常用pGEX载体图谱之欧阳物创编.docx
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常用pGEX载体图谱之欧阳物创编
Rosetta系列的表达菌株可以提供T7RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。
。
。
pGEX系列载体上的外源基因不需要T7RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达
时间：
2021.02.07
命题人：
欧阳物
Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。
其中Tac1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46bpDNA片段（包括Pribnow盒）和Lac操纵基因构成，Tac12是由Trp的启动子-35区和Lac启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成
蛋白标签：
Amyctagisapolypeptide proteintag derivedfromthe c-myc geneproductthatcanbeaddedtoaproteinusing recombinantDNA technology.Itcanbeusedfor affinitychromatography,thenusedtoseparaterecombinant,overexpressedproteinfromwildtypeproteinexpressedbythehostorganism.Itcanalsobeusedintheisolationofproteincomplexeswithmultiplesubunits.
Amyctagcanbeusedinmanydifferentassaysthatrequirerecognitionbyan antibody.Ifthereisnoantibodyagainstthestudiedprotein,addingamyc-tagallowsonetofollowtheproteinwithanantibodyagainsttheMycepitope.Examplesarecellularlocalizationstudiesbyimmunofluorescenceordetectionby Westernblotting.
Thepeptidesequenceofthemyc-tagis（in1-and3-lettercodes,respectively）:
N-EQKLISEEDL-C,N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-C,whereNstandsfor Amino-terminus andCstandsfor Carboxyterminus.Thetagisapproximately1202 Daltons inatomicmassandhas10aminoacids.
Itcanbefusedtothe C-terminus andthe N-terminus ofaprotein.Itisadvisablenottofusethetagdirectlybehindthesignalpeptideofasecretoryprotein,sinceitcaninterferewithtranslocationintothe secretorypathway.
Amonoclonalantibodyagainstthemyc epitope,named9E10,isavailablefromthenon-commercial DevelopmentalStudiesHybridomaBank
pGEX4T1载体基本信息
出品公司:
GE
别名:
pGEX-4T-1,pGEX4T1,pGEX4T1
质粒类型:
大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平:
高拷贝
启动子:
Tac
克隆方法:
多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:
4969bp
5'测序引物及序列:
pGEX5':
GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG
3'测序引物及序列:
pGEX3':
CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG
载体标签:
N-GST
载体抗性:
Ampicillin氨苄
备注:
复制子是pMB1
产品目录号:
27-4580-01
稳定性:
瞬时表达Transient
组成型:
诱导表达
病毒/非病毒:
非病毒
pGEX4T1载体质粒图谱和多克隆位点信息
原核生物DNA复制起始点，是DNA链上独特的具有起始DNA复制功能的碱基序列。
大肠杆菌的复制起点包括OriC和OriH
Thrombin凝血酶
pGEX4T1载体简介
pGEX4T1载体序列
LOCUSpGEX-4T-14969bpDNAcircularSYN
DEFINITIONpGEX-4T-1
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.
COMMENT ThisfileiscreatedbyVectorNTI
COMMENT VNTAUTHORNAME||
FEATURESLocation/Qualifiers
source1..4969
/organism="pGEX-4T-1"
/mol_type="otherDNA"
promoter184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature224..246
/label="M13_pUC_rev_primer"
gene258..977
/label="GST（variant）"
/gene="GST（variant）"
CDS258..977
/label="ORFframe3"
misc_featurecomplement（1019..1041）
/label="pGEX_3_primer"
promoter1307..1335
/label="AmpR_promoter"
gene1377..2237
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS1377..2237
/label="ORFframe3"
rep_origin2392..3011
/label="pBR322_origin"
misc_feature3309..4400
/label="lacI"
CDS3441..4400
/label="ORFframe3"
promoter4449..4478
/label="lac_promoter"
misc_feature4492..4514
/label="M13_pUC_rev_primer"
promoter4513..4531
/label="M13_reverse_primer"
CDS4523..81
/label="ORFframe2"
misc_feature4540..4695
/label="lacZ_a"
promotercomplement（4543..4559）
/label="M13_forward20_primer"
misc_featurecomplement（4552..4574）
/label="M13_pUC_fwd_primer"
pGEX4T2载体基本信息
出品公司:
GE
别名:
pGEX-4T-2,pGEX4T2,pGEX4T2
质粒类型:
大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平:
高拷贝
启动子:
Tac
克隆方法:
多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:
4970bp
5'测序引物及序列:
pGEX5':
GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG
3'测序引物及序列:
pGEX3':
CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG
载体标签:
N-GST
载体抗性:
Ampicillin氨苄
备注:
复制子是pMB1
产品目录号:
27-4581-01
稳定性:
瞬时表达Transient
组成型:
诱导表达
病毒/非病毒:
非病毒
pGEX4T2载体质粒图谱和多克隆位点信息
pGEX4T2载体简介
pGEX4T2载体序列
LOCUSpGEX-4T-24970bpDNAcircularSYN
DEFINITIONpGEX-4T-2
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.
