微生物知识与洁净作业知识.docx

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微生物知识与洁净作业知识

卫生和微生物学基础知识、洁净作业知识

第一章微生物学基础知识

一、微生物概况

在自然界中，用肉眼无法直接看到的，必须用光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能观察到的微小生物的总称。

微生物的种类繁多，至少在十万种以上。

包括病毒、细菌、霉菌及酵母菌等。

微生物在自然界分布极广。

土壤、水、空气、人类及动植物的体表、呼吸道、消化道等腔道中均存在数量不等的微生物。

二、微生物与药品质量的关系

有些药品的生产是依靠微生物来完成的。

如神曲、淡豆豉是通过微生物发酵后制成的；而青霉素是微生物的代谢产物等。

对大部份药品生产来说，微生物会污染药品，使药品变质，对人体产生危害。

为此，我们要尽量控制生产环境的微生物数量，避免药品受到污染。

三、细菌简介

细菌是原核细胞生物中的一类单细胞微生物。

因此所有细菌均具有普通细胞的结构，包括细胞壁、细胞膜、细胞浆等，但无真正的细胞核结构（仅有原始核，无核膜、核仁，缺乏细胞器）。

细菌的特殊结构：

主要有荚膜、芽孢、鞭毛和菌毛。

芽孢：

某些细菌，在其生活的某一阶段可于细胞浆内形成圆形或卵圆形的特殊结构称为芽孢。

芽孢对干燥、热和化学药品的抵抗力较强。

四、霉菌简介

霉菌亦称真菌，是真核细胞生物中的一类单细胞和多细胞微生物，具有真正的细胞核结构：

核膜、核仁和染色体，胞浆内有完整的细胞器。

病原性的真菌最重要的有“廯菌”与“白色念珠菌”。

霉菌生长能力很强，特别是在温暖潮湿的环境中最易生长繁殖，而且对药物有较强的抵抗力。

第二章卫生学基础知识

一、消毒

1、概念

（1）消毒：

是指对病原微生物繁殖体的杀灭作用，但不能杀死芽孢等全部微生物。

（2）消毒剂：

是指用于消毒的化学药品。

2、常用消毒剂

类别

名称

浓度

消毒用途

性质

酚类

甲酚皂

（来办）

２%水溶液

皮肤

溶于水，呈碱性反应，有除垢作用，杀菌力强，有毒性，消毒手有麻木感。

３%-５%

地漏

浓煤焦油溶液

0.16%

环境消毒

消毒力中等。

醇类

乙醇

70-75%

皮肤、工具、设备、容器

能使蛋白质变性，有挥发性，无残留，作用时间短，对芽孢无效。

醛类

甲醛

每立方米用37~40%甲醛液８-９ml,加４-５克高锰酸钾

熏蒸无菌室

能破坏细菌繁殖体及许多芽胞、病毒、真菌；有挥发性，对眼睛及皮肤有刺激性。

氧化剂

过氧乙酸

０.５%

皮肤消毒

广谱杀菌剂，能杀死细菌繁殖体，芽胞、真菌与某些病毒；强氧化剂，２０％时对皮肤、金属有较强腐蚀性。

稀释液只能存放三天。

表面活性剂

新洁尔灭（苯扎溴铵）

０.１-０.２%

皮肤、工具、设备、容器

破坏细胞膜，使蛋白质变性，对革兰氏阴性菌不敏感，具清洁与消毒双生作用，对皮肤刺激性少，遇合成洗涤剂活性减弱

杜灭芬（消毒宁）

０.０５-０.１%水溶液

皮肤

性质稳定，易溶于水，抗菌谱窄，遇合成洗涤剂活性减弱。

洗必泰

０.０２－０.０５%水溶液

皮肤

对革兰氏阳、阴性菌有效，能快速杀灭繁殖体，无毒性，但不能与阴离子清洁剂等物质、升汞、肥皂合用。

3、影响化学消毒剂作用的因素

