临床检验基础学知识点.docx

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临床检验基础学知识点

临床检验医学

clinicallaboratorymedicine

血液三大

尿液常

粪便规

体液

脱落细胞学

血型与血库

临床检验医学的定义及研究范围

临床检验医学的发展史及现状

临床检验基础教学的目的

学好临床检验基础的要求

临床检验基础的发展史

①古代最早是检测尿液开始的。

②17世纪的显微镜的发明推动了临床检验的发展。

AntonyvanLeeuwenhoek

③上世纪50年代，库尔特（Coulter）电阻抗原理的提出，使临床检验从手工步入自动化、电脑化，使得检验变得简便、快速、精密度高更。

⑤目前，试剂更加批量化、配套化、专业化和多样化

⑥检验液更加重视检验方法的标准化和质量控制，实施全面的质量控制和质量管理。

⑦试剂和仪器的更新使得检验更便捷：

如床边检测（pointofcaretest，POCT），使检测标本更新鲜、交叉污染率低、更接近病人的生理和病理情况。

临床检验基础的现状

（二）：

实施与保证全面质量管理

1.分析前：

生理变化、饮食因素、药物因素、标本采集与保存等。

2.分析中：

检测方法、仪器设备性能与质量、试剂质量等。

3.分析后：

发报告的把关。

复核其信息内容如姓名、性别、年龄、住院号、与疾病符合度等。

临床检验的特点：

1.操作的自动化2.方法的标准化3.技术的现代化4.试剂的商品化5.计量单位的国际化6.质量管理的全程化7.生物安全的严格化8.检验人员的合格化

绪论

临床检验医学的定义及研究范围

临床检验医学的发展史及现状

临床检验基础教学的目的

学好临床检验基础的要求

临检的基础教学目的:

