子任务4实施方案浙江中医药大学发酵法制备N乙酰氨基葡萄糖关键技术研究与应用.docx
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子任务4实施方案浙江中医药大学发酵法制备N乙酰氨基葡萄糖关键技术研究与应用
海洋公益性行业科研专项经费项目
子任务实施方案
项目名称:
基于海洋微生物发酵的新产品开发技术研究与应用
子任务名称:
发酵法制备N-乙酰氨基葡萄糖关键技术研究与应用
子任务编号:
2-4
项目承担单位:
国家海洋局第三海洋研究所
项目子任务承担单位:
浙江中医药大学
国家海洋局
二○一四年八月
项目子任务信息表
项目名称
基于海洋微生物发酵的新产品开发技术研究与应用
项目编号
2
子任务名称
发酵法制备N-乙酰氨基葡萄糖关键技术研究与应用
子任务编号
2-4
子任务承
担
单
位
信
息
单位名称
浙江中医药大学
通讯地址
浙江省杭州市滨文路548号浙江中医药大学
邮政编码
310053
联系人
姓 名
程汝滨
处（室）
药学院
职务
副研究员
联系电话
5
传真
6
手机
电子信箱
项目起始时间
2015.1
项目完成时间
2018.12
实施年限
4年
项目子任务
经费预算
196万元
财政拨款
196万元
其他财政拨款
万元
单位自有货币资金
万元
其他资金
万元
子任务负责人
姓名
程汝滨
出生日期
1982.3.11
学位
■博士□硕士□学士□其他
性别
男
职称
副研究员
专业
海洋药物
所在单位
浙江中医药大学
身份证号码
手机号码
办公电话
5
电子邮箱
参加人数
11人。
其中：
高级3人，中级2人，初级人，其他6人；
博士6人，硕士5人，学士人，其他人。
累计工作时间
242人月
研究类型
□行业应用基础研究□行业重大公益性技术前期预研
■行业实用技术研究开发□国家标准和行业重要技术标准研究
□计量、检验检测技术研究
创新类型
□自主创新■集成创新□引进消化吸收再创新
预期成果与
应用类型
■形成专利□形成国家标准和行业重要技术标准
■形成实用技术自主研发能力□局部试点示范
□业务化运行□较大范围推广应用□研究报告
□形成海洋开发与管理应用理论或公益技术□论文论著
研究内容
（200字以内）
建立稳定的N-乙酰氨基葡萄糖合成相关基因的异源表达和功能评价技术，从海洋生物中挖掘潜在的高效氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶基因；通过微生物遗传育种的方法，获得高产N-乙酰氨基葡萄糖的发酵生产菌株；在此基础上优化培养基组成、发酵温度和时间等条件，建立微生物发酵法生产N-乙酰氨基葡萄糖的新工艺，在100L级的发酵罐中进行中试研究；以多种提取技术相结合，建立高效快速的N-乙酰氨基葡萄糖的提取和纯化技术。
考核指标
（200字以内）
1.从海洋生物中克隆获得高效N-乙酰氨基葡萄糖合成相关功能基因2-3个；
2.通过微生物遗传育种改良技术，获得N-乙酰氨基葡萄糖的高产菌株4株以上；
3.获得100L级N-乙酰氨基葡萄糖发酵中试工艺技术，5d培养获得N-乙酰氨基葡萄糖30g/L以上；
4.建立稳定高效的N-乙酰氨基葡萄糖的分离提取和纯化技术，提取率达到90％以上；
5.获得纯度90%以上的N-乙酰氨基葡萄糖样品2kg；
6.申请发明专利2项。
编写说明
1．本实施方案由项目子任务承担单位负责编写。
2．编写要求：
（1）总体目标、年度目标要完整、集中、明确、可考核，要充分考虑经济、技术等方面的可行性；
（2）研究任务和内容重点突出，技术路线清晰，技术关键点与创新点明确；
（3）项目子任务的组织实施管理等符合项目的特点，配套条件要保障落实，措施具体；
（4）经费预算根据充分，符合规定。
3．报告涉及到外文缩写要注明全称。
4．方案文本采用A4幅面纸，小四号宋体字打印，标题用小四号黑体字打印，表格用五号宋体字打印，行距25磅，页码居中，按项目编号顺序附项目实施方案后合并装订，由项目承担单位和项目子任务承担单位盖章后报国家海洋局海洋科学技术司，同时报送电子版本。
