乳腺癌HER2FISH检测判读及报告.docx
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乳腺癌HER2FISH检测判读及报告
乳腺癌HER2FISH检测-检测意义、建议及标本准备
HER2与乳腺癌
乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，正以每年3%～4%的速度急剧上升，已成为女性的第一杀手。
临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在HER2基因的扩增及蛋白的高表达。
HER2基因（又名HER2/neu，c-erbB-2）位于17q12，是表皮生长因子受体（HER）家族成员之一，HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。
HER2编码相对分子量185KD的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性。
HER2是重要的乳腺癌预后判断因子，HER2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。
HER2检测方法有免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）等。
《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南2014版》均强调：
FISH是检测HER2基因状态的金标准。
一．检测意义
1.判断预后：
HER2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。
2.指导治疗：
HER2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物（如他莫昔芬）产生耐药。
HER2基因扩增的乳腺癌患者对CMF方案不敏感，宜采用大剂量蒽环类药物和紫杉醇类药物方案；HER2基因扩增的乳腺癌患者明显受益于Herceptin（赫赛汀，2001年FDA批准上市）等靶向药物治疗。
二．检测建议
IHC和FISH检测HER2的状态一致性很高，但也存在着差异，数据统计如下表1和表2示，对于IHC2+样本必须要用FISH进一步确认结果；0、1+或3+，根据条件，可再做FISH验证。
IHC
FISH
阳性率（%）
阴性
阳性
0
1+
2+
3+
892
514
327
74
56
211
415
660
5.9
29.1
55.9
89.9
表1：
（2004）HER2AmplificationRatiosbyFluorescenceInSituHybridizationandCorrelationwithImmunohistochemistryinaCohortof6556BreastCancerTissues.ClinicalBreastCancer
表2：
2007年卫生部科教司牵头组织全国73家三级以上医院历时2年完成“荧光原位杂交技术（FISH）用于乳腺癌患者Her-2检测的临床研究”课题，检测标本达3368例
因此，《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南（2014版）》均建议先进行HER2蛋白的IHC检测，IHC2+样本进行ISH（FISH、DISH或CISH）检测。
《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》
三．样本准备：
1．标本类型：
（1）手术切除标本；
（2）粗针穿刺活检标本；（3）活检标本。
2．标本固定：
所有乳腺癌标本离体后都应尽快固定（1h内固定）。
固定时应将标本每隔5～10mm切开，并可在组织间嵌入纱布或滤纸等物。
固定液量与所浸泡组织的比例应足够。
固定时间以6—72h为宜。
3．固定液类型：
4％中性（磷酸缓冲）甲醛固定液。
4．组织切片：
（1）切片厚度3-5um；
（2）应有HE染色切片作为对照。
四．临床上哪些患者需要进行HER2检测
1.所有乳腺原发性浸润癌都应进行HER2检测；
2.只要能获取肿瘤组织，对复发灶或转移灶也应该进行HER2检测；
3.如HER2检测结果为阴性，但疾病复发且生物学行为提示可能为HER2阳性肿瘤时，应重复HER2检测；
