分析方法转移方案审批稿.docx

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分析方法转移方案审批稿

YKKstandardizationoffice【YKK5AB-YKK08-YKK2C-YKK18】

分析方法转移方案

XXXX分析方法转移方案

XXXXXX有限公司

起草人:

________________日期:

___________

审核人:

________________日期:

___________

批准人:

________________日期:

___________

XXXXXXXX有限公司

审核人:

________________日期:

___________

批准人:

________________日期:

___________

1.目的4

2.文件编号4

3.样品4

4.分析部门4

5.时间4

6.检测项目及规格要求5

7.分析方法描述6

外观6

溶解性6

红外吸收光谱法（IR）6

紫外吸收光谱法（UV）6

液相质谱（LC-MS）7

高效液相色谱法（HPLC）7

含量8

色谱条件8

溶液配制8

进样序列8

系统适用性标准8

含量计算8

有关物质9

色谱条件9

流动相9

溶液配制9

进样序列10

系统适用性标准10

有关物质计算10

水分11

水分测试条件11

系统适用性11

样品测试11

干燥失重11

熔点12

炽灼残渣12

重金属13

溶剂残留14

色谱条件14

样品及标准溶液制备14

进样序列15

计算15

粒度15

铜离子含量16

仪器设备16

溶液的配制16

进样序列16

系统适用性标准16

8.方法转移过程17

9.总结报告17

1.

目的

XXXX有限公司对XXXX分析方法进行确认：

性状、鉴别、含量、有关物质、水分、干燥失重、熔点、炽灼残渣、重金属、残留溶剂、粒度以及铜离子含量的测定方法均参照《中国药典》2010年版二部凡例与附录方法进行测定。

2.文件编号

文件编号：

3.样品

待测样品由XXX公司提供（批号：

）。

XXXX标准品由XXX公司提供（批号：

）。

杂质对照品由XXX公司提供（批号：

）。

4.分析部门

分析部门：

XXX公司QC

XXXX有限公司QC

5.时间

2014年月日至2015年月日

6.

检测项目及规格要求

该分析方法转移的检测项目及其各项目下的规格要求如下表所示：

表各项检测项目的分析方法及其规格要求

检测项目

方法

规格

外观

目视

白色或类白色固体，无臭、无味

溶解性

目视（中国药典2010年版二部凡例）

在二氯甲烷中易溶，在甲醇中微溶，在乙腈中略溶，在水中几乎不溶

鉴别

IR（中国药典2010年版二部附录28页）

与标准品谱图一致

UV（中国药典2010年版二部附录26页）

与标准品谱图一致，λmax=244nm

LC-MS

与分子量一致（）

HPLC（中国药典2010年版二部附录36页）

主峰保留时间与标准品主峰的保留时间一致

含量

HPLC

~%

有关物质

HPLC（等度法）

杂质总和≤%，单一杂质≤%

HPLC（梯度法）

杂质总和≤%，单一杂质≤%

水分

中国药典2010年版二部附录79页，容量滴定法

≤%

干燥失重

中国药典2010年版二部附录78页

≤%

熔点

中国药典2010年版二部附录51页，第一法

194~197℃，熔程＜2℃

炽灼残渣

中国药典2010年版二部附录80页

≤%

重金属

中国药典2010年版二部附录75页，第二法

≤20ppm

残留溶剂

中国药典2010年版二部附录81页

甲醇≤3000ppm，

乙酸乙酯≤5000ppm，

乙二醇二甲醚≤100ppm，

甲苯≤890ppm，

N,N-二甲基甲酰胺≤880ppm，

二甲基亚砜≤5000ppm，

二氯甲烷≤600ppm，

正庚烷≤5000ppm

粒度

中国药典2010年版二部附录100页，第三法，湿法测定

d＜50μm,

d＜100μm

铜离子含量

ICP-OES

≤10ppm

7.