5、其他说明：
（1）《海洋公益性行业科研专项经费项目信息表》“子任务承担单位信息－联系人”指项目子任务承担单位科技处相关负责人。
（2）承担单位意见和项目子任务承担单位意见必须加盖法人单位公章，二级学院或重点实验室等盖章无效。
（3）子任务编号格式为“项目编号—1”、“项目编号—2”，依次顺延。
项目子任务实施方案填报内容
一、项目及项目子任务概述
海洋公益性行业科研专项“基于海洋生物发酵的新产品开发技术研究与应用”面对海洋生物资源可持续利用产业发展需求，依托海洋生物发酵工程技术，围绕海洋生物活性产物规模化制备关键技术，研究开发新技术、新工艺和新制品，提升我国海洋活性产物领域的技术创新能力和研究水平，形成系列海洋活性产物成套技术和产品。
项目选择应用价值高、市场前景好的S-腺苷甲硫氨酸、隐甲藻胞外免疫多糖、N-乙酰氨基葡萄糖、岩藻黄素、褐藻胶改性专用裂解酶和苹果酸脱氢酶等重要海洋功能产物，利用现有的种质遗传改良技术，对目标菌（藻）株进行诱变育种和活性物质调控，从而有效提升海洋生物（微藻）活性产物的产量；建立活性产物生产菌（藻）株的种质改良、规模化发酵、分离提取和检测、活性控制、应用示范等共性关键技术研发链条；着力突破中试工艺技术瓶颈，实现从实验室研发到生产应用的连接，构建海洋生物（微藻）规模化发酵和分离提取的中试研发平台，实现目标产物高效、经济培养；建立目标产物分离提取和检测等关键技术，实现绿色清洁生产；对开发的新产品进行功能、活性、质量和安全性评价，为其产业化生产奠定基础。
形成市场前景广阔、具有自主知识产权的成果，开发出多项产业化前景显著的高附加值产品。
“发酵法制备N-乙酰氨基葡萄糖关键技术研究与应用”作为海洋公益性行业科研专项“基于海洋生物发酵的新产品开发技术研究与应用”项目的子任务之一，主要针对当前N-乙酰氨基葡萄糖发酵生产过程中的共性问题，通过海洋生物中高效的氨基葡萄糖合成相关功能基因的挖掘技术、微生物遗传育种改良技术、发酵工艺的优化和控制和稳定快速的提取分离和纯化技术等多个环节的开发与应用，建立稳定的N-乙酰氨基葡萄糖合成相关功能基因的异源表达和活性评价体系，从海洋生物中挖掘潜在的高效氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶基因；通过微生物遗传育种的方法，构建获得高产N-乙酰氨基葡萄糖的发酵生产菌株；在此基础上，通过葡萄糖流加和溶氧控制等技术，建立微生物发酵法生产氨基葡萄糖的新工艺，并在100L级的发酵罐中进行中试研究；以分子蒸馏法、离子交换发和膜分离等技术有机结合，建立高效快速的氨基葡萄糖的提取和纯化技术；并最终获得N-乙酰氨基葡萄糖样品2kg。
，并申报发明专利2项。
本子任务由浙江中医药大学牵头，国家海洋局第三海洋研究所参与共同完成。
子任务经费共204万元，投入工作量共236人月。
二、必要性及需求分析
1．必要性
N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）在体内具有重要的生理作用，如参与肝肾解毒，发挥抗炎、护肝的作用；作为抗菌消炎药物，治疗风湿性关节炎和胃溃疡等。
目前主要的生产方法为甲壳素水解法。
水解法消耗大量的酸碱，腐蚀设备，环境污染严重，纯化工艺复杂，产品有鱼腥味，存在过敏效应。
相对于甲壳素水解法，微生物发酵法生产不受资源限制，对环境污染小，产品无鱼腥味，不存在过敏效应。
氨基葡萄糖作为一种市多年的骨保健产品，无疑会有良好的发展前景。
GlcNAc广泛存在于真菌细胞壁及虾蟹的外骨骼中，是甲壳素与壳聚糖的组成成分。
在自然界中，细菌、酵母、真菌、植物及动物体内也广泛存在GlcNAc。
GlcNAc也是糖蛋白和蛋白聚糖的主要成分，在人与动物的关节软骨组织中起着重要作用，并大量存在人类眼睛晶状体中。
早在20个世纪60年代，GlcNAc就已被大量用于骨关节炎的治疗。
研究表明，它能够有效作用于软骨组织治疗风湿性关节炎，其次对白血病癌细胞具有抑制作用，并有消炎护肝的功效。
