有关PCR习题.docx

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有关PCR习题

有关PCR习题

一、选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。

 1．以下哪种物质在PCR反应中不需要（  ） 

A．Taq DNA聚合酶 B．dNTPs C．Mg2+ D．RNA酶 E．合适pH缓冲液 

2．以下哪种酶可耐高温（  ） 

A．Taq DNA聚合酶 B．Hind Ⅲ C．T4连接酶 D．RNA酶 E．Klenow片段 

3．PCR反应正确过程应为（  ） 

A．退火→变性→延伸 B．变性→退火→延伸 C．退火→延伸→变性 D．变性→延伸→退火E．延伸→变性→退火 

4． PCR技术的本质是（  ） 

A． 核酸杂交技术 B． 核酸重组技术C． 核酸扩增技术 D． 核酸变性技术 E． 核酸连接技术 

5．Taq DNA聚合酶酶促反应最适温度为（  ） 

A．37℃ B．50℃～55℃ C．70℃～75℃ D．80℃～85℃ E．94℃～95℃

6．能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为（  ）

A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光PCR仪 E．实时PCR仪 

7．在下列哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中DNA原始拷贝数（  ） 

A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光实时PCR仪E．定性PCR仪

8．PCR基因扩增仪最关键的部分是（  ） 

A．温度控制系统 B．荧光检测系统 C．软件系统 D．热盖 E．样品基座

9．“位置的边缘效应”是指（  ） 

A．温度的准确性欠佳 B．温度的均一性欠佳 C．边缘升降温速度快 D．边缘升降温速度慢 

E．梯度模式和标准模式温度不一致

10．PCR扩增仪升降温速度快有很多优点，以下哪一项应除外（  ） 

A．缩短反应时间 B．提高工作效率 C．消除位置的边缘效应 D．缩短非特异性反应时间 E．提高反应特异性

11、PCR技术扩增DNA,需要的条件是（  ） 

①目的基因   ②引物   ③四种脱氧核苷酸  ④DNA聚合酶等  ⑤mRNA  ⑥核糖体 A、①②③④     B、②③④⑤    C、①③④⑤  D、①②③⑥

12、镁离子在DNA或RNA体外扩增反应的浓度一般为（  ）

 A、0.3-1mmol/L    B、0.5-1mmol/L   C、0.3-2mmol/D、0.5-2mmol/L 

13、多重PCR需要的引物对为（  ） A、一对引物    B、半对引物 C、两对引物 D、多对引物

14、PCR是在引物、模板和4种脱氧核糖核苷酸存在的

的电泳标记位置， 哪份标本最有可能确诊为禽流感 （   ） 

A．M       B．N       C．Q          D．W 

21、某考古学家在西伯利亚泰加林地区的冰中，发现了一种冰冻的已灭绝的巨大动物的肌肉。

他想了解该巨型动物的DNA与现今印度大象的DNA的相似性，于是做了如下检测工作，其中正确的操作步骤及顺序是 

①降低温度，检测处理后形成的杂合DNA双链区段   ②通过PCR技术扩增巨型动物和大象的DNA   ③把巨型动物的DNA导入大象的细胞中  ④在一定的温度条件下，将巨型动物和大象的DNA水浴共热 A.②④③   B.②④③①       C.③④①    D.②④① 

22、 PCR的发明人是 

A. Mullis  B. 牛顿  C.Kenny  D. James

23、 退火温度一般比引物的熔解温度（Tm）低多少合适

 A. 7℃   B. 10℃  C. 5℃  D. 2℃   E. 20℃ 

24、引物的最佳浓度为 

A. 0.1-0.5 μM  B. 1-2μM  C. 5-10μM  D. 100μM  E. 200μM

25、专门用于制备单链DNA的PCR技术是 

A、对称PCR B、反向PCR C、RT－PCR D、不对称PCR E、嵌套PCR 

26、PCR变性温度一般为 

A． 96℃   B. 85℃  C. 72℃   D. 55℃  E. 100℃ 

27、pre-mRNA 内含子的5'-末端一般为 （ ）A、AU B、GU C、AG D、CG E、AC 

28、在大肠杆菌的DNA损伤修复时，对于填补缺口可能最重要的酶是 

A、DNA聚合酶Ⅰ B、DNA聚合酶Ⅱ C、DNA聚合酶Ⅲ D、RNA聚合梅 E、以上都不是

29、 可用于扩增未知序列的PCR方法是（ ） A、 对称PCR B、 反向PCR C、 RT-PCR D、不对称PCR E、 嵌套PCR 

30、在聚合酶链反应（PCR）中最常用的DNA聚合酶是  A．T4 DNA连接酶  B．T7 DNA聚合酶  C． Taq DNA聚合酶 D．E. coli DNA聚合酶I  E．E. coli DNA聚合酶II

