有关PCR习题.docx

1、有关PCR习题有关PCR习题一、选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。1以下哪种物质在PCR反应中不需要（）ATaqDNA聚合酶BdNTPsCMg2+DRNA酶E合适pH缓冲液2以下哪种酶可耐高温（）ATaqDNA聚合酶BHindCT4连接酶DRNA酶EKlenow片段3PCR反应正确过程应为（）A退火变性延伸B变性退火延伸C退火延伸变性D变性延伸退火E延伸变性退火4PCR技术的本质是（）A核酸杂交技术B核酸重组技术C核酸扩增技术D核酸变性技术E核酸连接技术5TaqDNA聚合酶酶促反应最适温度为（）A37B5055C7075D8085E94956能在细胞内进行PCR扩增的PCR仪为（）A普通P

2、CR仪B梯度PCR仪C原位PCR仪D荧光PCR仪E实时PCR仪7在下列哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中DNA原始拷贝数（）A普通PCR仪B梯度PCR仪C原位PCR仪D荧光实时PCR仪E定性PCR仪8PCR基因扩增仪最关键的部分是（）A温度控制系统B荧光检测系统C软件系统D热盖E样品基座9“位置的边缘效应”是指（）A温度的准确性欠佳B温度的均一性欠佳C边缘升降温速度快D边缘升降温速度慢E梯度模式和标准模式温度不一致10PCR扩增仪升降温速度快有很多优点，以下哪一项应除外（）A缩短反应时间B提高工作效率C消除位置的边缘效应D缩短非特异性反应时间E提高反应特异性11、PCR技术扩增DNA,需要的条

3、件是()目的基因引物四种脱氧核苷酸DNA聚合酶等mRNA核糖体A、B、C、D、12、镁离子在DNA或RNA体外扩增反应的浓度一般为（）A、0.3-1mmol/LB、0.5-1mmol/LC、0.3-2mmol/D、0.5-2mmol/L13、多重PCR需要的引物对为（）A、一对引物B、半对引物C、两对引物D、多对引物14、PCR是在引物、模板和4种脱氧核糖核苷酸存在的的电泳标记位置，哪份标本最有可能确诊为禽流感（）AMBNCQDW21、某考古学家在西伯利亚泰加林地区的冰中，发现了一种冰冻的已灭绝的巨大动物的肌肉。他想了解该巨型动物的DNA与现今印度大象的DNA的相似性，于是做了如下检测工作，其

4、中正确的操作步骤及顺序是降低温度，检测处理后形成的杂合DNA双链区段通过PCR技术扩增巨型动物和大象的DNA把巨型动物的DNA导入大象的细胞中在一定的温度条件下，将巨型动物和大象的DNA水浴共热A.B.C.D.22、PCR的发明人是A.MullisB.牛顿C.KennyD.James23、退火温度一般比引物的熔解温度（Tm）低多少合适A.7B.10C.5D.2E.2024、引物的最佳浓度为A.0.1-0.5MB.1-2MC.5-10MD.100ME.200M25、专门用于制备单链DNA的PCR技术是A、对称PCRB、反向PCRC、RTPCRD、不对称PCRE、嵌套PCR26、PCR变性温度一般

5、为A96B.85C.72D.55E.10027、pre-mRNA内含子的5-末端一般为（）A、AUB、GUC、AGD、CGE、AC28、在大肠杆菌的DNA损伤修复时，对于填补缺口可能最重要的酶是A、DNA聚合酶B、DNA聚合酶C、DNA聚合酶D、RNA聚合梅E、以上都不是29、可用于扩增未知序列的PCR方法是（）A、对称PCRB、反向PCRC、RT-PCRD、不对称PCRE、嵌套PCR30、在聚合酶链反应（PCR）中最常用的DNA聚合酶是AT4DNA连接酶BT7DNA聚合酶CTaqDNA聚合酶DE.coliDNA聚合酶IEE.coliDNA聚合酶II31、下列关于PCR引物设计的说法错误的是（