GlcNAc在食品保健领域也有着广泛的应用，在一些欧美国家GlcNAc被视为天然无害的食品及保健品配料而得到大量推广，而目前国内相关产品较少。
目前，生产GlcNAc的方法主要有3种，即酸水解法、酶解法及微生物发酵法。
前两种方法的生产原料基本上来源于虾蟹的外骨骼，即从虾蟹壳中提取甲壳素与壳聚糖，再经酸解或酶解获得GlcNAc。
高浓度的盐酸在一定的反应条件下能够将虾蟹壳中的甲壳素与壳聚糖降解为GlcNAc，但由于浓盐酸的大量使用会带来严重的环境问题，将逐步受到国家相关政策的限制；酶解法是利用壳聚糖酶对虾蟹壳进行降解，现在面临的最大问题是生产效率低下，表现为壳聚糖酶价格较高、转化时间较长及生产成本较高。
且来源于虾蟹壳的GlcNAc在临床应用过程中会引起过敏体质患者的过敏反应。
所以微生物发酵法生产GlcNAc得到了越来越多研究者的关注。
相较于酸水解法与酶解法，微生物发酵法生产GlcNAc具有以下优点：
消除了地域季节对原料来源的限制，产品无鱼腥味；生产周期短，强度高；对环境污染较小；不产生过敏反应。
目前，国内外对微生物发酵法生产GlcNAc的研究相对较少，相关产业尚未形成工业化生产规模。
本项目将通过海洋高效功能基因的挖掘、微生物遗传育种改良、发酵工艺优化和控制和提取分离和纯化技术的研究，提高乙酰氨基葡萄糖的发酵产量，对乙酰氨基葡萄糖的发酵生产有一定的指导和借鉴意义。
2．需求分析
N-乙酰氨基葡萄糖存在于所有生物体中，在人体中是透明质酸、硫酸软骨素及硫酸角质素等葡糖胺多糖的二糖单元前体。
N-乙酰葡萄糖胺特异性地作用于关节软骨，对于维持软骨的健康和正常的关节功能具有重要作用；N-乙酰葡萄糖胺可以增加皮肤中透明质酸的含量；此外N-乙酰葡萄糖胺还是合成N-乙酰神经氨酸的前体物质。
骨关节炎是目前非常普遍的一种疾病，给人们健康生活质量带来了巨大危害。
N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）具有人体关节软骨再生和润滑的作用，NIH项研究发现，GlcNAc和软骨素复合物对于中度和重度的膝骨关节炎患者来说疗效显著。
在欧洲和美国GlcNAc被广泛用作减轻骨关节炎疼痛和残疾的药物。
在美国，GlcNAc及其复合物作为食品保健品拥有多达数十亿美元的市场；在欧洲，GlcNAc作为处方药也具有同等大的规模。
目前，GlcNAc主要是以酸水解虾蟹类、贝壳类等外骨骼中几丁质的方法获得。
传统方法一方面其严格的酸性环境并可能对葡萄糖环进行化学修饰，更为严重的是贝壳类来源的GlcNAc可能会引起人们的过敏反应，安全性值得考虑。
另外，工业化大量生产还受到原材料等方面的限制。
近几年，国内GlcNAc消费需求量迅速激增，建立一种低成本、安全、高效生产GlcNAc的方法无疑具有广阔的市场前景。
与传统方法相比，微生物发酵生产GlcNAc具有环境污染少、原料供应稳定和无致敏因素等诸多优势。
目前N-乙酰葡萄糖胺的化学法水解环境污染严重，水解几丁质的酶合成量低，不利于工业化生产。
微生物发酵因其发酵周期短、产量高引起了越来越多的关注。
三、国内外技术现状、发展趋势
N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）是一类重要的氨基单糖，氨基连接在葡萄糖环的2号位的C上，是黏多糖和几丁质的主要组成成分，广泛地分布于细菌、酵母菌、丝状真菌、植物和动物体内。
在人体内，氨基葡萄糖是糖胺聚糖的二糖单位前体，而这些糖胺聚糖是组成黏膜分泌物、结蹄组织、皮肤、肌腱、软骨和韧带等必不可少的成分。
GlcNAc在保健食品和医药领域具有广泛应用，如能特异性地作用于关节软骨，有效治疗风湿性关节炎；可抑制白血病细胞K562的生长；可参与肝肾解毒，发挥抗炎、护肝的作用等。
在日本和美国，GlcNAc作为食品配料得到广泛应用。
但目前国内上市的GlcNAc产品还比较少，因此相关产品的开发空间和潜力巨大。
相对于水解法和生物转化法，微生物发酵法具有以巨大的优势。
在微生物体内GlcNAc合成代谢途径现在研究已经较为明确。