4.如HER2检测结果与组织病理学特征不相符时，如组织学分级为I级的浸润性乳腺癌HER2阳性，应重复HER2检测。
组织学1级的类型腺癌：
•浸润性导管或小叶癌，ER和PR阳性
•小管癌（至少90%为纯小管癌）
•粘液癌（至少90%为纯粘液癌）
•筛状癌（至少90%为纯筛状癌）
•腺样囊性癌（至少90%为纯腺样囊性癌）且常为三阴性
乳腺癌HER2FISH检测-判读
一．信号观察流程
1.首先在HE/IHC切片上确认肿瘤区域；
2.在10×物镜下，于FISH标本上找到与HE染色切片上相同的组织细胞结构；
3.在40×物镜下扫描整张切片，观察是否存在异质性，要求至少找到2个浸润癌区域，计数至少20个浸润癌细胞。
满意的标本应是75%以上癌细胞核中有杂交信号；
4.在100×物镜下观察癌细胞核的FISH结果进行信号计数，注意上下调整焦距，以免遗漏信号。
二．实验失败、不能判读的情况
1.因操作等原因，细胞核被损坏，边界不完整；
2.组织过度消化，细胞核边界不完整，DAPI染色浅；
3.组织消化不足，25%以上的细胞核无信号；
4.自发荧光很强或细胞核分辨差，10%细胞核外有信号。
三．计数要求
1.计数区域可结合苏木精伊红染色进行肿瘤细胞标识；
2.选择具较好核分界的区域，要求细胞核大小基本一致、边界完整，DAPI染色均匀、核无重叠，绿色着丝粒信号清晰；
3.随机计数确定的肿瘤区域中20～30个细胞核中的双色信号，不要主观选择信号多的核计数；
4.不要计数仅显示一种颜色信号的细胞核；
5.避免计数分裂像的细胞核或被细胞核分裂及边界不完整核；
6.如果2个同样大小的橘红信号之间距离不足一个常规橘红信号大小，只计为一个信号；
7.若红、绿两信号的比值>20或众多信号连接成簇时可不计数，视为基因扩增；
8.若为临界值，则需要再计数20个细胞核中的信号或由另外一个观察者重新计数，如仍为临界值，则应在FISH检测报告中注明，或换其它方法或其它蜡块重新检测；
9.若HER2基因扩增在不同癌细胞中存在异质性时，应在另一癌区域再计算20～30个癌细胞核中的红、绿信号值，报告其最大值，并加以注释；
10.判读时可以将乳腺组织中的正常细胞（如成纤维细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、正常乳腺上皮细胞）的HER2信号和CSP17信号作为内对照。
一些常见信号类型及计数方法
[摘自乳腺癌HER-2基因检测试剂盒（FISH法）说明书—AbbottMoleularInc.]
四．结果判读
在清晰的肿瘤区域，按以上计数要求在至少20个核内计数GSPHER2（红色）和CSP17（绿色）信号，分别记录GSPHER2和CSP17的信号总数，再计算平均每个细胞HER2拷贝数、平均每个细胞CSP17拷贝数以及GSPHER2和CSP17比值。
A．若HER2/CSP17<2.0，且平均HER2拷贝数/细胞<4.0，HER2阴性；
B．若HER2/CSP17<2.0，且平均HER2拷贝数/细胞<6.0，但≥4.0时，HER2结果不确定；
C．若HER2/CSP17≥2.0，或HER2/CSP17<2.0而HER2拷贝数/细胞≥6.0，HER2阳性。
《乳腺癌HER2检测指南2014版》
《乳腺癌HER2检测指南2014版》
注：
a：
对于HER2/CSP17比值≥2.0，但平均HER2拷贝数/细胞<4.0的病例是否应该视为FISH阳性目前尚存争议，建议对这部分病例在报告中加以备注，提示目前的争议，建议临床医师参考免疫组织化学检测结果并与患者进行必要的沟通；
b：
见于均质、连续的浸润细胞，且占浸润癌的10％以上
五．HER2FISH判读标准的变化
《乳腺癌HER2检测指南2009版》判读标准：
A．若HER2/CSP17<1.8，HER2阴性；
B．若HER2/CSP17≥1.8，且<2.2，HER2结果不确定；
C．若HER2/CSP17≥2.2，HER2阳性。
新旧判读标准的比较：
①2014版新标准的截断值为2.0，2009版老标准的截断值为1.8和2.2；
②2014版新标准不只是HER2/CSP17的比值，需结合HER2基因的拷贝数进行判读；2009版则仅根据HER2/CSP17的比值进行判读，不考虑HER2基因拷贝数。
新旧判读标准衔接中可能出现的问题：
①2014版新标准出现HER2检测结果不确定的情况会比2009版标准更少；