6、）A设计引物时应考虑使3端引物和5端引物具有相似的Tm值B每条引物自身不应有稳定的发夹结构C上下游引物之间不宜形成稳定的二聚体结构D引物的5和3端必须和模板严格配对结合E引物与非特异扩增区的序列无同源性32、TaqDNA聚合酶可以不依赖模板在dsDNA的3末端加上一个碱基为（）A.GB.AC.TD.CE.I33PCR反应中，所设计引物的长度一般为（ ） A510核苷酸 B. 1530核苷酸 C. 30个核苷酸C.引物设计时GC含量在引物中一般为4555D.按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过3个碱基E.两个引物之间不应存在互补序列，尤其避免3端的互补重叠F.引物的3端可以游离而不影响P

7、CR反应的进行6. 以下关于PCR的说法正确的是（ ）A.PCR的模板可以是DNA也可以是RNAB.PCR的模板必须从组织细胞中分离出来C.PCR反应的特异性取决于引物和模板DNA的结合位点。D.PCR反应初期，目的DNA片断的增加呈指数扩增。E.PCR反应一般需要含102105拷贝的模板7以下关于PCR反应条件错误的是（ ）B.PCR缓冲液中加入二甲基亚砜有利于破坏模板的二级结构，提高反应的特异性。C.Mg浓度过高会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过低又会使酶催化非特异性扩增增强。D.4种dNTP应以等摩尔浓度配制，以减少错配误差。E.引物浓度一般为0.5-1umol/L8. PCR反应时

8、应设立哪种对照（ ）A.阴性对照B.阳性对照C.试剂对照D.以上答案都正确9. 逆转录反应体系包括（ ）B. RNA模板，四种dNTPC. RNA酶抑制剂D.合适的缓冲液体系E.逆转录酶F.寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物10. 有关PCR的模板说法正确的是 ( )A.模板可以是DNA也可以是RNAB.大多数PCR反应中对DNA模板纯度要求不高C.模板用量低D.标本处理的基本要求是除去杂质11. 以下有关RT-PCR反应的说法你认为正确的有( )A.反应体系一般有20l B.反应体系中有缓冲液, 四种dNTP, MgCl2, DTT, 牛血清白蛋白, Oligo(dT)引物RNA模板和逆转录酶C.逆转录

9、于42进行,随后即进行PCRD. RT-PCR的最终反应过程依然是以DNA为模板的PCR反应12. PCR的产物累积的特征是( )B.反应初期,目的DNA片断呈指数扩增C. PCR进行到一定时间出现反应中的停滞效应D.到达平台期的的PCR循环数取决于反应体系中酶的耗竭程度E. PCR平台期的出现多数不可避免F.到达平台期时若扩增目的DNA片断不足,可继续加入模板,酶和缓冲液进行PCR反应13. 有关Mg2+在PCR中的作用说法不正确的是( )A. Taq DNA 酶的活性维持需要Mg2+B. Taq DNA酶的活性与反应体系中的Mg2+总浓度有关C. Mg2+过低,酶催化非特异性扩增增加D.

10、Mg2+过高会降低酶的活性E.总量应低于dNTP的量, 常用1.5mmol/L14. PCR中使用的底物dNTP应该是( )A.使用前应将pH值调至7.0-7.5B. dNTP浓度高可以加快反应速度,但却增加了出错率C.降低反应速度可以提高反应特异性D. PCR中, 4种 dNTP必须按一定比例配制E. Mg2+会与dNTP结合,应注意二者浓度之间的关系15. Taq DNA酶的特点是( )A. 75-80时具有最高的聚合酶活性B.活性的维持需要Mg2+的参与C. Taq DNA酶和klenow片断一样具有校正功能D. Taq DNA酶的忠实性很高E.具有类似末端转移酶的活性16. 有关引物的

11、说法正确的是( )A.引物浓度一般为0.1-1.5mol/LB.引物与模板的的比至少为108:1C.引物浓度过高会引起错配和非特异扩增,降低扩增效率D.引物Tm值位于55-80较理想17. PCR反应温度应该是( )A. 为使DNA变性完全,变性温度越高,时间越长越好B.按模板DNA的复杂程度来调整变性温度和变性时间C.于反应管中加入1-2d 石蜡油防止反应液的蒸发D.温度越高时间越长, dNTP破坏增加,对PCR反应产生不利影响18.有关退火温度正确的是( )A.引物与模板退火温度一般在45-55B.退火温度过低,使非特异扩增增加C.退火温度过高, PCR扩增含量下降D.退火时间一般为1-2