首先以葡萄糖作为地物，进入细胞内的葡萄糖在磷酸葡萄糖异构酶（PGI）的催化下转化成6-磷酸葡萄糖，后者在氨基葡萄糖合成酶（GlmS）催化下生成氨基葡萄糖（GlcN），氨基葡萄糖乙酰化酶（Gna1）催化GlcN转化成乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）。
乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）经弱酸的处理后会得到氨基葡萄糖。
由于GlcNAc依靠甘露糖磷酸转移系统（MannosePTS，IIMan，由manXYZ操纵子编码）和葡萄糖磷酸转移系统（glucosePTS，IIGlc，由pstG基因编码）对其进行磷酸化后从胞外向胞内进行转运，GlcNAc依靠排出胞外的氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖经过manXYZ转运途径进入到胞内IIMan和乙酰氨基葡萄糖磷酸转移系统（GlcNAcAcPTS，IINAG，由基因nagE编码）对其进行磷酸化后从胞外向胞内转运，导致氨糖产量降低。
因此，要想在胞外积累高浓度的GlcNAc或GlcN，就必须减弱或阻断GlcNAc或GlcN从胞外到胞内的转运。
氨基葡萄糖合成酶（GlmS）和氨基葡萄糖乙酰化酶（Gna1）作为N-乙酰氨基葡萄糖生物合成过程中的重要调控基因，其表达水平和活力对氨基葡萄糖的发酵产量具有重要影响。
在大肠杆菌中，由谷氨酰胺作为氨基供体，6-磷酸果糖在氨基葡萄糖合成酶（GlmS）的催化作用下，生成GlcN，该步是GlcNAc合成途径中第一个限速反应。
GlmS属于变构酶，作为细胞壁合成途径的关键酶，GlmS存在于几乎所有的原核和真核细胞里，在原核生物如大肠杆菌中，该酶呈同型二聚体结构，而在真核生物细胞中，该酶呈四聚体结构。
GlmS严重受该合成途径代谢产物如氨基葡萄糖-6-磷酸（GlcNAc6P）和UDP-乙酰化氨基葡萄糖的反馈抑制，因而GlcNAc在正常的代谢合成中不能大量积累。
GlmS和Gnal作为N-乙酰氨基葡萄糖生物合成过程中的关键限速功能基因，其来源多位为传统的大肠杆菌、酵母菌和陆生真菌，其催化的效率不高。
在海洋生物中存在大量的新颖高效的功能基因，且葡萄糖胺的含量在海洋生物中比陆生生物的要高，提示可能存在高活性的氨基葡萄糖生物合成的相关功能基因。
本项目通过对海洋生物中高效氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶基因的挖掘和功能评价，通过微生物遗传育种的方法建立高产氨基葡萄糖的发酵菌株，并对其发酵条件和提取工艺进行优化，提高N-乙酰氨基葡萄糖的发酵产量、提取率和产物纯度。
四、项目子任务研究目标及主要研究任务
1.项目子任务研究目标
1）总体目标
通过改变N-乙酰氨基葡萄糖的制备途径，开发微生物发酵法生产N-乙酰氨基葡萄糖的关键技术，克服当前传统制备方法的环境污染严重、原料来源限制和过敏反应等问题，达到降低N-乙酰氨基葡萄糖的生产成本、减少环境污染和保护海洋生态的目标。
2）年度目标
2015.1-2015.12
筛选获得具有潜在N-乙酰氨基葡萄糖合成功能基因的海洋生物30株以上；根据基因的保守序列，设计氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶的简并引物，完成PCR扩增条件的优化和RACE技术，获得海洋生物来源的N-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因6个以上；
2016.1-2016.12
建立完善的氨基葡萄糖合成酶和乙酰化酶功能评价体系，完成克隆获得的海洋功能基因的功效测定，筛选获得高效的N-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因2个以上；通过微生物遗传育种改良技术，获得高产N-乙酰氨基葡萄糖的发酵菌株4株以上；
2017.1-2017.12
