1174《生物药学》.docx

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1174《生物药学》

西南大学  网络与继续教育学院

课程代码：

  1174     学年学季：

20192

窗体顶端

单项选择题

1、基因工程菌的稳定性至少要维持在（）以上

1. 30

2. 25  

3. 40

4. 20

2、改造鼠源性单克隆抗体的首要目的是 （）

1. 降低免疫源性  

2. 延长半衰期

3. 降低相对分子量

4. 增加组织通透性

3、基因工程菌的高密度发酵过程中，目前普遍采用（ ）作为发酵培养基的碳源 

1. 葡萄糖  

2. 甘油

3. 甘露醇

4. 蔗糖

4、以下可用于菌种纯化的方法有 （   ）

1. 诱变处理

2. 富集培养

3. 高温灭菌

4. 平板划线  

5、第三代抗体是指：

（） 

1. 利用基因工程技术制备的基因工程抗体  

2. 融合细胞产生的单克隆抗体

3. 多发性骨髓瘤细胞产生的免疫球蛋白

4. B淋巴细胞合成和分泌的球蛋白

6、获得目的基因最常用的方法是：

1. 化学合成法

2. 逆转录法

3. DNA探针技术

4. PCR技术  

7、促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：

 （）

1. 人促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定

2. 人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用

3. 大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活

4. 大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化  

8、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：

（）

1. 表达产物为糖基化蛋白质

2. 表达产物为天然产物

3. 容易培养，产物提纯简单  

4. 表达产物存在的部位是在菌体内

9、外源基因在动物细胞与大肠杆菌中表达产物的主要区别是（）

1. 糖基化  

2. 疗效可靠

3. 产量高

4. 性质稳定

10、筛选杂交瘤细胞（脾-瘤融合细胞）选用的培养基是 ：

（）   

1. BME

2. RMP1640

3. HT

4. HAT  

11、鼠源性单克隆抗体改造后得到小分子抗体，常用的是（）

1. 单链抗体  

2. Fab片段抗体

3. 单域抗体

4. 最小识别单位

12、目前分离的1000多种抗生素，约2/3产自（）

1. 病毒

2. 细菌 

3. 放线菌   

4. 真菌 

13、基因表达最常用的宿主菌是：

（）

1. 大肠杆菌  

2. 枯草芽孢杆菌

3. 酵母

4. 链霉菌

14、第三代生物技术（ ）的出现，大大扩大了现在生物技术的研究范围

1. F.海洋生物技术

2. 细胞工程技术

3. 基因工程技术  

4. 蛋白质工程技术

15、发酵生产中培养基的成分是（ ）

1. 碳源硫源无机盐和水

2. 碳源氮源和水

3. 碳源氮源无机盐微量元素和水  

4. 碳源氮源碱土金属元素和水

16、人类第一个基因工程药物是：

  （）

1. 人胰岛素  

2. 乙型肝炎疫苗

3. 重组链激酶

4. 促红细胞生成素

主观题

17、细胞因子

参考答案：

由细胞分泌的能调节生物有机体生理功能，参与细胞的增殖、分化和凋亡的小分子多肽物质

18、生物药物

参考答案：

利用生物体、生物组织或其成分，综合应用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学、生物技术和现代药学的原理和方法，进行加工、制造而成的一大类用于预防、治疗和诊断疾病的制品

19、发酵工程制药

参考答案：

采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的药品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。

20、胰岛素

参考答案：

是胰脏的内分泌组织。

人的胰岛主要是由a，β和γ三种细胞组成。

a-细胞分泌胰高血糖素、β-细胞分泌胰岛素，γ-细胞分泌生长抑素。

21、基因表达

参考答案：

基因表达是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。

22、抗体药物

参考答案：

  用于治疗的单克隆抗体、抗体片段、基因工程改造的抗体、免疫偶联物以及融合蛋白均可统称为抗体药物

23、载体

参考答案：

在基因工程重DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。

三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。

24、亚单位疫苗

参考答案：

不含病原体核酸，选用能诱发宿主产生中和抗体的微生物蛋白或表面抗原而制成的疫苗。

25、人-鼠嵌合抗体

参考答案：

嵌合抗体是最早制备成功的基因工程抗体。

它是由鼠源性抗体的V区基因与人抗体的C区基因拼接为嵌合基因，然后插入载体，转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。