COMMENT ThisfileiscreatedbyVectorNTI
COMMENT VNTAUTHORNAME||
FEATURESLocation/Qualifiers
source1..4970
/organism="pGEX-4T-2"
/mol_type="otherDNA"
promoter184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature224..246
/label="M13_pUC_rev_primer"
gene258..978
/label="GST（variant）"
/gene="GST（variant）"
CDS258..974
/label="ORFframe3"
misc_featurecomplement（1020..1042）
/label="pGEX_3_primer"
promoter1308..1336
/label="AmpR_promoter"
gene1378..2238
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS1378..2238
/label="ORFframe1"
rep_origin2393..3012
/label="pBR322_origin"
misc_feature3310..4401
/label="lacI"
CDS3442..4401
/label="ORFframe1"
promoter4450..4479
/label="lac_promoter"
misc_feature4493..4515
/label="M13_pUC_rev_primer"
promoter4514..4532
/label="M13_reverse_primer"
CDS4524..81
/label="ORFframe3"
misc_feature4541..4696
/label="lacZ_a"
promotercomplement（4544..4560）
/label="M13_forward20_primer"
misc_featurecomplement（4553..4575）
/label="M13_pUC_fwd_primer"
pGEX4T3载体质粒图谱和多克隆位点信息
pGEX4T3载体简介
pGEX4T3载体序列
LOCUSpGEX-4T-34968bpDNAcircularSYN
DEFINITIONpGEX-4T-3
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.
COMMENTThisfileiscreatedbyVectorNTI
COMMENTVNTAUTHORNAME||
FEATURESLocation/Qualifiers
source1..4968
/organism="pGEX-4T-3"
/mol_type="otherDNA"
promoter184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature224..246
/label="M13_pUC_rev_primer"
gene258..976
/label="GST（variant）"
/gene="GST（variant）"
CDS258..980
/label="ORFframe3"
misc_featurecomplement（1018..1040）
/label="pGEX_3_primer"
promoter1306..1334
/label="AmpR_promoter"
gene1376..2236
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS1376..2236
/label="ORFframe2"
rep_origin2391..3010
/label="pBR322_origin"
misc_feature3308..4399
/label="lacI"
CDS3440..4399
/label="ORFframe2"
promoter4448..4477
/label="lac_promoter"
misc_feature4491..4513
/label="M13_pUC_rev_primer"
promoter4512..4530
/label="M13_reverse_primer"
CDS4522..81
/label="ORFframe1"
misc_feature4539..4694
/label="lacZ_a"
promotercomplement（4542..4558）
/label="M13_forward20_primer"
misc_featurecomplement（4551..4573）
/label="M13_pUC_fwd_primer"
pGEX6P1载体基本信息
出品公司:
GE
别名:
pGEX-6P-1,pGEX6P1,pGEX6P1
质粒类型:
大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平:
高拷贝
启动子:
Tac
克隆方法:
多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:
4984bp
5'测序引物及序列:
pGEX5':
GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG
3'测序引物及序列:
pGEX3':
CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG
载体标签:
N-GST
载体抗性:
Ampicillin氨苄
备注:
复制子是pMB1
产品目录号:
27-4597-01
稳定性:
瞬时表达Transient
组成型:
诱导表达
病毒/非病毒:
非病毒
pGEX6P1载体质粒图谱和多克隆位点信息
pGEX6P1载体简介
pGEX6P1载体序列
LOCUSpGEX-6P-14984bpDNAcircularSYN
DEFINITIONpGEX-6P-1
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.
