植保高粱叶枯病的室内毒力测定学士学位论文.docx

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植保高粱叶枯病的室内毒力测定学士学位论文

编号：

119070241015

本科毕业论文

题目：

高粱叶枯病的室内毒力测定

学院：

农学院

专业：

植物保护

年　　级：

2011级

姓名：

赵海龙

指导教师：

赵艳琴

完成日期：

2015年5月

目录

摘要1

Abstract2

引言3

1材料和方法3

1.1供试材料3

1.2室内药剂筛选及配制4

1.3试验方法5

2结果与分析6

2.1单剂抑制率的测定6

2.2孢子抑制率及其显著性分析8

2.3毒力回归方程的计算11

3结论与讨论12

参考文献13

致谢14

摘要

高粱叶枯病是高粱上一种真菌病害，本文主要是以高粱叶枯病为材料，采用生长速率法和孢子萌发抑制法对常用的五种杀菌剂进行室内毒力测定，结果表明：

对于高粱叶枯2号菌株，50%异菌脲500倍液0.01和0.05显著水平下，该病菌的生长速率均为最低，孢子抑制率最高，菌落生长抑制率最高，是该病菌的有效防治药剂，而在50%嘧菌酯400倍液和3%中生菌素在0.01显著水平下下生长速率最高，菌落生长抑制率最低，孢子抑制率最低，对于防治该病并无明显效果；对于高粱叶枯4号菌株，50%异菌脲500倍液0.01和0.05显著水平下该病菌的生长速率最低，孢子抑制率最高，菌落生长抑制率最高，是防治该病菌的有效药剂，而在50%嘧菌酯400倍液和800倍液下该菌株表现出生长促进作用。

关键词：

高粱叶枯病；杀菌剂；毒力测定；萌发抑制率

Abstract

Sorghumleafblightisanewkindoffungidiseasesonsorghum。

Thispaperisbasedonsorghumleafblightmaterialsusingthegrowthrateandsporegerminationinhibitionmethodtomeasurementthefivecommonfungicidesindoortoxicity。

Theresultsshowthat：

ForthesorghumleafblightNo.2strain，theIprodione50%w.p.500timesliquidunderthesignificantlevelof0.01and0.05exhibitedthelowestgrowthrateandthebestinhibitoryeffectwhichisaneffectivecontrolofthegerms。

ButundertheAzoxystrobin50%w.p.400timesliquidandtheZhongshengmycin3%w.p.liquidofthesignificantlevelof0.01and0.05exhibitedthehighestgrowthrateandthelowestcolonygrowthinhibitionrate。

ForthesorghumleafblightNo.4strain，theIprodione50%w.p.500timesliquidofthesignificantlevelof0.01and0.05exhibitedthelowestgrowthrateandthebestinhibitoryeffectwhichisaneffectivecontrolofthegerms。

ButundertheAzoxystrobin50%w.p.400timesand800timesliquidofthesignificantlevelof0.01and0.05，thestrainshowedgrowthpromotingeffect。

KeyWords:

sorghumleafblight；fungicide；toxicitymeasurement；germinationinhibitionrate

引言

高粱属禾本科一年生草本植物，又名蜀黍、秫秫、芦粟、茭子、木稷等，高粱是酿酒的重要原料，泸州特曲、茅台、竹叶青等名酒都是以高粱为主要原料酿造的【1】。

高粱在中国的栽培面积很广，其中山西地区是高粱的主产量区，在内蒙地区，高粱的的产量也占有很大的比重。

随着高粱大面积的种植，一方面，高粱病害的蔓延也逐渐增长。

据统计，目前高粱病害种类高达30多种，其主要为害以黑穗病，叶斑病，炭疽病和大斑病为主【2】，高粱散黑穗病在我国各高粱产区普遍发病，在华北、东北发病较重，近几年来严重影响高粱产量【3】。