1.疾病诊断和鉴别诊断2.疾病疗效监测和预后观察3.疾病预防4.科学研究

教学目标：

掌握：

皮肤采血方法，Hb成分、种类及测

定临床意义。

熟悉：

血液的组成、理化性质和功能，Hb

的结构，参考范围。

第一章chapter1血液标本采集和血涂片制备bloodcollectionandbloodsmearpreparation

血液组成

离心后（写）

血液主要理化性质

①颜色：

动脉血——鲜红色静脉血——暗红色

血浆——浅黄色高脂膳食——乳白色

溶血——血浆呈不同程度红色

②量：

成人约占体重的7%～9%，平均血量5L左右。

③pH：

7.35～7.45

④比密：

1.05～1.06

⑤渗透压：

290～310mosm/Kg·H2O

第一节血液标本采集bloodcollection

血液标本的采集是分析前质量控制的重要环节

一、标本采集的一般要求

1.检验申请单：

患者、临床信息完整

2.标本采集和处理具体要求：

标本种类标识、采集时间、急诊和危重患者信息、

3.标本信息完整性：

标本的防腐、保温等。

4.标本拒收：

根据标本接收的文件不符合者。

二、血液标本类型

1.全血（wholeblood）：

静脉、动脉、毛细血管

2.血浆（Plasma）：

全血加入抗凝剂离心后的上清液。

3.血清（serum）：

血液凝固后离心所得上清液。

4.分离或浓缩的血细胞成分：

如血小板、白细胞、单个核细胞等。

三、血液标本采集方法

（一）皮肤采血

（二）静脉采血（三）动脉采血

（一）皮肤采血法

适用于血量＜0.1ml的检验项目如RBC

计数、WBC计数、Plt计数、Hb、ESR微量法等的测定等。

器材：

采血针专用的“采血针”或三棱针，用前应高压灭菌，一人一针。

专用采血针三棱针

采血部位

（1）手指采血：

WHO推荐采取外周血以左手无名指或中指指采血部位尖内侧

优点：

方便、获较多血量结果比较恒定

缺点：

与静脉血仍存在某些差异。

（2）耳垂采血：

优点：

痛感轻、方便、适用于反复采集

缺点：

血循环差受气温影响大、检查结果不恒定、RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，特别是冬季。

（3）其他

拇指、拇趾或足跟采血——半岁以下婴幼儿

皮肤完整处——严重烧伤者

采血操作

1、准备：

2、采血部位按摩：

3、消毒皮肤：

4、针刺：

5、擦去第一滴血后吸血：

6、压住伤口片刻：

注意事项

（1）采血部位皮肤完整。

（2）无菌技术操作：

防采血部位感染，一人一针。

（3）采血针刺入皮肤应深浅适中。

（4）多项检查时，采血次序为：

Plt计数→RBC计数、Hb→WBC计数与分类。

（5）取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入堵塞仪器。

第二章chapter2血液一般检验bloodgeneralexamination

第一节红细胞检查

Redbloodcell（erythrocyte）examination

红细胞检查内容：

RBC是血液中最多的一种血细胞，其检查包括红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞形态观察、红细胞平均指数计算、网织红细胞计数、红细胞沉降率等。

形态：

无核，双凹圆盘形不染色：

呈草黄色

RBC的生成及破坏：

（见PPT）

早幼红细胞中幼红细胞干细胞原始红细胞晚幼红细胞网织红细胞成熟红细胞

一、红细胞计数（redbloodcellcount）

【原理（principle）】

血液用等渗稀释液稀释一定倍数→滴入血细胞计数盘→显微镜下计数一定范围内的RBC

数→换算得每升血液中的RBC数。

【参考范围（range）】

成年女性:

（3.5～5.0）×1012/L

成年男性:

（4.0～5.5）×1012/L

新生儿：

（6.0～7.0）×1012/L

婴儿：

（4.0～4.3）×1012/L

儿童：

（4.0～4.5）×1012/L

【临床意义（clinicalmeaning）】

一、生理性变化

（一）生理性增多

1.机体缺氧而使RBC代偿性↑：

新生儿、高原生活、强烈的体力劳动

2.成年男性比女性高：

男性在6～7岁时最低，25～30岁时达高峰。

女性21～35岁维持最低水平。

3.其他：

抽烟、肾上腺素及糖皮质激素的应用等

（二）生理性减少

1.生长发育造血原料相对不足：

从6个月至2岁婴幼儿

2.造血功能减退：

部分老年人生理性贫血

3.血容量增加：

妊娠中晚期

二、病理性变化

（一）病理性增多

1.相对增多：

血液浓缩

2.绝对性增多：

①继发性增多：

如心肺疾病②原发性增多：

如真性RBC增多症

高于6.8×1012/L应采取治疗措施

（二）病理性减少

1.RBC生成减少：

※骨髓功能衰竭：

AA※造血物质缺乏或利用障碍：

IDA、MA

2.RBC破坏过多：

※内在缺陷※外在异常

3.RBC丢失过多：

低于1.5×1012/L应考虑输血

二、血红蛋白测定Hemoglobinmeasurement

（一）Hb分子结构及成分：

血红蛋白（hemoglobin，Hb或HGB）是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。

0.347g铁相当于100gHb;每克Hb可携带1.34ml氧。

4.其它：

①还原Hb：

Fe2+

②氧合Hb：

与O2结合的Hb

③Hb衍生物：

HbCO、SHb

④高铁Hb：

Fe3+

2014年6月17日59P24

（二）Hb的测定：

ICSH（Internationalcouncilforstandardizationhaematology）推荐氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN）

1.原理:

Hb是色素蛋白，在血液中以多种形式存在，利用高铁氰化钾将Hb氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi可与CNˉ结合成氰化高铁血红蛋白，在540nm处有一吸收峰，用分光光度计测定其吸光度，换算成每升血液中血红蛋白的含量。