通过葡萄糖的流加工艺和溶氧条件等发酵条件的控制，优化N-乙酰氨基葡萄糖工程菌株的发酵工艺；完成100L级的中试发酵研究；
2018.1-2018.12
建立快速稳定的N-乙酰氨基葡萄糖提取分离和纯化技术；获得纯度在90%以上的N-乙酰氨基葡萄糖样品2kg；撰写专利申请和研究论文。
3）考核指标
a）从海洋生物中发掘高效N-乙酰氨基葡萄糖合成相关基因2-3个；
b）通过微生物遗传育种获得N-乙酰氨基葡萄糖的高产菌株4株以上；
c）获得100L级N-乙酰氨基葡萄糖发酵中试工艺技术，5d培养获得N-乙酰氨基葡萄糖30g/L以上；
d）开发出N-乙酰氨基葡萄糖的分离提取和检测技术，提取率90％以上；
e）获得纯度90%以上的N-乙酰氨基葡萄糖样品2kg；
f）申请发明专利2项目。
2.主要研究任务
挖掘海洋生物来源的N-乙酰氨基葡萄糖生物合成的关键调控功能基因，构建微生物基因工程菌株发酵生产目标产物，重点研究内容如下：
（1）海洋生物来源的N-乙酰氨基葡萄糖的功能基因挖掘
以N-乙酰氨基葡萄糖生物合成过程中的关键调控基因氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶为研究对象，根据基因的保守序列设计间并引物，从高产甲壳素的海洋生物中挖掘潜在的氨基葡萄糖合成酶基因；建立稳定的氨基葡萄糖合成酶异源表达和功能评价体系，筛选获得2个以上的海洋生物来源的高效的氨基葡萄糖合成酶基因。
（2）高产N-乙酰氨基葡萄糖发酵基因工程菌株的构建
将获得的海洋来源的功能基因氨基葡萄糖合成酶基因导入微生物工程菌株中，并对其稳定性、表达效率和发酵产量进行系统评价，改良和优化N-乙酰氨基葡萄糖发酵基因工程菌株。
（3）N-乙酰氨基葡萄糖的中试发酵技术研究
在100L发酵平台中优化工程菌株的发酵条件和工艺，提高微生物发酵法生产N-乙酰氨基葡萄糖的产量。
（4）N-乙酰氨基葡萄糖的提取和分离技术
以分子蒸馏法、离子交换发和膜分离等技术有机结合，建立发酵法生产N-乙酰氨基葡萄糖的提取分离和纯化技术；获得纯度在90%以上的N-乙酰氨基葡萄糖样品2kg。
3.技术路线
4.项目的技术关键，包括技术难点、创新点
1.技术难点
（1）高产N-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因的海洋生物筛选技术；
（2）高效N-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因的克隆技术；
（3）高产N-乙酰氨基葡萄糖的发酵菌株的基因工程育种和改良技术；
（4）N-乙酰氨基葡萄糖的高效经济的分离提取和纯化技术；
2.创新点
（1）通过对富含几丁质和甲壳素的海洋生物的种质筛选，根据N-乙酰氨基葡萄糖生物合成功能基因的保守序列设计简并引物克隆获得功能基因的全长序列，并对其功能进行评价，获得高效的海洋生物来源的N-乙酰氨基葡萄糖合成相关功能基因。
（2）通过发酵法获得的N-乙酰氨基葡萄糖游离于发酵液中，传统的提取分离手段会成环境污染，且纯度在80%一下，本项目将采用分子膜过滤和离子色谱郊环法相结合的手段，建立一种高效经济的N-乙酰氨基葡萄糖分离提取和纯化技术。
五、预期成果及技术、经济效益分析
（1）预期成果
21世纪是海洋世纪，海洋生物资源的开发和利用已成为世界各海洋大国竞争的焦点之一，其中基因资源的研究和利用是重点。
随着社会、经济的发展和人类活动的干预，海洋环境正在不断的恶化，海洋生物多样性正遭到破坏，海洋生物基因资源的保护和利用，显得更加紧迫。
发掘海洋生物基因，有利于保护海洋生物资源，从海洋生物的功能基因入手，有助于培育出优质、高产、抗逆的海洋生物新品种，从根本上解决发酵工程菌种“质”和“量”的问题，同时还有助于开发具有我国自主知识产权的海洋基因工程新药，部分解决海洋药源问题。
本项目利用海洋生物特殊的生长环境，从中筛选获得性能高效稳定的N-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因，建立微生物基因工程菌株发酵法生产N-乙酰氨基葡萄糖，并优化其发酵的条件和提取纯化技术，建立100L级的发酵中试研究。