12、分钟E. Tm值的允许范围内,应该选择较低的退火温度19.延伸温度应有如下特点( )A.一般为72B. PCR延伸时间越长, 产物的得率越高C. Taq DNA酶在延伸温度时有较高的酶活性D. PCR延伸时间根据待扩增片断的长度而定20.PCR循环次数设定时应注意( )B.应由最初靶分子浓度而定C. 理论上20-25个循环后, PCR产物累积达最大值D. PCR的循环次数一般为25-30次E.循环次数过多时会引起停滞效应21.PCR样品制备时应注意( )B.应有专门的区域制备模板C.提取DNA样品和RNA样品时要带手套且经常更换D.纯化样品对污染有极大的影响E. 普通分子克隆工具不能用做样品的

13、处理和靶序列F.提取核酸所用的试剂要求新鲜配制或者适当储存未经使用的试剂.22.操作中应该注意( )A.使用的溶液应该没有核酸,核酸酶B.试剂水都是高质新鲜蒸馏水C.工具(枪头,试管) 都是一次性并且高压灭菌D.应有专门的操作区E.试剂应该分装保存23. PCR反应总为阴性时应该( )A.增加Taq DNA酶的浓度B. 增加靶DNA的量C.增加扩增循环或者降低退火温度D.提纯样品E.取10l扩增液再行PCR24. PCR反应出现非特异产物时,应该采取的措施是( )A.增加退火温度B.降低Taq DNA酶浓度C. 减少退火及延伸时间D.减少引物浓度E.减少扩增循环次数25.PCR可以广泛应用于(

14、 )A.遗传性疾病的基因诊断B. 检测癌基因C.检测病原微生物D. 法医鉴定E. DNA序列测定二：填空题1、PCR技术的发明人是 。2、PCR产物短期存放可在 保存，长期储存应置于 。3、PCR的基本反应过程包括 ， ， 。4、PCR引物设计的目的是在 和 间取得平衡。5. PCR反应体系含有 ， ， ， 。6. 引物与模板的退火温度一般为 ，延伸温度一般为 。7. PCR循环次数一般设定为 ，过多的循环次数会导致 的出现。8. 引物3端最佳碱基选择是 和 。9. PCR的反应体系一般选用 。10. PCR反应的缓冲液提供了PCR反应 常用的为 。11. PCR的反应体系中，Mg2的浓度一般

15、保持在 ,常用的是 。12. TaqDNA聚合酶具有 ，缺乏 因此无 。13. 在变性过程中，为防止反应液的蒸发，可在反应管中加入 14.(8分) 聚合酶链式反应(PCR技术)是在实验室中以少量样品DNA制备大量DNA的生化技术，反应系统中包括微量样品DNA、DNA聚合酶、引物、足量的4种脱氧核苷酸及ATP等。反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板，故DNA数以指数方式扩增，其简要过程如右图所示。（1）某个DNA样品有1000个脱氧核苷酸，已知它的一条单链上碱基A:G:T:C=1:2:3:4，则经过PCR仪五次循环后，将产生 个DNA分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是 个

16、。（2）分别以不同生物的DNA样品为模板合成的各个新DNA之间存在差异，这些差异是 。（3）请指出PCR技术与转录过程的三个不同之处： 。 。 。15（7分）资料显示，近十年来，PCR技术（DNA聚合酶链式反应技术）成为分子生物实验的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制的特性，在试管中进行DNA的人工复制（如下图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使分子生物实验所需的遗传物质不再受限于活的生物体。请据图回答：（1）加热至94的目的是使DNA样品的 键断裂，这一过程在生物体细胞内是通过 酶的作用来完成的。通过分析得出新合成的DNA分子中，A=T，C=G，这个事实说明DNA

17、分子的合成遵循 。（2）新合成的DNA分子与模板DNA分子完全相同的原因是 和 。（3）通过PCR技术使DNA分子大量复制时，若将一个用15N标记的模板DNA分子（第一代）放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制到第五代时，含15N标记的DNA分子单链数占全部DNA总单链数的比例为 。（4）PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的（ ）A白细胞DNA B病毒蛋白质 C血浆抗体 D病毒核酸16(8分)下面甲图中DNA决定某一多肽链中的酪氨酸和丙氨酸过程示意图，乙图示样品 DNA经PCR技