方法学评价

（1）氰化高铁血红蛋白测定法

优点：

①操作简单、显色稳定，便于推广。

②转化液较稳定，易保存。

③除SHb外各Hb均可测读A后直接计数。

④HiCN参考品可长期保存，便于质控。

缺点：

①KCN剧毒，易污染环境。

②不能测SHb，HbCO转化慢。

③浊度高引起Hb浓度假性增高：

高球蛋白血症，脂血，试剂混浊，WBC和Plt高。

（2）十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS－Hb）测定法

SDS能破坏WBC，摩尔消光系数未定。

（3）碱羟血红蛋白测定法：

HbF不能转化，最大吸收峰在575nm。

（4）叠氮高铁Hb测定法：

具有与HiCN法相似的优点，但仍存在试剂污染。

（5）溴代十六烷基三甲铵血红蛋白测定法：

不破坏WBC，精密度、准确性略低。

2014年6月17日65P25

4.参考值

新生儿：

170～200g/L女：

110～150g/L

男：

120～160g/L

70岁以上老年人：

男：

94～122g/L女：

87～112g/L

质量控制

（1）血清浊度：

（2）器材及试剂质量：

（3）技术与操作：

（4）废弃物的处理：

临床意义与RBC计数相似

（1）鉴别贫血类型：

IDA：

RBC↓Hb↓↓MA：

RBC↓↓Hb↓

（2）影响检验结果的因素：

血液总容量改变全身血浆容量改变

教学目标：

掌握：

血红蛋白测定的原理、Hb成分、种类及测定临床意义；网织红细胞的形态、计数

方法及测定的临床意义。

熟悉：

血涂片制备与染色、红细胞的形态学改变。

了解：

Hb测定的方法学评价。

血红蛋白测定Hemoglobinmeasurement

（一）Hb分子结构及成分：

血红蛋白（hemoglobin，Hb或HGB）是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。

第三节血涂片制备与染色preparationandstainingofbloodsmears

血涂片的制备

（一）载玻片和推片：

载玻片推片

载玻片：

清洁、干燥、中性、无油腻。

推片：

边缘光滑。

（二）血涂片制作：

良好血涂片：

①血膜至少长25mm。

②边缘整齐，两侧、两端留有空隙。

③头体尾分明：

细胞从厚区到薄区逐步均匀分布。

④血膜末端无粒状、画线或裂隙。

（三）制备血涂片的影响因素

推制适当的血膜角度大，速度快→太厚，太短

推片边缘不光整→刷尖用力不均→厚薄不匀

血量过多、血液粘度高→无尾载玻片有油腻

血涂片染色

染色就是染料透入被染物并存留其内部的过程。

1..瑞氏染色法是血液染色最经典和最常用的染色法。

2.吉姆萨染色法

3.瑞氏吉姆萨复合染色法

4.细胞活体染色法

5.巴氏染色法

6.苏木素-伊红染色法

（一）瑞氏染色法（WrightStain）

1.瑞氏染料成分：

⑴美蓝（又称亚甲蓝，methyleneblue，M+）

通常为氯盐，氯化美蓝（MCl），阳离子，一种碱性染料。

⑵伊红（eosinEˉ）：

通常为钠盐（NaE），阴离子，一种酸性染料。

⑶Wright染料

MCl+NaEME+NaCl

⑷甲醇（溶剂、固定剂）：

①MEM++Eˉ

②具有强大的脱水力。

可将细胞固定为一定形态；使蛋白沉淀为颗粒状、网状等结构；增强染色效果；

染色原理：

物理的吸附作用和化学的亲和作用

正常情况染色结果：

外观：

淡紫红色

镜下：

①RBC呈粉红色，略有碟状感。

②WBC浆中颗粒清楚，并显示各种细胞特有的色彩。

③细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。

RBC嗜碱性颗粒中性颗粒嗜酸性颗粒

3.PH对细胞染色的影响：

PH↓→正电荷增多→易与伊红结合→染色偏红

PH↑→负电荷增多→易与美蓝结合→偏蓝

染色的质量保证

染液质量

染色时间与染液浓度

染色过程

染液的冲洗

脱色与复染

4.方法学评价：

瑞氏染色法：

优点：

对于细胞质成分及中性颗粒等的染色可获得很好的染色效果，