因其减少了鼠源成分，从而降低了鼠源性抗体引起的不良反应，并有助于提高疗效。

26、基因工程药物

参考答案：

利用DNA重组技术生产出来的药物被称为基因工程药物。

27、疫苗

参考答案：

用于人工主动免疫的生物制品。

28、多肽药物

参考答案：

多肽和蛋白质类药物指用于预防、治疗和诊断的多肽和蛋白质类物质生物药物

29、红细胞生成素

参考答案：

又称促红细胞生成素或红细胞生产刺激因子，是调节红细胞生成的主要激素。

30、生物技术制药

参考答案：

生物技术制药是指运用微生物学、生物学、医学、生物化学等的研究成果，从生物体、生物组织、细胞、体液等，综合利用微生物学、化学、生物化学、生物技术、药学等科学的原理和方法进行药物制造的技术。

31、治疗性酶

参考答案：

传统的药物分子作为受体激动剂或抑制剂也能起到酶治疗的部分效果，但是它们没有催化功能，不能介导级联反应。

酶的应用包括溶解血栓以促进灌注水平和加强对癌细胞的毒性

32、核酸药物

参考答案：

具有药理活性的天然结构的核酸类物质和人工合成合成的核酸类物质

33、单克隆抗体

参考答案：

利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物，由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体

34、按照基因重组蛋白的生产过程将中试工艺分为几个阶段：

  ，   ，  ，   。

参考答案：

细胞培养与发酵、分离纯化、原液配制、分装制剂（冻干）产品

35、发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有    、    和      。

参考答案：

发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有自然选育、诱变育种和原生质体融合。

36、核酸药物的一般分类 

（1）       ；

（2）           。

参考答案：

（1）具有天然结构的核酸类物质；

（2）天然碱基、核苷、核苷酸的类似物或聚合物

37、常用的细胞破碎方法有物理法和化学法。

物理法包括  ，  ，  ，   。

参考答案：

机械磨碎法、加压破碎法、超声波破碎法、反复冻融法

38、基因工程药物的分离纯化一般不应超过5个步骤，包括      ；         ；        ；      ；      。

参考答案：

基因工程药物的分离纯化一般不应超过5个步骤，包括 细胞破碎； 固液分离； 浓缩与初步纯化； 高度纯化和  成品加工。

39、与多数一般有机小分子药物相比，肽类药物具有     、     、     、     等突出特点。

参考答案：

活性高、用药剂量小、毒副作用低、代谢终产物为氨基酸

40、细胞因子类药物包括      、    、     、    等。

参考答案：

人干扰素、人白细胞介素、集落刺激因子、促红细胞生成素

41、PCR技术反应周期包括三个步骤：

①  ；②   ；③   ：

参考答案：

 ①高温变性；②低温退火；③适温延伸

42、基因工程下游技术则包括含有重组外源基因的生物细胞（基因工程菌或细胞）的     以及外源基因表达产物的     、     等过程。

参考答案：

大规模培养 分离纯化 产品质量控制

43、基因工程的上游技术指的是      、       。

参考答案：

外源基因重组、克隆后表达的设计与构建

44、常用的细胞破碎方法有物理法和化学法。

化学法包括   ，   ，    ，    等

参考答案：

酶处理法、表面活性剂处理法、脂溶性溶剂处理法、低渗法

45、治疗性酶的临床使用范围:

参考答案：

（1）助消化的治疗酶类

消化酶可以用于补充内源消化酶的不足，促进食物中蛋白质、脂肪、糖类的消化吸收，治疗消化器官疾病和由其他各种原因所致的食欲不振、消化不良。

（2）心血管疾病治疗酶类

心血管疾病治疗酶类是能够作用于血液循环系统的酶，临床上具有独特的抗凝、止血、扩展血管等功能。

弹性蛋白酶能够降低血脂，用于防治动脉粥样硬化。

（3）抗肿痛治疗酶类

抗肿瘤的治疗酶类，如L-门冬酰胺酶，是从大肠杆菌发酵液中提取的，是世界上第一个治疗癌症的酶，是令人瞩目的抗白血病药物，临床上用于治疗淋巴白血病和急性粒细胞白血病。