项目的完成可进一步提高发酵法生产N-乙酰氨基葡萄糖的产量，降低生产成本，提高发酵法生产N-乙酰氨基葡萄糖的市场竞争力，生产过程避免了大量的有机溶剂的使用，降低环境污染，为N-乙酰氨基葡萄糖的生产提供了环境更加友好、生态效益显著的新型制备方法。
（2）技术、经济效益分析
N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）是生物细胞内许多重要多糖的基本组成单位，尤其是甲壳类动物的外骨骼含量最高。
它是合成双歧因子的重要前体，在生物体内具有许多重要生理功能。
它在临床上是治疗风湿性及类风湿性关节炎的药物。
它也可以作为食品抗氧化剂及婴幼儿食品添加剂，糖尿病患者甜味剂。
主要用于临床增强人体免疫系统的功能，抑制癌细胞或纤维细胞的过度生长，对癌症和恶性肿癌起到抑制和治疗作用；对于各种炎症，能起到有效的治疗，对骨关节炎及关节疼痛也有治疗作用。
甲壳质酸水解得到氨基葡萄糖，再经过乙酰化得到GlcNAc。
由于收率低，蟹壳等原材料来源有限导致GlcNAc产量有限。
为了克服此缺点，开发重组基因工程菌发酵法生产GlcNAc有着良好的发展前景。
以葡萄糖为主要原料发酵生产GlcNAc具有生产成本稳定，不受原材料供应限制的优点。
海洋生物中普遍含有丰富的甲壳素和几丁质等物质，含有潜在的N-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关的功能基因。
本项目通过海洋生物的种质挖掘、功能基因的全场序列克隆和功能评价，获得高效的海洋生物来源的N-乙酰氨基葡萄糖生物合成相关功能基因；并在此基础上，构建高产N-乙酰氨基葡萄糖的发酵生产工程菌，通过发酵工艺的优化和分离提取技术的改进，提高N-乙酰氨基葡萄糖的发酵产量和纯度，为氨基葡萄糖发酵产业规模的扩大奠定了基础，并为N-乙酰氨基葡萄糖工程菌株的构建提供了新的功能基因来源，为相关产业的产量提供了一定的借鉴意义，有利于整个海洋发酵产业规模的扩大。
六、实施年限和年度工作计划
（1）实施年限
本项目实施年限为4年。
（2）年度工作计划
2015.1-2015.12
建立稳定的N-乙酰氨基葡萄糖合成相关功能基因的异源表达和活性评价体系，获得海洋生物来源的高效氨基葡萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶基因；
2016.1-2016.12
通过微生物遗传育种的方法，构建获得高产N-乙酰氨基葡萄糖的发酵生产菌株；
2017.1-2017.12
通过葡萄糖流加和溶氧控制等技术，建立微生物发酵法生产氨基葡萄糖的新工艺，并在100L级的发酵罐中进行中试研究；
2018.1-2018.12
以多种提取技术相结合，建立高效快速的氨基葡萄糖的提取和纯化技术；获得N-乙酰氨基葡萄糖样品2kg；申请发明专利2项。
七、经费预算及来源渠道
项目子任务经费预算表
金额单位：
万元
序号
预算科目名称
合计
专项经费
自筹经费
1
一、经费支出
196.00
196.00
0.00
2
（一）直接费用
175.20
175.20
0.00
3
1、设备费
16.45
16.45
0.00
4
（1）购置设备费
15.65
15.65
0.00
5
（2）试制设备费
0.00
0.00
0.00
6
（3）设备改造与租赁费
0.80
0.80
0.00
7
2、材料费
86.81
86.81
0.00
8
3、测试化验加工费
22.88
22.88
0.00
9
4、燃料动力费
11.12
11.12
0.00
10
5、差旅费
8.47
8.47
0.00
11
6、会议费
3.86
3.86
0.00
12
7、国际合作与交流费
0.60
0.60
0.00
13
8、出版/文献/信息传播/知识产权事务费
5.73
5.73
0.00
14
9、劳务费
17.80
17.80
0.00
15
10、专家咨询费
1.47
1.47
0.0
升级会员 