缺点：

对细胞核的染色不如吉姆萨染色

吉姆萨染色：

原理：

同瑞氏染色。

优点：

本法对细胞核染色较好，结构更清晰。

缺点：

胞质和中性颗粒染色较差。

瑞-吉复合染色：

取长补短。

第二章chapter2血液一般检查bloodgeneralexamination

第一节红细胞检查Redblloodcellll（erythrocyte）examiinatiion

红细胞形态检查Redblloodcellllmorphollogyexamiinatiion

正常红细胞形态

正常色素性

normochromatic

异常红细胞形态

红细胞大小异常

红细胞形态异常

红细胞血红蛋白含量异常

红细胞结构及排列异常

1.RBC大小异常

小RBC大RBC巨红细胞RBC大小不均d<6umd>10umd>15um直径相差一倍以上

2.RBC形态异常：

球形RBC椭圆形RBC靶形RBC口形RBC镰形RBC

棘形RBC裂片RBC缗钱状RBC泪滴形RBC

3.红细胞内血红蛋白含量改变

正常色素性normochromatic

低色素性高色素性嗜多色性hypochromaticHyperchromaticpolychromatic

RBC中出现异常结构：

嗜碱点彩RBC染色质小体

basophilicstipplingcellHowell-Jolly’sbody

有核RBC疟原虫

卡波环

cabotringnucleatederythrocyteplasmodium

六、网织红细胞计数Retiicullocytecount

1.定义

介于晚幼红和成熟红细胞之间未完全成熟的RBC。

胞质内含尚存留多少不等的嗜碱性物

质RNA，经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成颗粒，其颗粒又可联缀成线而构成网状。

原红早幼红中幼红晚幼红网织红RBC

2.分级：

I型　　丝球型：

仅存于骨髓

II型　　　网型

III型　　　破网型：

外周血少量

IV型　　　点粒型：

多见于外周血

3.Ret计数法

（1）显微镜计数法

【原理】

阳离子染料进行活体染色，在显微镜下计数。

【试剂】

①新亚甲蓝N溶液：

②煌焦油蓝溶液：

【参考值】成人：

0.008～0.02或（25～75）×109/L新生儿：

0.02～0.06

【方法（method）和质量控制】

1混匀

1制成薄血涂片

染液新鲜2d血液2d染15~20min

数1000Ret绝对值

个RBC中计算

出分数=Ret分数×RBC/L

的Ret

（2）Ret计数仪法

（3）血液分析仪计数法

（4）流式细胞仪计数法

4.临床意义

（1）Ret增高：

表示BM红系生成旺盛

①溶血性贫血：

可高达0.20以上，急性失血后5－10天Ret达高峰，2周后恢复正常。

②放、化疗后，造血恢复时：

Ret可短暂而迅速增高。

③Ret可作为贫血治疗疗效观察指标：

※抗贫血药物治疗后1－2天开始高，1周左右达高峰，贫血愈严重，Ret升高超高，且

Ret先于RBC和Hb增高。

※抗贫血药物治疗后，Ret不升高，说明治疗无效或骨髓造血功能有障碍。

④骨髓移植后监测造血功能受抑或恢复：

移植后21天，如＞15×109/L，表示无移植并发症。

如＜15×109/L，且Plt、WBC增高，可能移植失败。

Ret减少：

表示骨髓造血机能减弱。

常见再生障碍性贫血：

Ret＜0.005

绝对值＜15×109/L，为其诊断标准之一。

※掌握内容：

静脉采血的部位、抗凝剂的使用范围、

HCT定义、临床意义,ESR定义、影响因素、

临床意义,红细胞三个平均指数的计算及意义。

※熟悉内容：

静脉采血,抗凝剂,ESR、HCT测定的方法,参考值。

※了解内容：

采血操作对检验结果的影响，血液标本运送、保存与处理。

静脉采血法Veinpunctureforbloodcollection

凡需血量较多的检查＞0.2ml

如：

ESR、Hct、凝血因子的测定等。

1.普通静脉采血法

2.真空采血法

1.普通静脉采血法

[准备器材]