31、下列关于PCR引物设计的说法错误的是（     ） 

A．设计引物时应考虑使3’端引物和5’端引物具有相似的Tm值 

B．每条引物自身不应有稳定的发夹结构

 C．上下游引物之间不宜形成稳定的二聚体结构 D．引物的5’和3’端必须和模板严格配对结合 

E．引物与非特异扩增区的序列无同源性 

32、Taq DNA聚合酶可以不依赖模板在dsDNA的3’末端加上一个碱基为（      ） 

A. G   B. A    C. T   D. C   E. I

33．PCR反应中，所设计引物的长度一般为（）

A．5～10核苷酸B.15～30核苷酸C.<50个核苷酸D.长度任意E.以上答案均不对

34．引物设计时G＋C含量在引物中一般占（）

A.20～40﹪B.30～60﹪C.45～55﹪D.越高越好E.含量随意

35．以下说法错误的是（）

A引物中的碱基组成应该尽可能的随机分布。

B 引物自身不应该存在互补序列

C 设计引物时应考虑使3‘端引物和5‘端引物具有相似的Tm值

D 引物的5‘和3’端必须和模板严格配对结合

E 引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70﹪

36．下列说法正确的是（）

C.PCR反应常用的缓冲液为10－50mmol/L的Tris-HCl（室温PH8.3－8.8）

D.10mmol/L的KCl能促进引物的退火

E. 加入的BSA有利于破坏模板的二级结构

F.二甲基亚砜有利于保护TaqDNA酶的活性。

E.Mg2+能降低TaqDNA聚合酶的活性。

37.TaqDNA聚合酶活性需要以下哪种离子（c）

A．K+B.Na+C.Mg2+D.Ca2+E.Cl-

38．适用于DNA序列中单个碱基突变的检测的方法是：

（d）

A．筑巢PCRB.多重PCRC.锚定PCRD.LCR

39．以下哪种PCR技术广泛应用于组织胚胎学和肿瘤学的研究（a）

A．原位PCRB．差异显示PCRC．不对称PCRD．反向PCR

40.已知一段设计好的引物的序列为GTGGATCCATGGCTCCTCTGAAGATTC,其Tm值为（）

A.78B.80C.82D.84E.无法计算

41．以下关于dNTP的说法错误的是（）

B.dNTP具有较强的酸性，使用时应将pH调至7.0-7.5

C.PCR反应中，四种dNTP必须按比例配制，以减少反应的错配率。

D.dNTP的浓度过高会增加碱基的错配率

E.dNTP的浓度低，反应速度下降，但特异性提高

42.TaqDNA聚合酶可以不要模板在dsDNA的末端加上一个（）碱基.

A.dGTPB.dCTPC.dATPD.dTTP

43.有关PCR的描述哪个不对（）

A.是一种酶促反应

B.引物决定扩增的特异性

C.扩增的对象是DNA序列

D.扩增的对象是氨基酸序列

44.催化PCR的酶是（）

A.RNA聚合酶

B.DNA聚合酶

C.TaqDNA聚合酶

D.反转录酶

45.PCR产物具有特异性是因为（）

A.TaqDNA酶保证了产物的特异性

B.合适的变性,退火,延伸温度

C.选择特异性的引物

D.引物的Tm值不同.