（１）消毒剂的化学结构、浓度、消毒能力，协同作用和拮抗作用，接触时间；微生物的类型、数量和环境；

（２）微生物的类型、数量和环境；

（３）溶液的氢离子浓度、表面张力、有机物或其他钝化剂的存在；

（４）被消毒物表面的性质是光滑还是多孔粗糙等。

4、选择消毒剂原则

（１）在使用条件下高效、低毒无腐蚀性，无特殊的嗅味和颜色，不对设备、物料、产品产生污染。

（２）在有效抗菌浓度时，易溶或混溶于水，与其他消毒剂无配伍禁忌。

（３）对大幅度温度变化显示长效稳定性，贮存过程中稳定。

（４）消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。

（5）价格便宜。

二、灭菌

1、概念

灭菌是指对所有微生物的杀灭作用，包括所有微生物的繁殖体和芽孢或孢子。

细菌的芽孢具有较强的抗热能力，因此灭菌效果，常以杀灭芽孢为准。

2、灭菌的方法

基本上分为二大类：

物理方法（干热灭菌、湿热灭菌、射线灭菌、滤过灭菌）和化学方法（气体灭菌、药液灭菌）。

下面将分别介绍几种常用的灭菌方法。

（1）干热灭菌法

灭菌条件为160℃，2小时或180℃，45分钟。

干热可用于能耐受较高温度，却不宜被蒸汽穿透，或者易被湿热破坏的物品的灭菌。

同时干热也是制药工业中用于除热原的方法之一。

由于在相同的温度下，干热对微生物的杀灭效果远低于饱和蒸汽，故干热灭菌需要较高的温度或较长的灭菌时间。

（2）湿热灭菌

是在饱和蒸汽或沸水或流通蒸汽中进行灭菌的方法。

由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，所以灭菌效率比干热灭菌法高。

高压蒸汽灭菌法是最为可靠的灭菌方法，一般为121℃，20分钟或115℃，30分钟，使用时需将空气排尽。

影响湿热灭菌的因素有：

①细菌的种类与数量：

不同细菌，同一细菌的不同发育阶段对热的抵抗力有所不同。

细菌数越少，灭菌时间越短。

②药物性质与灭菌时间：

一般来说，灭菌温度越高灭菌时间越短。

但考虑到药物的稳定性，应在达到有效灭菌的前题下可适当降低灭菌温度或缩短灭菌时间。

③蒸汽的性质：

蒸汽有饱和蒸汽，湿饱和蒸汽和过热蒸汽。

饱和蒸汽热含量较高，热穿透力较大，因此灭菌效力高。

湿饱和蒸汽带有水分，热含量较低，穿透力差，灭菌效力较低。

过热蒸汽温度高于饱和蒸汽，但穿透力差，灭菌效率低。

④介质的性质：

制剂中含有营养物质，如糖类、蛋白质等，增强细菌的抗热性。

细菌的生存能力也受介质PH值的影响。

一般中性环境耐热性最大，碱性次之，酸性不利于细菌发育。

（3）紫外线灭菌法

是指用紫外线照射杀灭微生物方法。

紫外线作用于核酸蛋白促使其变性，同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧，从而起共同杀菌作用。

紫外线进行直线传播，可被不同的表面反射，穿透力微弱，但较易穿透清洁空气及纯净的水。

因此本法适用于照射物体表面之灭菌、无菌室的空气及水的灭菌；不适用于药液的灭菌、固体物质深部的灭菌；普通玻璃可吸收紫外线，因此装于玻璃容器中的药物不能用此法灭菌。

紫外线对人体照射过久，会发生结膜炎，红斑及皮肤烧灼等现象，故一般在人入室前开启紫外线灯1~2小时，关闭后人才进入洁净室，如果必须在人进去后仍要开紫外线灭菌，则人的皮肤及眼睛应有有效的防护措施。