②2014版新标准判读阴阳性结合了HER2基因的拷贝数，有些2009版标准判读结果为阴性的标本，如果HER2基因拷贝数≥6.0，2014版新标准则判为阳性。
[《乳腺癌HER2检测指南2009版》与《乳腺癌HER2检测指南2014版》]
乳腺癌HER2FISH检测-报告及结果解释
一．报告要求
《乳腺癌HER2检测指南2014版》要求检测报告包括如下内容：
患者信息（包括姓名、
性别、年龄、门诊/住院号）、送检医师姓名、送检日期、标本信息（包括病理号和蜡块号）、标本部位和类型、探针信息、检测方法、是否使用图像分析、对照设置情况、样本量是否适合评估、判读结果（包括评估的细胞数量、平均HER2拷贝数/细胞、平均CSP17拷贝数/细胞、平均HER2拷贝数/平均CSP17拷贝数的比值）、检测结论（如阳性、不确定、阴性、无法判读）。
这里强调两个概念：
17号染色体计数和HER2异质性。
1.17号染色体数目：
FISH双探针检测系统中加入CSP17探针的目的是为了在检测HER2基因的同时检测17号染色体数目，从而区分17号染色体的非整倍体与HER2基因扩增。
近年来的研究显示17号染色体多倍体与CSP17多信号点（着丝粒区多点）是不同的概念。
17号染色体多倍体较罕见，而部分乳腺癌中17号染色体上存在HER2基因和着丝粒区的共同扩增。
越来越多的学者认为，与GSPHER2/CSP17比值相比，HER2拷贝数对于HER2基因扩增的判断更为重要。
因此在HER2FISH检测结果中除报告GSPHER2/CSP17比值外，还应分别报告HER2拷贝数和CSP17的数值。
2.HER2基因的异质性：
浸润性乳腺癌中HER2表达或扩增可存在异质性。
虽然HER2基因异质性的临床意义目前仍不明确，但它可导致IHC与ISH检测、原发灶与转移灶、穿刺标本与手术切除标本的检测结果不一致。
在ISH计数之前，应观察整张切片或使用IHC确定可能存在HER2扩增的区域。
需要强调的是，即使存在异质性，但只要扩增细胞连续、均质，且占浸润癌10％以上，就应明确报告为ISH阳性。
在报告中可补充报告不同细胞群（>10％）的计数值（包括计数的细胞总数、HER2拷贝数、CSP17数值、GSPHER2/CSP17比值），并报告扩增细胞群占所有浸润癌细胞的比例。
二．常见结果及解释
FISH阴性（HER2无扩增），17号二倍体。
GSPHER2/CSP17（红色/绿色）＜2.0。
FISH临界，17号多倍体（HER2基因伴随多拷贝）。
GSPHER2/CSP17（红色/绿色）＜2.0，但平均每个细胞HER2拷贝数为4.9个，介于4.0-6.0之间。
FISH阳性，17号多倍体。
GSPHER2/CSP17（红色/绿色）＜2.0，但平均每个细胞HER2拷贝数为6.8个，大于6.0。
FISH阳性，17号染色体二倍体。
GSPHER2/CSP17（红色/绿色）≥2.0。
FISH阳性，17号染色体多倍体。
GSPHER2/CSP17（红色/绿色）≥2.0。
FISH阳性，17号染色体单倍体。
GSPHER2/CSP17（红色/绿色）≥2.0，平均每个细胞HER2拷贝数为2.0个，平均每个细胞CSP17拷贝数为1.0个。
注：
对于HER2/CSP17比值≥2.0，但平均HER2拷贝数/细胞<4.0的病例是否应该视为FISH阳性目前尚存争议，建议对这部分病例在报告中加以备注，提示目前的争议，建议临床医师参考免疫组织化学检测结果并与患者进行必要的沟通
三．报告模板参考
1.参考模板一
2.参考模板二
HER-2判读计数表
计数日期：
标本号：
细胞数
红:
HER-2
绿:
CSP17
细胞数
红:
HER-2
绿:
CSP17
1
31
2
32
3
33
4
34
5
35
6
36
7
37
8
38
9
39
10
40
11
41
12
42
13
43
14
44
15
45
16
46
17
47
18
48
19
49
20
50
21
51
22
52
23
53
24
54
25
55
26
56
27
57
28
58
29
59
30
60
HER-2总数：
平均每个细胞HER-2信号数：
CSP17信号总数：
平均每个细胞CSP17信号数：
HER-2/CSP17：
计数人：
复核人：
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