪项是正确的

　　A.是酸性染料亚甲蓝和碱性染料伊红组合的复合染料

　　B.细胞核被染成红色

　　C.新鲜配制的染料可以马上使用

　　D.对细胞的染色原理仅有正负电荷的作用

　　E.是血涂片染色最常用的方法

『正确答案』E

『答案解析』瑞氏染色法：

是最经典、最常用的血涂片染色方法。

对于细胞质成分、中性颗粒等可获得很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差。