用紫外线照射灭时要注意下列问题：

①紫外线的杀菌力，随使用时间增加而减退，一般使用时间达到额定时间70％时应更换紫外线灯管，以保证杀菌效果。

国产紫外线灯平均寿命一般为2000h。

②紫外线的杀菌作用随菌种不同而不同。

③紫外线照射通常按相对湿度为60％的基础设计，室内湿度增加时，照射量应相应增加。

④紫外线灭菌效果与照射的时间长短有关，这需要通过验证来确定照射时间。

⑤紫外线灭菌照射的时间应视空间大小而定，而且距离不能太远，一般为30cm～1m左右。

（4）臭氧消毒法

臭氧（O3）的消毒原理是：

臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用,臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。

多余的氧原子则会自行重新结合成为普遍氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，故称为无污染消毒剂。

它不但对各种细菌（包括肝炎病毒、大肠杆菌、绿脓杆菌及杂菌等）有极强的杀来灭能力，而且对霉菌也很有效。

生产臭氧的原料主要是电能和空气，一般通过高频臭氧发生器（电子消毒器）来获得，消毒时,直接将臭氧发生器直于房间中间即可。

臭氧消毒效果的验证中需确证和校正的臭氧发生器技术指标有：

臭氧产量、臭氧浓度和时间定时器，并通过验证检查细菌数来确定消毒时间。

（5）过滤灭菌

滤过灭菌法是用滤过方法除去活的或死的微生物的方法，是一种机械除菌方法，这种机械叫除菌过滤器。

主要用于对热不稳定的药物溶液、气体、水的灭菌。

繁殖型细菌很少小于1μm的，芽胞大小为0.5μm或更小些。

所以，对于以过筛作用滤过的滤器，其孔径大小必须小到足以阻止细菌和芽孢进入滤孔之内。

常用除菌滤器有微孔薄膜器，摺叠式纤维素滤棒，一般选用孔径0.22μm。

第三章洁净作业知识

一、洁净室基本知识

1、洁净室（区）的概念

洁净室（区）：

需要对尘粒及微生物含量进行控制的房间（区域）。

其建筑结构、装备及其使用均具有减少该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。

药品生产洁净室（区）空气洁净度级别分四级：

100级、10,000级、100,000级和300,000级。

无特殊要求时，温度应控制在18℃～26℃，相对湿度控制在45℃～65℃。

2、洁净室（区）有害物质的来源

（1）粉尘

粉尘是指悬浮在空气中的固体颗粒。

洁净室内的粉尘除来自外界之外，生产中固体物料的机械粉碎、研磨、粉状物料的混合、筛粉、收集、包装、运输、物质的燃烧等都会产生粉末状微粒子。

机械运动产生的气流，受热设备表面产生的热空气上升、操作人员和固体物料在空间运动等都带动着周围空气运动，运动着的空气流带动粉末状的微粒子扩散，从静态变成悬浮于空气中的粉尘。