分析方法描述

外观

取一定数量的样品置于白纸上观察，描述其颜色、结晶性与气味，如果需要，可以使用光学显微镜观察（晶体或结晶性粉末等）。

溶解性

按照《中国药典》2010年版二部凡例中的试验方法进行溶解度检查：

称取研成细粉的供试品，于25±2℃条件下，转移至一定容量的溶剂（乙腈、甲醇、二氯甲烷、水）中，每隔5分钟强力振摇30秒，观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒时，即为完全溶解。

红外吸收光谱法（IR）

按照《中国药典》2010年版二部附录28页的红外分光光度法规定操作：

开启除湿机，控制房间湿度40%以下；以聚苯乙烯膜校正波长；取1g干燥的溴化钾，在玛瑙研钵中研磨后快速压片，扫描空白；再称取10mg样品加入到研钵中与溴化钾混合研磨并压片，立即扫描。

紫外吸收光谱法（UV）

按照（《中国药典》2010年版二部附录26页）的紫外-可见分光光度法规定操作：

开启仪器稳定半小时；用钬玻璃校正UV的波长。

准确称取3mg的样品到10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；必要时用滤膜（μm）滤过；以甲醇扫描空白后，取少量样品溶液润洗比色皿。

装样扫描，记录其最大吸收波长（λmax）与最大吸收波长处的吸光度（Abs）。

液相质谱（LC-MS）

液相色谱条件：

色谱柱型号

XDB-C18×50mm×μm或相当的柱子

UV检测波长

A：

254nm；B：

220nm

流速

ml/min

柱子温度

40℃

进样体积

μl

运行时间

min

流动相

A：

%TFA水溶液；B：

%TFA乙腈溶液

梯度条件：

时间（min）

A

B

配样溶剂

乙腈

样品溶液浓度

mg/ml

进样序列

配样溶剂1针；样品溶液1针

质谱参数设置：

离子源

EI-API

干燥气温度

250℃

干燥气流速

10l/min

雾化器压力

35psig

毛细管电压

3000V

扫描范围

~900.00m/z

高效液相色谱法（HPLC）

HPLC条件参照含量测定条件。

对比含量测定项下记录的色谱图中样品溶液主峰的保留时间与标准品溶液主峰的保留时间。

含量

按照《中国药典》2010年版二部附录36页的高效液相色谱法规定进行检测：

7.7.1色谱条件

HPLC系统

Agilent1260或相类似带PDA检测器设备

色谱柱型号

XDB-C185μm，×150mm或相当的柱子

UV检测波长

244nm

流速

ml/min

进样体积

10μl

柱子温度

30℃

运行时间

25min

流动相

A:

水B：

乙腈=（37：

63）等度洗脱

配样溶剂

乙腈

7.7.2溶液配制

样品溶液：

准确称取mg的样品到25ml的容量瓶中，乙腈溶解，定容，摇匀；精密量取该溶液1ml至25ml容量瓶中，乙腈定容，摇匀即得。

平行制备两份。

工作标准溶液：

准确称取mg的XXXX标准品到25ml的容量瓶中，乙腈溶解，定容，摇匀；精密量取该溶液1ml至25ml容量瓶中，乙腈定容，摇匀即得。

平行制备两份，用于系统适用性，核对标准及过程控制（PCS）

7.7.3进样序列

配样溶剂至少1针，系统适用性5针，核对标准溶液2针，PCS1针，样品溶液各1针，PCS1针。

7.7.4系统适用性标准

配样溶剂色谱图中没有与XXXX保留时间相同的色谱峰；

理论板数按主峰计算应不低于3000；

连续5针工作标准溶液色谱图中主峰峰面积的%RSD≤%；

核对标准溶液的相应系数与工作标准溶液的相应系数的比值必须在~%之间。

7.7.5含量计算

以干燥品计算XXXX的含量，计算公式如下式

（1）所示：

含量（%）=Asamp/Astd×Wstd/（Wsamp（100-Water））×Pstd×100%

（1）

式

（1）中，Asamp=样品溶液主峰面积；

Astd=标准溶液主峰面积；

Wsamp=样品质量（mg）；

Wstd=标准品质量（mg）；

Pstd=标准品纯度（%）。

有关物质

按照《中国药典》2010年版二部附录36页的高效液相色谱法规定进行检测：

7.8.1色谱条件

HPLC系统

Agilent1260或相类似设备

色谱柱型号

XDB-C18，×150mm×5μm或相当的柱子

UV检测波长

244nm

流速

ml/min

进样体积

10μl

柱子温度

30℃

运行时间

25min

流动相

A:

水B：

乙腈；分等度与梯度两种条件

配样溶剂

乙腈

7.8.2流动相

等度条件：

A:

水B：

乙腈=（37：

63）

梯度条件：

时间（min）

A

B

7.8.3溶液配制

供试品溶液：

准确称取mg的样品到25ml的容量瓶中，乙腈溶解，定容，摇匀即得，作为供试品溶液。

对照溶液：

精密量取样品溶液1ml至100ml容量瓶中，乙腈定容，摇匀；作为对照溶液。

工作标准溶液：

准确称取mg的XXXX标准品至25ml容量瓶中，乙腈溶解，定容，摇匀作为标准溶液储备液，精密量取该1ml储备液至100ml容量瓶中，乙腈定容，摇匀，作为工作标准溶液用于系统适用性及过程控制（PCS）。

定量限溶液：

精密量取样品溶液1ml至100ml容量瓶中，乙腈定容，摇匀；再精密量取该溶液5ml至100ml容量瓶中，乙腈定容，摇匀，作为定量限溶液。

分离度溶液：

取少量杂质：

2-（5-对甲苯基-1H-咪唑-1-基）-5-甲磺酰基吡啶，以样品溶液溶解，摇匀并稀释作为分离度溶液。

7.8.4进样序列

配样溶剂至少1针，%定量限溶液1针，分离度溶液1针，对照溶液1针，系统适用性溶液6针，供试品溶液2针，PCS1针。

7.8.5系统适用性标准

配样溶剂色谱图中没有与XXXX和样品溶液中杂质保留时间相同的色谱峰；

理论板数按主峰计算应不低于3000；

分离度溶液中主峰与已知杂质的分离度应大于

%定量限溶液中主峰的S/N≥10；

7.8.6有关物质计算

XXXX有关物质的计算公式如下式

（2）、（3）所示：

单杂%=Aimp/Astd×100%

（2）

总杂%=∑Aimp/Astd×100%（3）

式

（2）、（3）中，Aimp=供试品溶液中单个杂质的峰面积；

Astd=自身对照溶液中主峰峰面积；

∑Aimp=供试品溶液中所有杂质峰面积之和。

水分

按照《中国药典》2010年版二部附录79页的容量滴定法规定进行测试：

7.9.1水分测试条件

溶剂：

甲醇（加入一定量的二氯甲烷助溶）

滴定液：

卡尔费休滴定液5

仪器：

卡尔费休容量法滴定仪

7.9.2系统适用性

开启房间除湿机，控制房间湿度40%以下。

用定量的标准水确认，平行测定3次。

3次标准水水分的回收率在%~%，RSD%≤%。

7.9.3样品测试

系统适用性符合标准时，装~0.5g样品至固体进样器中，清零，注入滴定池，输入样品质量，开始滴定。

待读数显示，记录结果。

平行测定两份，取其平均值。

干燥失重

按照《中国药典》2010年版二部附录78页的干燥失重法规定进行检测：

准确称取1.0g样品均匀的铺于已经恒重的称量瓶中，放入电热鼓风干燥箱中于105℃下烘约4h，立即放入干燥器中冷却至常温，30min后立即取出称量，再次放入105℃下干燥1h，取出放入干燥器中冷却至常温，30min后取出立即称量，直至恒重（恒重接受标准：