（4）其他治疗酶类

超氧化物歧化酶（SOD）用于治疗类风湿性关节炎和放射病。

PEG-腺苷脱氨酶（PEG-AdenaseBovine）用于治疗严重的联合免疫缺陷症。

DNA酶和RNA酶可以降低痰液的黏度，用于治疗慢性支气管炎。

细胞色素C用于组织缺氧急救，透明质酸酶用于药物扩散剂。

青霉素酶可以用于治疗青霉素过敏。

46、根据真核基因在原核细胞中表达的特点，表达载体必须具备那些条件？

参考答案：

表达载体必须具备下列条件：

（1）能够独立的复制；

（2）具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选；

（3）应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RAN聚合酶所识别；

（4）应具有阻遏子

（5）应具有很强的终止子

（6）所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。

47、简述生物技术药物质量控制特点 

参考答案：

（1）结构确认的不完全性

生物技术药物多数为蛋白质或多肽及其修饰物，具有分子量相对较大，结构复杂多样性和可变性等特点，通过现有的理化方法和手段不能完全确认其化学结构特征，如产品的空间构象等。

（2）质量控制的过程性

生物技术药物的结构特性容易受到各种理化因素的影响，且分离提纯工艺复杂，因此其质量控制体系是针对生产全过程，采用化学、物理和生物学等手段而进行的全程、实时的质量控制。

生产过程中每一环节或制备条件的改变均可能影响其非临床安全性评价的合理性。

（3）生物活性检测的重要性

生物技术药物的生物活性与其药效和毒性有一定或较好的相关性，因此药效学和安全性研究应关注生物活性的测定。

鉴于生物技术药物结构确认的不完全性，生物活性检测成为反映生物技术药物天然结构是否遭受破坏、生产各阶段工艺合理性和评价终产品质量控制的重要内容，也成为非临床药理毒理、药代等试验方案中剂量确定的依据。

48、列举两种亚单位疫苗

参考答案：

白喉类毒素、破伤风类毒素；流感嗜血杆菌荚膜多糖、脑膜炎球菌荚膜多糖；流感病毒血凝素和神经氨酸酶；乙型肝炎HBsAg（基因工程疫苗）；人乳头瘤病毒

49、基因工程中的载体应满足什么条件

参考答案：

（1）．能自我复制并能带动插入的外源基因一起复制；

（2）．载体分子的合适位置上必须有外源DNA插入的位点，即克隆位点，这些位点也就是限制性内切酶的切点，在载体上单一的限制性内切酶位点越多越好，这样可以将不同限制性内切酶切割后的外源DNA方便的插入载体。

（3）．具有合适的筛选标记，如抗药性基因等，以便进行重组体筛选和鉴定。

（4）.在细胞内稳定性高且多拷贝，这样可以保证重组体稳定且高效传代而不易丢失。

50、生物药物的特性

参考答案：

1）药理学特性

（1）药理活性高。

（2）     治疗的针对性强（3） 毒副作用较少，营养价值高（4）生理副作用常有发生。

2）理化特性

（1） 生物材料中的有效物质含量低，杂质种类多且含量相对较髙。

（2）     生物活性物质组成结构复杂、稳定性差。

（3） 生物材料易染菌，腐败。

（4）      生物药物制剂的特殊要求。

51、简述生物药物的药理学特性

参考答案：

1、活性强:

体内存在的天然活性物质。

2、治疗针对性强,基于生理生化机制。

3、毒副作用一般较少，营养价值高。

4、可能具免疫原性或产生过敏反应。

52、简述发酵工程制药的基本过程

参考答案：

1.菌种的选育2.培养基的配置3灭菌4.扩大培养和接种5.发酵过程6.分离提纯

53、生物技术药物质量标准的研究内容主要包括

参考答案：

（1）研究生物技术药物产品的均一性。

（2）研究建立生物技术药物产品生物学活性或者免疫学活性测定方法。

（3）研究建立生物技术药物产品的国家标准品或参考品。

（4）建立生物技术药物目标产品生产相关杂质限量分析方法和标准。

（5）在以上研究的基础上制定出保证上述生物技术药物产品安全有效并与WHO标准相一致的质量控制标准和药物分析方法。

54、基因工程制药过程中阳性克隆的筛选方法有哪些

参考答案：

1．根据重组子遗传重组表型改变的筛选法，包括利用抗生素抗性基因进行筛选

通过α互补使菌产生颜色来筛选，利用报告基因筛选克隆子；2．根据重组子结构特征的筛选法，包括琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小，限制性内切酶分析，印迹杂交方法，PCR法和DNA的序列分析；根据表达产物采用免疫化学方法筛选

55、简述基因工程的原理

参考答案：

基因工程作为现代生物技术的关键核心技术，其最终目标是外源目的基因稳定高效表达，要求研究者必须从基因工程所涉及到的一系列技术的原理加以考虑。

1．利用载体DNA在宿主细胞中独立于染色体DNA而自主复制的特性，将外源基因与载体分子重组，通过载体分子的扩增提高外源基因在宿主细胞中的剂量，借此提高其宏观表达水平，这就涉及到DNA分子高拷贝复制以及稳定遗传的分子遗传学原理。

2．筛选、修饰和重组启动子、增强子、操作子、终止子等基因的转录调控元件，并将这些元件与于外源基因精细拼接，通过强化外源基因转录提高其表达水平。

3．选择、修饰和重组核糖体位点及密码子等mRNA的翻译调控元件，强化宿主细胞中蛋白质的生物合成过程，这两点均涉及到基因表达调控的分子生物学原理。

4．基因工程菌（细胞）是现代生物工程中的微型生物反应器，在强化并维持其最佳生产效能的基础上，从工程菌（细胞）大规模培养的工程和工艺角度切入，合理控制微型生物反应器的增殖进度的最终数量，是提高外源基因表达目的产物产量的主要环节。

56、简述抗体药物的研发历史

参考答案：

第一阶段以1890年Behring发现白喉抗毒素为代表，其特点是用抗原免疫动物来获得多克隆抗体。

第二阶段以1975年Kohler创建杂交瘤技术制备单克隆抗体为代表。

1986年，美国FDA批准了世界上第一个单抗治疗性药物——抗CD3单抗OKT3进入市场，用于器官移植时的抗排斥反应，此时单克隆抗体的研制和应用达到了顶点

第三阶段以1994年Winter以基因工程方法制备人源化抗体为代表

57、简述基因工程药物的质量控制要点

参考答案：

1蛋白质含量的测定。

2蛋白质纯度检测。

3蛋白质Mr测定。

4蛋白质等电点测定。

5蛋白质序列分析。

6内毒素分析，宿主蛋白液和酸残留分析

58、简述发酵工程中的菌种选育

参考答案：

菌种选育是按照生产的要求，以微生物遗传变异理论为依据，采用人工方法使菌种发生变异，再用各种筛选方法筛选出符合要求的目的菌种。

菌种选育的目的包括改善菌种的基本特性，以提高产量，改进质量，降低成本，改进工艺等。

选育菌种的基本方法包括自然选育，诱变选育，代谢工程育种，基因定向育种，基因组改组等一系列方法。

59、简述PCR技术的基本原理

参考答案：

类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：

①模板DNA的变性：

模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：

模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：

DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

60、简述生物药物的用途

参考答案：

作为治疗药物，作为预防药物，作为诊断药物，其他生物医药用品

61、多肽类药物的功能特性

参考答案：

多肽是生物体内重要的活性成分，主要有以下生理功能和特性：

（1） 作为生理活性的调节因子，参与调节各种生理活动和生化反应；

（2） 多肽具有非常高的生物活性，在极低浓度下依然具有活性，如胆囊收缩素在千万分之一就可以发挥作用；

（3） 分子小，结构易于改造，可通过化学合成的方法生产；

（4） 活性多肽的合成过程往往是由蛋白质经加工剪切转化而来的，因此许多多肽之间具有共同的来源和相似的结构。

62、作为载体的质粒有什么特点？

参考答案：

质粒（plasmid）是染色体外能独立自主复制并遗传的环状双链DNA分子。

质粒的大小不定，一般在1kb～5kb范围内，每个质粒都有一段DNA复制起始位点的序列，它帮助质粒DNA在宿主细胞中复制，不同质粒在细胞中的复制量不同，于是质粒又有高拷贝的松弛型质粒（relaxedplasmid）和低拷贝的严紧型质粒（strengentplasmid）之分。