有报导，一般的洁净室内，人是最大的污染源，约占80％。

主要是人体把外界的尘粒入,人体本身散发大量的皮屑、衣服也带进尘粒。

（2）有害蒸汽和气体

药品生产中使用的原辅料、溶剂如氯仿、苯、乙醚、酒精、氯化氢等，具有一定的毒性，由于空气的流动，造成在室内扩散。

（3）余热和余湿

加热设备、热物料等散发出的热量以及煎煮、洗涤等散发的蒸汽是车间余热、余湿的主要来源，影响室内空气的温度和湿度。

人体亦散发热量和水汽。

外界通过外墙、门窗和隔断等护围结构向洁净室（区）传递热量。

3、空气过滤器

过滤器是实现空气净化的主要手段，是洁净空调的主要设备之一。

空气过滤器一般按其过滤效率的高低分为初（粗）效、中效、亚高效、高效。

过滤器的性能指标有：

效率、阻力、容尘量以及风速和滤速。

过滤器性能参数、滤料用途表

类别

捕集的尘粒（粒径μm）

计数效率（％）（对粒径为0.3μm的尘粒）

用途

初效过滤器

≥10及异物

＜20（对≥10μm大尘为70）

作高一级以上过滤前的预过滤

中效过滤器

≥1

20～90

用在初效过滤器后面，提高净化效率；用在高效过滤器前面，延长高效过滤器寿命。

亚高效过滤器

＜1

90～99.9

用于空气洁净度级别在100,000级或低于100,000级的洁净室；用于自净器洁净屏等。

高效过滤器

0.3～1

≥99.91

用于一般洁净厂房和局部净化设备的最后一级过滤―终端过滤。

4、气流组织形式

洁净的空气组织形式按气流流动状态有乱流和层流。

层流又分垂直层流和水平层流。

因而洁净室有乱流洁净室、垂直层流洁净室和水平层流洁净室。

（1）乱流洁净室

这种洁净室，从送风口经散流器进入室内的洁净空气气流迅速向四周扩散，与室内空气混合，稀释室内污染的空气，并与之进行热交换，混合后的气流带着室内的尘粒，在正压作用下，从下侧回风口排走。

室内气流因扩散、混合作用而非常杂乱，有涡流，故有乱流洁净室之称；乱流洁净室自净能力较低，只能达到较低的空气洁净度级别，通常在1,000级至300,000级范围。

（2）层流洁净室

层流洁净室的进风面布满高效过滤器，整个送风面是一个大送风口，送风气流经静压箱和高效过滤器的均压均流作用，从送风口到回风口气流流线彼此平行，充满全室断面，以均速向前推进，就像个大活塞，把室内原污染空气排入回风口，从而达到净化室内空气的目的。

5、其他要求

（1）《药品生产质量管理规范》（1998年修订）规定空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差大于5Pa，洁净区与室外的静压差大于10Pa。

（2）洁净室内产生粉尘量大和有毒害气体的设备应设局部排风和防尘装置，还应采取相对负压措施。

（3）排风系统要有防倒灌措施。

如安置中效过滤器；单向阀等。

（4）洁净室送风口与连接体的接缝要密封。

（5）有静压差要求的洁净室应设有差压装置。

二、洁净室（区）内人员卫生要求

1、人是洁净室最大的污染源之一。

（1）人及其活动产生大量的尘埃粒子污染洁净室。

人在自然活动时，人体散发出的热量可形成一股热流，使大于0.3μm的微小粒子扩散，扩散量可达到每分钟近千百万粒。

粒子中大部分是10～300μm的皮屑。

粒子由衣服、皮肤、头发、嘴巴、鼻腔及化妆品等途径往外散发，粒子污染了洁净室。

人体所散发的粒子数（≥0.3μm）

体态、动作

散发的粒子数（万个/分钟）

站

10

坐

50

坐下站起

100～250

走

500～1000

爬楼梯

1000

运动

1500～3000

（2）人身上携带的各种微生物污染洁净室。

人体给微生物生长繁殖创造了良好的环境，人体各部份都生长着各类微生物，甚至某些部位存在着“常居细菌”，它们的存在对人体可能无害，但对于生产药品的洁净室，尤其是无菌室却是不允许的，甚至是致命的。

人体各部位的正常微生物

部位

部分常见微生物举例

皮肤

葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、真菌

口腔

乳酸杆菌、绿色链球菌、螺旋体、真菌

肠道

葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、双岐杆菌、腺病毒、真菌

鼻咽腔

葡萄球菌、奈氏菌属、绿脓杆菌、腺病毒、真菌

外耳道

葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌

眼结膜

葡萄球菌、结膜干燥杆菌

尿道

大肠杆菌、拟杆菌、革兰氏阳性球菌

（3）手是一个重要的污染源。

手部的汗毛、油脂、皮层、皮肤只要与污染物接触，就会沾上污垢、油脂、化学物、尘粒及微生物等，微生物会在手上生存，若有创伤，微生物还会在手的伤口上大量繁殖，被污染的手便会把污染物带给手所接触的物品上，从而污染洁净室。