不得超出mg），平行测定两份，取其平均值。

计算公式如下式（4）所示：

LOD=（W1-W2）/（W1-W0）×100%（4）

式（4）中，W0=恒重之称量瓶重量；

W1=烘前称量瓶+样品重量；

W2=恒重重量。

熔点

按照《中国药典》2010年版二部附录51页第一法规定进行测定：

测试样品准备：

取测试过干燥失重的样品适量，研细，放入熔点测定毛细管中，将毛细管置于长60cm的空心管中自由落下多次，使样品填实。

样品高度约为3mm。

测试过程：

将样品放入熔点仪中，180℃以前快速升温，在温度达到180℃时，调节升温速率为1.0℃/min。

记录样品初熔至全熔的温度。

重复测定3次，取三次测定之平均值。

炽灼残渣

按照《中国药典》2010年版二部附录80页的炽灼残渣法规定进行检测：

开启马弗炉，设定600℃，开启天平室除湿机，控制房间湿度40%以下；

将两只坩埚置于马弗炉中灼烧30min，立即称定空坩埚重量，再次置于马弗炉中灼烧30min，干燥器中冷却30min，立即称定空坩埚重量，直至恒重；

立即在空坩埚中加入1.0g样品后，再次精密称定；

在封闭电炉上缓缓加热至样品烧焦，注意样品加热时不得溢出；放冷至室温，加硫酸1ml使残渣润湿，放在封闭电炉上继续炭化，直至无硫酸烟冒出，注意样品加热时不得溢出；放入600℃马弗炉中灼烧完全，取出置于干燥器中冷却30min，立即称定重量；再次放入马弗炉中灼烧30min，取出置于干燥器中冷却30min，立即称定其重量。

平行测定两份，取其平均值。

计算公式如下式（5）所示：

ROI=（W2-W0）/（W1-W0）×100%（5）

式（5）中，W0=恒重之空坩埚重量；

W1=炽灼前坩埚与样品重量之和；

W2=炽灼后恒重。

重金属

按照《中国药典》2010年版二部附录75页的第二法规定进行检测：

样品配制：

取中炽灼过之残渣加硝酸ml，蒸干，至蒸汽除去后，放冷；加入盐酸2ml，置于水浴上蒸干；再加15ml纯化水，滴入氨试液至酚酞指示液显微粉色；再加入2ml醋酸盐缓冲液（pH=），微热溶解后，移至纳氏比色管中，加水稀释至25ml。

铅标准液配制：

取铅储备液5ml，加纯化水稀释至50ml（10μg/ml）

测定前，取一空白坩埚按上述样品残渣处理方法处理后，加15ml纯化水和2ml醋酸盐缓冲液微热溶解后，移至纳氏比色管中，加入1ml铅标准液后，加纯化水稀释至25ml；

测定：

在样品管和标准管中分别加2ml硫代乙酰胺试液，放置2min。

将样品及标准液同置于白纸上，自上向下透视，比较其颜色，样品颜色应不深于标准液颜色。

溶剂残留

按照《中国药典》2010年版二部附录36页的残留溶剂测试方法规定进行检测：

7.14.1色谱条件

GC参数设置：

柱子型号

DB-624，30m×0.53mm×μm或相当的柱子

检测器

FID

模式

分流比10:

1

进样口温度

230℃

检测器温度

300℃

程序升温

40℃保持2min，6℃/min升至80℃（保持1min）,20℃/min升至220℃（保持2min）

运行时间

19min

流速

恒流ml/min

总流速

40ml/min

氢气流速

30ml/min

空气流速

300ml/min

尾吹流速N2

30ml/min

顶空进样器参数：

定量环体积

1ml

炉温

115℃

定量环温度

180℃

传输线温度

200℃

振摇模式

Low

样品平衡时间

20min

顶空加压时间

min

定量环加载时间

min

定量环平衡时间

min

进样时间

1min

GC程序时间

25min

顶空压力

15psi

7.14.2样品及标准溶液制备

稀释剂：

N-甲基吡咯烷酮（NMP）

标准储备液配制：

分别称取mg二甲基亚砜，mg正庚烷，mg乙酸乙酯，mg甲醇，mg二氯甲烷，mgN,N-二甲基甲酰胺，mg乙二醇二甲醚和mg甲苯至同一100ml容量瓶中，用NMP溶解，定容，混匀待用。