18、术(聚合酶链式反应)扩增，可以获取大量DNA克隆分子。分析回答：(1)甲图中含有 种核苷酸；丙氨酸的遗传密码子是 。该图表示了DNA中遗传信息的 过程。(2)有一种贫血症是血红蛋白分子的一条多肽链上，一个酪氨酸被一个苯丙氨酸所替代造成的。此种贫血症的根本原因是 ，即 发生了改变。(3)乙图的“PCR”与人体内的DNA复制相比有何特殊之处? 。(4)现在要通过“PCR”得到甲图中DNA片段的1024个克隆片段，则至少要向试管中加入 个腺嘌呤脱氧核苷酸。17、（8分）PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下，合成许许多多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异的扩增任何要求的目的或DNA分子片段

19、；电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质和作亲子法学鉴定。下图中14是电泳装置及相应电泳结果。请回答：（1）电泳与叶绿体色素分离采用的纸层析法比较，后者使用的介质是_。电泳过程中分子的迁移速率除与本身所带净电荷的多少有关外，你认为还受什么因素影响(至少列出一种)？_。（2）PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，是依据什么原理？_。（3）图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，故可推知该多肽是由_种氨基酸构成的。（4）图

20、4通过提取某小孩和其母亲，以及待测定四位男性的DNA，分别由酶处理后，生成含有若干DNA片段，并已进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱，请分析：谁是该小孩真正生物学上的父亲？为什么？18、（7分）PCR技术是一项在短时间内可将DNA分子迅速扩增的方法。它的基本原理与细胞内DNA分子的复制类似。下面是PCR的反应体系及反应条件，请据此回答： （1）请指出DNA分子复制所需的条件是： 、 、 和 。与细胞核中DNA分子复制相比， 95条件下变性30s的目的是： 。反应体系中的缓冲液相当于细胞中的 。（2）如果有反应体系中加入模板DNA分子100个，则经过30个循环后，DNA

21、分子的数量将达到 个。19、（7分）在2004年12月26日发生的印度洋地震海啸灾难中，死亡人数已达到15万，为了帮助辨别遇难者身份，我国政府派出了DNA 鉴定专家组到泰国为遇难遗体做法医病理检验。下列是一组法医检验DNA时常用到的生物技术或物质： （1）PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下，合成许多相同片段的一种方法，利用它能迅速而特异的扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段；（2）限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切以选择目的基因或DNA片段；（3）电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带电荷不同，把待测分子的混合物放在一定介

22、质（如琼脂糖凝胶）中进行分离和分析的实验技术，利用它能分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质，也可用作亲子法学鉴定。请阅读上述内容并回答下列问题：（1）PCR技术能把某一DNA 片段进行扩增，是依据什么原理？ ；利用PCR技术扩增DNA片段时用到的“体外酶”通常是指什么酶？ 。（2）电泳过程中分子的迁移率除与本身所带电荷的多少有关以外，你认为还受什么因素影响？（至少列出一种） 。（3）如果将含有2条多肽链共48个氨基酸的蛋白质进行彻底的水解，然后再将得到的氨基酸混合物进行电泳，结果如下图1所示。则可推知该蛋白质由 种氨基酸构成，该蛋白质水解时需要的水分子数是 。 M C F1 F2 F3

23、 F4 （M 代表母亲，C代表儿子，F1 F4 代表待测四位男性） 图1 图2 图3（4）由于每个人的DNA条带（经电泳后）分布图是独一无二的，因此“DNA指纹法”可帮助进行亲子鉴定或帮助司法部门进行案件侦破。 如果取某小孩和其母亲、以及另外四位待测男性的DNA，经合适的酶处理以后得到若干DNA片段，再经电泳以后得到“DNA指纹图谱”如上图2所示，请分析：四位男性中谁最可能是该小孩的生物学父亲？ 。（5）现以3种不同的限制性内切酶对6.2kb大小的线状DNA进行剪切后，用凝胶电泳分离各DNA片段，实验结果图3所示。请问：3种不同的限制性内切酶在此DNA片段上相应切点的位置是 。（请从下列各项中选择） 三、简答题1、简述PCR反应的基本步骤。2、简述PCR模板的种类及制备方法。3、简述PCR产物的积累规律。4、简述PCR的基本反应。5、简述PCR实验应注意的事项。6、简述连接酶链反应的基本原理。7、简述RNA体外扩增的特点。四、论述题1、试述PCR的基本原理及引物设计原则。2、试述PCR技术的特点。3、试述PCR反应条件的优化。4、试述PCR的主要类型及其工作原理。