   （4）口腔、鼻腔、头发也是污染源。

口腔与鼻腔的粘膜内存在着大量的微生物，讲话、咳嗽、喷嚏时都会散发大量含微生物的粒子。

每一次咳嗽可产生＞0.5μm的粒子700,000粒，每一次喷嚏可产生＞0.5μm粒子1400,000粒。

头发及胡须具有很强的吸附性，藏有大量的灰尘、细菌及头屑、皮屑。

2、减少人对洁净室的污染。

   从测定结果显示，在洁净室人员的数量、人员的动作及其幅度、洁净服材质、式样及其穿戴方式、手部的清洁消毒等都对洁净室的洁净度造成明显的影响。

（1）养成良好卫生习惯，勤洗澡、洗头，勤理发、剃胡须，勤剪指甲，勤更衣。

（2）严格控制进入洁净室人数，只有洁净室工作人员和经授权人员方可进入，并且进出洁净室要进行登记。

（3）进入洁净室的人员，不能患传染病、皮肤病，包括隐性传染病；体表有伤口、感冒、咳嗽、腹泻者不宜进入洁净室。

（4）不携带个人物品进入生产区，不在生产区内吃东西。

（5）工作前洗干净手，不涂抹化妆品，上岗时不佩戴饰物、手表。

（6）洁净室内随时保证手的清洁，注意消毒。

手在消毒以后，不再接触与工作无关的物品，不裸手直接接触药品。

（7）工作时，不要快速走动，操作的动作要轻、幅度要小，讲话要少、声音要细，避免不必要的走动和动作，不要频繁进出洁净室。

（8）行走时，不要穿过层流罩，不可避免时，应离层流罩外一米以外。

（9）休息时，若站着，手臂沿身体下垂，不要两臂交叉；若坐着，把手放在膝盖上，不要两臂交叉或双腿交叉。

（10）离开工作场地（包括食饭、上厕所），必须脱掉工作服装。

三、洁净室（区）物料卫生要求

1、进入生产的原辅料必须符合标准，不洗即用的内包装材料、容器，其生产环境的空气洁净度级别必须与药品生产相一致。

对可以重复使用的盛装容器，应按SOP要求清洗干净。

2、直接与药品（中间产品）接触的设备、工具、容器、内包装容器最后一次冲洗用水应与生产用水一致。

3、物料净化用室包括物料清洁室、消毒室、气闸室或传递柜（窗）、备料室、（弃废）物料出口的专用传递设施等。

4、物料应经净化或消毒灭菌后通过物流通道进入。

5、物流通道不能作为通路。

6、生产过程中产生的废弃物出口不能与物料进口合用同一气闸或传递柜（窗），宜单独设置专用传递设施。

四、洁净室（区）环境卫生要求

1、门、窗、各种管道、灯具、风口及其它公用设施、墙壁与地面的交界处等应保持洁净，无浮尘。

2、地漏干净，经常保持密封状态，盖严上盖。

3、洗手池、工具清洗池等设施，里外应保持；无浮尘、垢斑和水迹。

4、缓冲室、传递柜、传递窗等缓冲设施两门不能同时打开，在不工作时，注意关闭传递柜（窗）的门。

5、洁净区所用的各种器具、容器、设备、工具、台、椅、清洁工具等均应选用无脱落物、易清洗、易消毒、不生锈、不长霉的材质，不宜使用竹、木、陶瓷、铁等材质。

不宜使用不易清洗、凹陷或凸出的架、柜和设备。

6、清洁工具用后，要及时清洗干净、消毒并及时干燥，置于通风良好的洁具清洗间内规定的位置。

用前、用后要检查拖布、抹布是否会脱落纤维。

不同空气洁净度级别的生产区使用不同的清洁工具，二者不能互用。

7、定期对洁净室进行消毒，消毒剂要定期交替使用。

8、必须定期监控洁净室的环境。

二、卫生学和微生物学基础知识

⏹微生物（microorganism,microbe）是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。