标准溶液配制：

精密量取ml标准储备液至一100ml容量瓶中，用NMP定容，混匀密封即得。

样品溶液：

准确称取mg样品至一20ml顶空瓶中，加入5mlNMP溶解，密封混匀，平行制备两份。

7.14.3进样序列

稀释剂5针，标准溶液2针，样品溶液各一针。

7.14.4计算

按照下列公式（6）计算各溶剂的含量（扣除空白中的峰）：

溶剂残留量（ppm）=Aspl/Astd×Cstd/Wspl×DFspl×106（6）

式（6）中，Aspl=样品中各溶剂的峰面积；

Astd=平行两针标准液中各溶剂的峰面积的平均值；

Cstd=标准溶液中各溶剂的浓度（mg/ml）；

Wspl=样品重量（mg）；

DFspl=样品的稀释体积（5ml）。

粒度

参照《中华人民共和国兽药典》二部（2010年版）附录98页粒度和粒度分布测定法第三法（光散射法）湿法进行测定：

称取本品400~500mg，置于玻璃样品瓶中，加1%吐温80的水溶液~ml，震荡使固体充分润湿，后加纯化水8~10ml摇匀后得混悬液，备用。

将800ml纯化水作为分散剂，放入激光粒度仪湿法进样器容器中，同时以2500rpm的泵速进行搅拌并消除气泡，之后开启测量，空白背景进行测量12秒。

然后将混悬液加入至分散剂中，直到遮光度达到10%~20%之间。

再用仪器内置超声将待测样品超声1分钟，之后开启测量，对样品进行粒度分布测量12秒。

每份样品在仪器中循环测量3次，并得到平均测量结果。

每个样品重复测量两次。

铜离子含量

7.16.1仪器设备

电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）

7.16.2溶液的配制

稀释剂（空白溶液）：

准确量取5ml浓盐酸到245ml二甲基亚砜中，混合均匀即得（二甲基亚砜：

浓盐酸=98:

2）。

储备液：

准确量取ml铜标准试液（1000μg/ml）至100ml容量瓶中，稀释剂溶解定容，混匀，浓度为10μg/ml（相对0.05g/ml的样品溶液是20ppm）。

线性溶液：

溶液

进样

储备液体积

（μl）

定容体积

（ml）

铜浓度

（μg/ml）

铜含量

（基于原料药

0.05g/ml）

1

1

空白溶液

10

0

0

2

1

250

10

5ppm

3

1

500

10

10ppm

4

1

750

10

15ppm

5

1

1000

10

20ppm

样品溶液：

准确称取0.5g的样品，置于10ml容量瓶中，稀释剂溶解定容，混匀，平行制备3份，取其平均值。

7.16.3进样序列

每个线性溶液各1针，空白溶液1针，样品溶液各1针。

（注：

根据需要，序列中可随时插入空白溶液。

）

7.16.4系统适用性标准

空白溶液中没有影响铜发射光谱积分的干扰峰；线性溶液的线性相关系数≥；定量限≤μg/ml；三个样品测试结果的RSD%≤%。

8.

方法转移过程

XXXX与XXX双方公司的QC人员均按照7节中的分析方法对XXXX的性状、鉴别、含量、有关物质、水分、干燥失重、熔点、炽灼残渣、重金属、残留溶剂、粒度以及铜离子含量进行分析确认，所有测定项目均使用同一批样品（批号：

）。

各项检测的结果必须确保在规格范围之内，而且双方公司的结果偏差必须在一定的接受范围之内，如下表所示：

表各项分析结果偏差接受标准

检测项目

结果偏差接受标准

含量

有关物质

水分

干燥失重

熔点

炽灼残渣

残留溶剂

粒度

铜离子含量

9.总结报告

所有检测项目测试结束后需将所有分析数据和相关图谱汇总成XXXX分析方法转移报告，并报于XXX进一步确认。

待XXXX所有分析结果得到XXX的认可后，由XXX完成XXXX分析方法转移的总结报告，双方对该方法转移的总结报告达成共识后，XXXX的分析方法转移结束。

另外，所有与该分析方法转移方案不同的部分必须在分析方法转移报告及总结报告中说明。