46．LCR的说法正确的是（）

A.体系中采用DNA聚合酶

B.须设计一对引物

C.反应需经过变性,复性,连接

D.LCR中,酶将dNTP加到引物的3-OH端

E. LCR具有高度敏感性

二、多项选择题

1．下列关于退火温度说法正确的是（）

A.合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右。

B.引物与模板的退火温度一般在45－55℃之间

C.在Tm值允许的范围内，选择偏低的退火温度可以提高PCR反应的特异性。

D.退火时间至少需要一分钟。

2．进行PCR实验时以下措施有助于防止污染和结果的假阳性（）

B.隔离不同的操作区

C.分装试剂，减少重复取样所致的污染

D.严格实验操作

E.设立实验对照

3．适用于扩增3‘或5‘端未知序列的PCR技术是（）

A．反向PCRB.锚定PCRC.多重PCRD.不对称PCR

4．以下关于PCR技术应用说法正确的是（）

B.筑巢PCR和共享引物PCR有利于增强PCR反应的特异性，适用于模板含量极少的样品的检测

C.不对称PCR可以大量制备单链DNA，可用于DNA的序列测定

D .彩色PCR适用于基因诊断和自动化DNA序列测定

E .定量PCR可用于基因表达和调控的研究

F.差异显示PCR可用于筛选和克隆受发育，突变等各种因素影响下差异表达的基因

5.关于引物设计说法正确的是（）

B.为保证PCR反应的特异性，所设计的引物长度一般>30个核苷酸

C.引物设计时G＋C含量在引物中一般为45～55﹪

D.按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过3个碱基

E.两个引物之间不应存在互补序列，尤其避免3‘端的互补重叠

F.引物的3‘端可以游离而不影响PCR反应的进行

6.以下关于PCR的说法正确的是（）

A.PCR的模板可以是DNA也可以是RNA

B.PCR的模板必须从组织细胞中分离出来

C.PCR反应的特异性取决于引物和模板DNA的结合位点。

D.PCR反应初期，目的DNA片断的增加呈指数扩增。

E.PCR反应一般需要含102－105拷贝的模板

7．以下关于PCR反应条件错误的是（）

B.PCR缓冲液中加入二甲基亚砜有利于破坏模板的二级结构，提高反应的特异性。

C.Mg浓度过高会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过低又会使酶催化非特异性扩增增强。

D.4种dNTP应以等摩尔浓度配制，以减少错配误差。

E.引物浓度一般为0.5-1umol/L

8.PCR反应时应设立哪种对照（）

A.阴性对照

B.阳性对照

C.试剂对照

D.以上答案都正确

9.逆转录反应体系包括（）

B.RNA模板，四种dNTP

C.RNA酶抑制剂

D.合适的缓冲液体系

E.逆转录酶

F.寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物

10.有关PCR的模板说法正确的是（）

A.模板可以是DNA也可以是RNA

B.大多数PCR反应中对DNA模板纯度要求不高

C.模板用量低

D.标本处理的基本要求是除去杂质

11.以下有关RT-PCR反应的说法你认为正确的有（）

A. 反应体系一般有20μl

B.反应体系中有缓冲液,四种dNTP,MgCl2,DTT,牛血清白蛋白,Oligo（dT）引物RNA模板和逆转录酶

C.逆转录于42℃进行,随后即进行PCR

D.RT-PCR的最终反应过程依然是以DNA为模板的PCR反应

12.PCR的产物累积的特征是（）

B.反应初期,目的DNA片断呈指数扩增

C.PCR进行到一定时间出现反应中的停滞效应

D.到达平台期的的PCR循环数取决于反应体系中酶的耗竭程度

E.PCR平台期的出现多数不可避免

F.到达平台期时若扩增目的DNA片断不足,可继续加入模板,酶和缓冲液进行PCR反应

13.有关Mg2+在PCR中的作用说法不正确的是（）

A.TaqDNA酶的活性维持需要Mg2+

B.TaqDNA酶的活性与反应体系中的Mg2+总浓度有关

C.Mg2+过低,酶催化非特异性扩增增加

D.Mg2+过高会降低酶的活性

E.总量应低于dNTP的量,常用1.5mmol/L

14.PCR中使用的底物dNTP应该是（）

A.使用前应将pH值调至7.0-7.5

B.dNTP浓度高可以加快反应速度,但却增加了出错率

C.降低反应速度可以提高反应特异性

D.PCR中,4种dNTP必须按一定比例配制

E.Mg2+会与dNTP结合,应注意二者浓度之间的关系

15.TaqDNA酶的特点是（）

A.75-80℃时具有最高的聚合酶活性

B.活性的维持需要Mg2+的参与

C.TaqDNA酶和klenow片断一样具有校正功能

D.TaqDNA酶的忠实性很高

E.具有类似末端转移酶的活性

16.有关引物的说法正确的是（）

A.引物浓度一般为0.1-1.5μmol/L

B.引物与模板的的比至少为108:

1

C.引物浓度过高会引起错配和非特异扩增,降低扩增效率

D.引物Tm值位于55-80℃较理想

17.PCR反应温度应该是（）

A.为使DNA变性完全,变性温度越高,时间越长越好

B.按模板DNA的复杂程度来调整变性温度和变性时间

C.于反应管中加入1-2d石蜡油防止反应液的蒸发

D.温度越高时间越长,dNTP破坏增加,对PCR反应产生不利影响

18.有关退火温度正确的是（）

A.引物与模板退火温度一般在45-55℃

B.退火温度过低,使非特异扩增增加

C.退火温度过高,PCR扩增含量下降

D.退火时间一般为1-2分钟

E.Tm值的允许范围内,应该选择较低的退火温度

19.延伸温度应有如下特点（）

A.一般为72℃

B.PCR延伸时间越长,产物的得率越高

C.TaqDNA酶在延伸温度时有较高的酶活性

D.PCR延伸时间根据待扩增片断的长度而定

20.PCR循环次数设定时应注意（）

B.应由最初靶分子浓度而定

C.理论上20-25个循环后,PCR产物累积达最大值

D.PCR的循环次数一般为25-30次

E.循环次数过多时会引起停滞效应

21.PCR样品制备时应注意（）

B.应有专门的区域制备模板

C.提取DNA样品和RNA样品时要带手套且经常更换

D.纯化样品对污染有极大的影响

E.普通分子克隆工具不能用做样品的处理和靶序列

F.提取核酸所用的试剂要求新鲜配制或者适当储存未经使用的试剂.

22.操作中应该注意（）

A.使用的溶液应该没有核酸,核酸酶

B.试剂水都是高质新鲜蒸馏水

C.工具（枪头,试管）都是一次性并且高压灭菌

D.应有专门的操作区

E.试剂应该分装保存

23.PCR反应总为阴性时应该（）

A.增加TaqDNA酶的浓度

B.增加靶DNA的量

C.增加扩增循环或者降低退火温度

D.提纯样品

E.取10μl扩增液再行PCR

24.PCR反应出现非特异产物时,应该采取的措施是（）

A.增加退火温度

B.降低TaqDNA酶浓度

C.减少退火及延伸时间

D.减少引物浓度

E.减少扩增循环次数

25.PCR可以广泛应用于（）

A.遗传性疾病的基因诊断

B.检测癌基因

C.检测病原微生物

D.法医鉴定

E.DNA序列测定

二：

填空题

1、PCR技术的发明人是。

2、PCR产物短期存放可在保存，长期储存应置于。

3、PCR的基本反应过程包括，，。

4、PCR引物设计的目的是在和间取得平衡。

5.PCR反应体系含有，，，。

6.引物与模板的退火温度一般为，延伸温度一般为。

7.PCR循环次数一般设定为，过多的循环次数会导致的出现。

8.引物3‘端最佳碱基选择是和。

9.PCR的反应体系一般选用。

10.PCR反应的缓冲液提供了PCR反应常用的为。

11.PCR的反应体系中，Mg2＋的浓度一般保持在,常用的是。

12.TaqDNA聚合酶具有，缺乏因此无。

13.在变性过程中，为防止反应液的蒸发，可在反应管中加入

14.（8分）聚合酶链式反应（PCR技术）是在实验室中以少量样品DNA制备大量DNA的生化技术，反应系统中包括微量样品DNA、DNA聚合酶、引物、足量的4种脱氧核苷酸及ATP等。

反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板，故DNA数以指数方式扩增，其简要过程如右图所示。

（1）某个DNA样品有1000个脱氧核苷酸，已知它的一条单链上碱基A:

G:

T:

C=1:

2:

3:

4，则经过PCR仪五次循环后，将产生个DNA分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是个。

（2）分别以不同生物的DNA样品为模板合成的各个新DNA之间存在差异，这些差异是

。

（3）请指出PCR技术与转录过程的三个不同之处：

①。

②。

③。

15．（7分）资料显示，近十年来，PCR技术（DNA聚合酶链式反应技术）成为分子生物实验的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制的特性，在试管中进行DNA的人工复制（如下图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使分子生物实验所需的遗传物质不再受限于活的生物体。

请据图回答：

（1）加热至94℃的目的是使DNA样品的键断裂，这一过程在生物体细胞内是通过酶的作用来完成的。

通过分析得出新合成的DNA分子中，A=T，C=G，这个事实说明DNA分子的合成遵循。

（2）新合成的DNA分子与模板DNA分子完全相同的原因是

和。

（3）通过PCR技术使DNA分子大量复制时，若将一个用15N标记的模板DNA分子（第一代）放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制到第五代时，含15N标记的DNA分子单链数占全部DNA总单链数的比例为。

（4）PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。

若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的（）

A．白细胞DNA　B．病毒蛋白质　C．血浆抗体　D．病毒核酸

16．（8分）下面甲图中DNA决定某一多肽链中的酪氨酸和丙氨酸过程示意图，乙图示样品DNA经PCR技术（聚合酶链式反应）扩增，可以获取大量DNA克隆分子。

分析回答：

（1）甲图中含有种核苷酸；丙氨酸的遗传密码子是。

该图表示了DNA中遗传信息的

过程。

（2）有一种贫血症是血红蛋白分子的一条多肽链上，一个酪氨酸被一个苯丙氨酸所替代造成的。

此种贫血症的根本原因是，即发生了改变。

（3）乙图的“PCR”与人体内的DNA复制相比有何特殊之处?