（一般个体<0.1mm）

⏹特点：

个体微小、结构简单、进化地位低等

微生物包括的种类：

⏹原核生物类：

单细胞---细菌、放线菌、支原体、衣原体等

⏹真核生物类：

单细胞----酵母

多细胞----霉菌、原生动物、藻类

⏹非细胞类：

病毒、类病毒、朊病毒

微生物的五大共性：

⏹体积小、比面大（最基础特征）

⏹吸收多、转化快

⏹生长旺、繁殖快

⏹适应强、易变异

⏹分布广、种类多

如何控制有害菌：

注意以下三个概念的区别：

⏹灭菌（sterilization）

是指对所有微生物的杀灭作用，包括所有微生物的繁殖体和芽孢或孢子。

⏹消毒（disinfection）

是指对病原微生物繁殖体的杀灭作用，但不能杀死芽孢等全部微生物。

⏹防腐（antisepsis）

是指抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达到防止物品发生霉腐的措施。

灭菌：

介绍几种常用的灭菌方法：

⏹干热灭菌法

⏹湿热灭菌法

⏹辐射灭菌法

⏹过滤灭菌法

⏹气体灭菌法

干热灭菌法：

用于能耐受较高温度，却不宜被蒸汽穿透，或者易被湿热破坏的物品的物品的灭菌。

由于空气热穿透力差，所以温度高，时间长。

⏹焚烧法（incineration）：

是将被灭菌物品在火焰中燃烧，使所有的生物质碳化。

简单、彻底。

如接种环、镊子、传染病人衣物。

⏹干燥热空气灭菌法：

将物品放入烘箱内，然后升温至150℃—170℃，维持1—2小时。

适用于玻璃、陶瓷和金属物品灭菌。

湿热灭菌法：

在饱和蒸汽、沸水或流通蒸汽中进行灭菌的方法。

具有温度低、时间短、灭菌效果高的特点。

原理：

⏹蒸汽冷凝会放出潜热；

⏹饱和水蒸汽穿透力强；

⏹湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定性，主要破坏氢键结构。

⏹常压法

⏹加压法

常压法

⏹巴氏消毒法eg：

牛奶

⏹煮沸消毒法eg：

饮用水

⏹间歇灭菌法eg：

塑料餐具

加压法

⏹常规加压蒸汽灭菌法

条件：

121℃（0.1MPa）15—20min115℃（0.1MPa）20-30min。

适用：

耐高温物品，玻璃仪器、含水或不含水的物品

⏹连续加压蒸汽灭菌法（又称“连消法”）

条件：

135—140℃加热5秒—15秒，保温5-10分。

影响湿热灭菌的因素：

⏹细菌的种类和数量

不同细菌，同一细菌的不同发育阶段对热的抵抗力有所不同。

多数细菌和真菌的营养体在60℃，5~10分钟即死亡；酵母菌和真菌的孢子稍耐热，80℃以上才会死亡；而细菌的芽孢一般在120℃，维持15分钟才能杀死。

细菌数越少，灭菌时间越短。

⏹药物性质与灭菌时间

灭菌温度越高灭菌时间越短。

但应根据被灭菌物的稳定性，应在达到有效灭菌的前提下尽可能降低灭菌温度或缩短灭菌时间

⏹蒸汽的性质

蒸汽有饱和蒸汽、湿饱和蒸汽和过热蒸汽。

饱和蒸汽热含量较高，热穿透力较大，因此灭菌效力高。

湿饱和蒸汽带有水分，热含量较低，穿透力差，灭菌效力较低。

过热蒸汽温度高于饱和蒸汽，但穿透力差，灭菌效率低。

⏹介质的性质

制剂中含有营养物质，如糖类、蛋白质等，增强细菌的抗热性。