[部位]体表浅静脉

常用：

肘部静脉幼儿可用：

颈外静脉

[采血操作和注意事项]

真空采血法（负压采血法）

主要原理是将有胶塞头盖的采血管抽成不同的真空度，利用针头、试管和针筒组合成全封闭的真空采血系统，实现自动定量采血。

[主要器材]

①双向采血针

②真空采血管

穿刺针　刺塞针

[主要器材]双向采血针、真空采血管

[真空采血法的优点]①计量准确②传送方便③封闭无菌④标识醒目⑤刻度清晰⑥容易保存等。

[采血方法]

※硬接式双向采血针的采血操作

※软接式双向采血针的采血操作穿刺针

刺塞针

四、血液标本抗凝bloodspecimensanticoagulation

抗凝：

用物理或化学的方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。

抗凝剂：

能够阻止血液凝固的物质。

1.乙二胺四乙酸（EDTA）盐（ethylenediaminetetraceticacid）

①原理：

与血钙离子形成螯合物。

②用量：

15g/LEDTA水溶液0.4ml：

5ml血液

③适用于：

血常规检查、Hct、Plt计数

④不适用于：

凝血象检查和血小板功能试验

2.枸橼酸钠（trisodiumcitrate）

①原理：

与血中钙离子形成可溶性螯合物

②用法：

109mmol/L与血1：

9或1：

4

③适用于：

血栓与止血检验、ESR、输血保养液。

④不适用于：

血细胞计数，Hct（不能干燥）

3.肝素（heparin）：

①原理：

加强AT-III灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶形成

②用量：

1g/L水溶液，0.5ml干燥后可抗凝5ml血液。

③适用于：

RBC脆性试验、Hct及细胞培养等。

④不适用于：

WBC和Plt计数、血涂片检查、凝血象检验。

4.草酸盐（oxalate）：

①原理：

草酸根与血液中钙离子生成草酸钙沉淀。

②用法：

0.1mol/L浓度与血液之比1：

9

③适用于：

制备正吸浆。

④不适用于：

对凝血因子V保护功能差，影响PT测定；沉淀物影响自动凝血仪的使用。

第一节红细胞检查Redblloodcellll（erythrocyte）examiinatiion

四、红细胞比容测定

红细胞比容（hematocrit，Hct或packedcellvolume，PCV）是指在一定体积全血中RBC所占容积的相对比例，与RBC数量和平均体积有关。

（一）检测方法

1.离心沉淀法：

温氏法、微量血细胞比容法

2.血液分析仪法：

（二）温氏法的试剂、器材和质量控制

长毛细滴管温氏管

血浆层

白色乳糜层

灰红色层

暗红色层

含还原HbHct

含氧RBC层

（三）方法学评价]

（四）参考值

男：

0.380～0.508　女：

0.335～0.450

（五）临床意义

1.HCT降低：

①各种贫血②稀释血症

2.HCT增高：

①血浆丢失②RBC量增加

3.临床补液量的参考：

4.用于计算MCV和MCHC

五、红细胞平均指数

1.平均红细胞容积：

（meancorpuscularvolume，MCV）RBC群体中各个RBC体积的平均值。

MCV　＝×10（fL）1fL=10ˉLRBC/L

2.平均红细胞血红蛋白含量：

（meancorpuscularhemoglobinMCH）RBC群体中各个RBC血红蛋白含量的平均值。

Hb（g/L）

MCH=RBC/L×10pg1pg=10g

3.平均红细胞血红蛋白浓度：

（meancorpuscularhemoglobinconcentrationMCHC）

平均每升RBC中含有的Hb浓度Hb（g/L）

MCHC=Hct

4.参考值:

MCV（fL）MCH（pg）MCHC（g/L）

成人80－100　　　26－34　　320－360

1～3岁　79－104　　　25－32　　280－350

新生儿　86－120　　　27－36　　250－370

2014-6-17335.临床意义

贫血的形态学分类MCV（fL）MCH（pg）MCHC（g/L）　病因

正常细胞性贫血　80－100　　27－34　320－360　急HA、AA

单纯小细胞性贫血　＜80　　　＜27　　320－360　慢性炎症

小细胞低色素性贫血＜80　　　＜27　　　＜320　　IDA

大细胞性贫血＞100＞34320－360　MA

八、红细胞沉降率测定erythrocytesedimentationrateESR

（一）定义：

指在一定条件下，离体抗全血中的RBC自然下沉的速率。

（二）魏氏法的试剂、器材和质量控制

ESR1h后

1.6ml血

0.4ml抗凝剂

三、ESR影响因素

血浆或RBC本身发生改变则使血沉发生变化。

1.血浆因素：

纤维蛋白原

球蛋白增高↑ESR加快

+-

胆固醇

白蛋白↓

—糖蛋白ESR减慢

卵磷脂

2.红细胞因素：

①RBC数量②RBC形态

ESR快

正常数量数量减少

ESR慢

3.抗凝剂影响实验温度血沉测定值校正值

4.温度的影响温度升高，ESR增快

5.血沉管因素：

血沉管倾斜30，

血沉加快30%

（四）参考值

<50岁男：

0~15mm/h

女：

0~20mm/h

（五）方法学评价

（六）临床意义：

对疾病的鉴别和动态观察具有一定的参考价值

1.生理性增快：

①女比男快

②妊娠＞3月

③＞50岁

④妇女月经期

2.病理性增快：

①组织损伤、坏死和大手术：

心肌梗塞和心绞痛鉴别。

②恶性肿瘤：

良、恶性肿瘤的鉴别。

③各种炎症：

急性细菌感染、风湿病活动期、结核病活动期等。

④高球蛋白血症：

MM、SLE、肝硬化、慢性肾炎等。

⑤高胆固醇血症：

动脉粥样硬化、糖尿病等。

3.ESR减慢:

真性红细胞增多症、RBC形态异常、低纤维蛋白原血症等。

★白细胞检验

Whitebloodcell（WBC）orLeukocyte（LEC）

外周血WBC：

RBC＝1：

（500～750）

（一）白细胞的组成：

WBC单核细胞monocyte淋巴细胞lymphocyte粒细胞granulocyte（中性粒细胞neutrocyte，NC嗜酸性粒细胞eosinophil，Eos嗜碱性粒细胞basophil，Bas）

（二）WBC起源及分布

粒细胞的发育过程

如何计数

WBC？

白细胞计数whitebloodcellcount

测定单位体积的外周血（循环池）中各种白细胞的总数。

【检测原理】

血液经一定倍数稀释并破坏红细胞→计数→换算

【试剂】

白细胞稀释液：

2%冰醋酸

冰醋酸：

溶解红细胞，同时固定核蛋白

10g/L美蓝：

数滴→可使核略为着色。

2014-6-176【器材（equipment）】

1、微量吸管：

2、血细胞计数盘：

0.1mm

【方法和质量控制】

11

混匀

稀释液血20ul充池

0.38ml

计数计算WBC/L＝N/4×10×106×20＝N/20×109

血涂片WBC密度与WBC的总数的关系

WBC血涂片WBC个数/HP

（4～7）×109/L2～4

（7～9）×109/L4～6

（10～12）×109/L6～10

（13～18）×109/L10～12

4.减少计数域误差的措施

WBC措施

＜3×109/L

扩大计数范围、缩小稀释倍数

＞15×109/L

增加稀释倍数、适当减少加血量

参考值：

成