。

（4）现在要通过“PCR”得到甲图中DNA片段的1024个克隆片段，则至少要向试管中加入

个腺嘌呤脱氧核苷酸。

17、（8分）PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下，合成许许多多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异的扩增任何要求的目的或DNA分子片段；电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质（如琼脂糖凝胶）中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质和作亲子法学鉴定。

下图中1~4是电泳装置及相应电泳结果。

请回答：

（1）电泳与叶绿体色素分离采用的纸层析法比较，后者使用的介质是________。

电泳过程中分子的迁移速率除与本身所带净电荷的多少有关外，你认为还受什么因素影响（至少列出一种）？

___________。

（2）PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，是依据什么原理？

________________。

（3）图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，故可推知该多肽是由________种氨基酸构成的。

（4）图4通过提取某小孩和其母亲，以及待测定四位男性的DNA，分别由酶处理后，生成含有若干DNA片段，并已进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱，请分析：

谁是该小孩真正生物学上的父亲？

为什么？

18、（7分）PCR技术是一项在短时间内可将DNA分子迅速扩增的方法。

它的基本原理与细胞内DNA分子的复制类似。

下面是PCR的反应体系及反应条件，请据此回答：

（1）请指出DNA分子复制所需的条件是：

、、和。

与细胞核中DNA分子复

制相比，95℃条件下变性30s的目的是：

。

反应体系中的缓冲液相当于细胞中的。

（2）如果有反应体系中加入模板DNA分子100个，则经过30个循环后，DNA分子的数量将达到个。

19、（7分）在2004年12月26日发生的印度洋地震海啸灾难中，死亡人数已达到15万，为了帮助辨别遇难者身份，我国政府派出了DNA鉴定专家组到泰国为遇难遗体做法医病理检验。

下列是一组法医检验DNA时常用到的生物技术或物质：

（1）PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下，合成许多相同片段的一种方法，利用它能迅速而特异的扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段；

（2）限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切以选择目的基因或DNA片段；

（3）电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带电荷不同，把待测分子的混合物放在一定介质（如琼脂糖凝胶）中进行分离和分析的实验技术，利用它能分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质，也可用作亲子法学鉴定。

请阅读上述内容并回答下列问题：

（1）PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，是依据什么原理？

；利用PCR技术扩增DNA片段时用到的“体外酶”通常是指什么酶？

。

（2）电泳过程中分子的迁移率除与本身所带电荷的多少有关以外，你认为还受什么因素影响？

（至少列出一种）。

（3）如果将含有2条多肽链共48个氨基酸的蛋白质进行彻底的水解，然后再将得到的氨基酸混合物进行电泳，结果如下图1所示。

则可推知该蛋白质由种氨基酸构成，该蛋白质水解时需要的水分子数是。

MCF1F2F3F4

（M代表母亲，C代表儿子，

F1—F4代表待测四位男性）

图1图2图3

（4）由于每个人的DNA条带（经电泳后）分布图是独一无二的，因此“DNA指纹法”可帮助进行亲子鉴定或帮助司法部门进行案件侦破。

如果取某小孩和其母亲、以及另外四位待测男性的DNA，经合适的酶处理以后得到若干DNA片段，再经电泳以后得到“DNA指纹图谱”如上图2所示，请分析：

四位男性中谁最可能是该小孩的生物学父亲？

。

（5）现以3种不同的限制性内切酶对6.2kb大小的线状DNA进行剪切后，用凝胶电泳分离各DNA片段，实验结果图3所示。

请问：

3种不同的限制性内切酶在此DNA片段上相应切点的位置是。

（请从下列各项中选择）

三、简答题

1、简述PCR反应的基本步骤。

2、简述PCR模板的种类及制备方法。

3、简述PCR产物的积累规律。

4、简述PCR的基本反应。

5、简述PCR实验应注意的事项。

6、简述连接酶链反应的基本原理。

7、简述RNA体外扩增的特点。

四、论述题

1、试述PCR的基本原理及引物设计原则。

2、试述PCR技术的特点。

3、试述PCR反应条件的优化。

4、试述PCR的主要类型及其工作原理。