细菌的生存能力也受介质pH值的影响。

一般中性环境耐热性最大，碱性次之，酸性不利于细菌发育。

辐射灭菌法：

⏹紫外线灭菌法

⏹γ射线灭菌法

紫外线灭菌法：

是指用紫外线照射杀灭微生物的方法。

原理：

紫外线作用于生物体的DNA，促其形成胸腺嘧啶二聚体，造成菌体死亡。

另外，它可使空气中氧形成臭氧（O3），臭氧也会与生物体的活性成分发生氧化反应，造成它们失活。

适用范围：

由于紫外线进行直线传播，可被不同的表面反射，穿透力微弱，但较易穿透清洁空气及纯净的水。

因此只适用于物体表面、洁净室的空气及水的灭菌，而不适用于药液的灭菌、固体物质深部的灭菌。

用紫外线灭菌时要注意以下问题：

⏹紫外线的杀菌力，随使用时间增加而减退。

因此一般使用时间达到额定时间70％时应更换紫外线灯管，以保证杀菌效果。

⏹紫外线的杀菌作用因菌种而异。

⏹紫外线照射通常按相对湿度为60％的基础设计，室内湿度增加时，照射量应相应增加

⏹紫外线灭菌效果与照射的时间长短有关。

⏹紫外线灭菌照射的时间应视空间大小而定，而且距离不能太远，一般为30cm～1m左右。

臭氧消毒法：

原理：

臭氧（O3）在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。

多余的氧原子则会自行重新结合成为普通氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，故称为无污染消毒剂。

它不但对各种细菌（包括肝炎病毒、大肠埃希菌、绿脓杆菌及杂菌等）有极强的杀灭能力，而且对霉菌也很有效。

过滤灭菌法：

是用过滤方法除去活的或死的微生物的方法，是一种机械除菌方法，这种机械叫除菌过滤器。

主要用于对热不稳定的药物溶液、气体、水的灭菌。

繁殖型细菌很少小于1μm的，芽孢大小为0.5μm或更小些。

所以，对于以过筛作用滤过的滤器，其孔径大小必须小到足以阻止细菌和芽孢进入滤孔之内。

常用除菌滤器有微孔薄膜器，折叠式纤维素滤棒，一般选用孔径0.22μm。

消毒：

常用消毒剂

类别

名称

浓度

消毒用途

性质

酚类

甲酚皂

（来办）

2％水溶液

皮肤

溶与水，呈碱性反应，有除垢作用，杀菌力强、有毒性，消毒手有麻木感

3-5%

地漏

浓煤焦油溶液

0.16%

环境消毒

消毒力中等

醇类

乙醇

70－75％

皮肤、工具、设备、容器

能使蛋白质变性，有挥发性，无残留，作用时间短，对芽孢无效

醛类

甲醛

每立方米用37－40％甲醛液8－9ml，加4－5g高锰酸钾

熏蒸无菌室

能破坏细菌繁殖体及许多芽孢、病毒、真菌；有挥发性，对眼睛及皮肤有刺激性。

氧化剂

过氧乙酸

0.5％

皮肤消毒

广谱杀菌剂，能杀死细菌繁殖体、芽孢、真菌与某些病毒；强氧化剂，20％时对皮肤、金属有较强腐蚀性。

稀释液只能存放三天。

表面活性剂

新洁尔灭（苯扎溴铵）

0.1－0.2％

皮肤、工具、设备、容器

破坏细胞膜，使蛋白质变性，对革兰氏阴性菌不敏感，具清洁与消毒双生作用，对皮肤刺激性少，遇合成洗涤剂活性减弱

杜灭芬（消毒宁）

0.05－01.％水溶液

皮肤

性质稳定，易溶于水，抗菌谱窄，遇合成洗涤剂活性减弱

洗必泰

0.02－0.05％