COMMENT ThisfileiscreatedbyVectorNTI
COMMENT VNTAUTHORNAME||
FEATURESLocation/Qualifiers
source1..4984
/organism="pGEX-6P-1"
/mol_type="otherDNA"
promoter184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature224..246
/label="M13_pUC_rev_primer"
gene258..992
/label="GST"
/gene="GST"
CDS258..992
/label="ORFframe3"
misc_feature918..938
/label="precision"
misc_featurecomplement（1034..1056）
/label="pGEX_3_primer"
promoter1322..1350
/label="AmpR_promoter"
gene1392..2252
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS1392..2252
/label="ORFframe3"
rep_origin2407..3026
/label="pBR322_origin"
misc_feature3324..4415
/label="lacI"
CDS3456..4415
/label="ORFframe3"
promoter4464..4493
/label="lac_promoter"
misc_feature4507..4529
/label="M13_pUC_rev_primer"
promoter4528..4546
/label="M13_reverse_primer"
CDS4538..81
/label="ORFframe2"
misc_feature4555..4710
/label="lacZ_a"
promotercomplement（4558..4574）
/label="M13_forward20_primer"
misc_featurecomplement（4567..4589）
/label="M13_pUC_fwd_primer"
pET28a载体基本信息
出品公司:
EMDBiosciences（Novagen）
别名:
pET28a,pet28a,pET-28a（+）
质粒类型:
大肠杆菌蛋白表达
表达水平:
高
克隆方法:
多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:
5369bp
5'测序引物及序列:
T7:
5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
3'测序引物序列:
T7t:
5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
载体标签:
N-His,N-Thrombin,N-T7,C-His
载体抗性:
卡那
备注:
N端含有Thrombin蛋白酶切位点;pET28a,b,c的差异仅仅存在于多克隆位点处。
产品目录号:
69864-3
稳定性:
瞬时表达Transient
组成型:
组成型Constitutive
病毒/非病毒:
非病毒
pET28a载体质粒图谱和多克隆位点信息
pET28a载体简介
pET-28a-c（+）载体带有一个N端的His/Thrombin/T7蛋白标签，同时含有一个可以选择的C端His标签。
pET28a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。
注意：
载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。
T7RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。
质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列（Cat.No.69337-3）的作用下终止蛋白翻译。
pET30a载体基本信息
出品公司:
EMDBiosciences（Novagen）
别名:
pET30a,pet30a
质粒类型:
大肠杆菌蛋白表达
表达水平:
高
克隆方法:
多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:
5422bp
5'测序引物及序列:
T7:
5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
3'测序引物序列:
T7t:
5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
载体标签:
N-His,N-S,N-Thrombin,N-EK,C-His
载体抗性:
卡那
备注:
pET30a,b,c的差异只存在于多克隆位点，其他位点不存在。
产品目录号:
69909-3
稳定性:
瞬时表达
组成型:
组成型
病毒/非病毒:
非病毒
pET30a载体质粒图谱和多克隆位点信息
pET30a载体简介
pET-30a（+）载体携带有一个N端的His标签/Thrombin酶切位点/S标签/EK蛋白酶切标签以及一个可选择的C端His标签。
载体的多克隆位点见上面的图谱。
需要注意的是图谱中的核苷酸编码顺序是以pBR322载体的复制方向为正方向，所以T7表达区域在图谱中是处于反向的位置。
T7RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。
质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列（Cat.No.69337-3）的作用下终止蛋白翻译。
pet32a载体基本信息
出品公司:
EMDBiosciences（Novagen）
别名:
pET32a,pet32a
质粒类型:
大肠杆菌蛋白表达
表达水平:
高
克隆方法:
多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:
5900bp
5'测序引物:
T7：
5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
3'测序引物:
T7t:
5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
载体标签:
thioredoxin（N端）;His（中间和C端）
载体抗性:
氨苄
备注:
pET32a载体用于表达可溶性，具有活性功能的蛋白;pET-32a（+）载体具有N端Thrombin（凝血酶）酶切位点，N端肠激酶酶切位点。
pET32啊，pET32b，pET32c载体的差异主要是在于多克隆位点，其他地方完全一致。
产品货号:
69015-3
稳定性:
瞬时表达
组成型:
组成型
病毒/非病毒:
非病毒
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