。

人工质粒的DNA一般在4kb左右，含一个DNA复制起始区或称复制点、二个遗传标记和一些限制性内切酶切点，一般用于克隆10kb以下的DNA片段。

63、简述单克隆抗体

参考答案：

经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌单一抗原表位的特异性抗体，是单克隆抗体。

单抗的制作过程大体分为抗原的制备，动物的免疫，b细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，筛选杂交瘤细胞，筛选能产生某种特异性单抗的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的克隆化，体外大规模培养或动物腹腔培养特异性杂交瘤细胞克隆，单抗的纯化及鉴定。

64、疫苗的发展简史

参考答案：

疫苗发展经过三阶段：

以牛痘及脊髓灰质炎疫苗为代表的减毒、灭活疫苗（天花、小儿麻痹症），为第一代疫苗，有潜在致病性；天然或重组成分为主的亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗为第二代疫苗；表达特定抗原蛋白的核酸疫苗（HIV、HBV、流感病毒、结核病毒等）为第三代疫苗。

65、简述基因工程制药的主要步骤     ；      ；     ；     ；    。

参考答案：

目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验。

66、如何控制基因工程药物质量？

参考答案：

基因工程药物的质量控制要点如下。

1蛋白质含量的测定。

2蛋白质纯度检测。

3蛋白质Mr测定。

4蛋白质等电点测定。

5蛋白质序列分析。

6内毒素分析，宿主蛋白液和酸残留分析

67、何谓治疗性疫苗。

比较治疗性疫苗和预防性疫苗的区别。

参考答案：

治疗性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的机体中，通过诱导特异性的免疫应答，达到治疗或防止疾病恶化的天然，人工合成或用基因重组技术表达的产品或制品。

治疗性疫苗与预防性疫苗的主要区别是，一、预防性疫苗主要作用于未感染机体。

而治疗性疫苗的作用对象作为曾经感染的病原体。

二、治疗性疫苗能打破机体的免疫耐受状态，预防性疫苗可通过实验室进行监测，结果可靠，而预防性疫苗可能有一定的不良反应伴有不同程度免疫损伤较为复杂且其准确性尚有争议激发免疫应答的类型不同。

68、基因工程制药主要步骤

参考答案：

（1）从供体细胞中分离基因组DNA，用限制性核酸内切酶分别将外源目的DNA和载体分子切开（简称切）；

（2）用DNA连接酶将含有目的基因的DNA片段接到载体分子上，形成DNA重组分子（简称接）；

（3）将人工重组的DNA分子导入它们能够正常复制的受体（宿主）细胞中（简称转）；

（4）短时间培养转化细胞，以扩增（amplification）DNA重组分子或使其整合到宿主细胞的基因族中（简称增）；

（5）筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞（简称检）。

（6）基因工程菌发酵，收获有目的蛋白的发酵液，采用一系列分离纯化手段从发酵液中获得高纯度的目的产物。

（7）对目的蛋白进行过滤除菌，对某些要求严格的药物而言，还需要除热原等处理。

（8）对目的蛋白进行制剂研究，并进行半成品或成品检测，检测合格后进行包装。

由上述可知，一个完整的基因工程药物的制备包括上游的基因分离、重组、转移、基因在宿主细胞中的保持、转录、翻译，以及下游的分离纯化、除菌检测等多个步骤，其中切、接、转、增、检为基因工程药物上游技术的主要操作过程，为了下游获得大量的目的蛋白，必须对上游技术进行优化。

69、综合分析生物药物和化学药物的差异，以及这些差异对药物的治疗领域和给药类型的影响

参考答案：

小分子化学药通常是化学合成的，而大分子生物药则通常是生物合成的。

源头的不同就直接造成两者在结构、成分、生产方法和设备、知识产权、配方、保存方法、剂量、监管方式以及销售方式均有不同。