另一方面，高粱上的新病害也逐步增多，高粱叶枯病在一些地区也被发现。

高粱叶枯病是由细极链格孢（Alternariatenuissima）引起的真菌性病害，属于半知菌亚门半知菌纲链孢霉目黑霉科链格孢属，链格孢属是全球分布最广，经济上重要的半知菌类真菌之一，其有性态在自然条件下难以见到，仅有十余种链格孢的有性态在实验室条件下被发现；其菌丝黑色，大量存在于土壤、空气和作为培养料的各种有机质上，其孢子通过空气传播【4】。

由链格孢引起的病害一般都属于流行性较强的病害。

高粱叶枯病主要危害的是高粱的叶片，影响其光合作用，从而使高粱产量降低。

在发病初期，高粱叶片上形成梭形斑，上面长有白色柱状霉层，由于湿度的增大，在后发病期病斑的边缘出现黄褐色轮纹。

高粱叶枯病是高粱上一种新的病害，目前还没有特效的防治药剂，对此，本文采用菌丝生长速率法和孢子抑制率法对五种杀菌剂对于高粱叶枯病菌的室内毒力进行研究，筛选出防治该病害有效药剂，用来指导田间生产，从而提高产量，增加经济效益。

1材料和方法

1.1供试材料

1.1.1供试菌种

采集于内蒙古通辽市内蒙古民族大学农学院试验田，进行分离纯化【5】获得两个菌种：

高粱叶枯2号菌种和高粱叶枯4号菌种，并保存于冷藏箱备用。

1.1.2供试药剂及有效成分

编号

药剂名称

有效成分

剂型

防治对象

生产厂家

1

异菌脲

50%

可湿性粉剂

小麦赤霉病

海南正业中农高科技股份有限公司

2

多菌灵

50%

可湿性粉剂

水果蔬菜等多种病害

利民化工

3

烯酰·福美双

55%

水分散粒剂

霜霉病

青岛瀚生科技

4

中生菌素

3%

可湿性粉剂

辣椒疫病

利民化工

5

嘧菌酯

50%

可湿性粉剂

黄瓜枯萎病　

陕西美邦农药

1.1.3培养基制备原料

本试验均采用PDA培养基进行接种培养，培养基配制原料包括马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g和蒸馏水1000ml。

1.1.4试验主要仪器设备

超净工作台，LRHS-250B恒温恒湿培养箱（上海贺德实验设备有限公司），立鹤牌电热恒温培养箱（山东潍坊医疗器械厂），101型电热鼓风干燥箱（江苏省通州市通用科技仪器厂），万分之一电子天平（上海精密科学仪器公司），电子显微镜（日本尼康公司），高压灭菌锅（上海三申），酒精灯，培养皿，移液管，接种环，打孔器，直尺，锥形瓶，烧杯，搅拌棒，电磁炉，镊子等。

1.2试验室内药剂梯度调节及培养基的配制

1.2.1PDA培养基的制备

按照PDA培养基的制备配方，配制1000ml培养基五组，每组分装至3个三角瓶中，封装完毕后，用高压灭菌锅121℃灭菌30min后取出冷却备用。

1.2.2药剂梯度调节及配制方案

本试验的每个药剂均设定五个梯度，一个对照，每个梯度三次重复。

具体配制为：

50%异菌脲可湿性粉剂配制500倍母液，配制成500、1000、1500、2000、2500倍液；50%多菌灵可湿性粉剂配制400倍母液，配制成400、600、800、1000、1200倍液；55%烯酰·福美双水分散粒剂配制400倍母液，配成400、800、1000、1200、1600倍液；3%中生菌素可湿性粉剂配制成400倍母液，配制成400、600、800、1000、1200倍液；50%嘧菌酯可湿性粉剂配制400倍母液，配成400、800、1000、1200、1600倍液。

1.3试验方法

1.3.1生长速率法

本试验需在超净工作台上进行，因此在实验前需要对无菌工作室和超净工作台进行30min左右的紫光灯灭菌，确保将空气中的杂菌降到最低。

并且试验所用的培养皿和其他仪器都要放进干热灭菌箱165℃灭菌1h，冷却后取出备用。

首先将之前配制的培养基水浴加热溶解，加入少许的抗生素后冷却备用。

在无菌条件下，将上述配置好的药剂取1ml放入9ml冷却至约50℃的PDA培养基中混合均匀，倒入消毒灭菌的培养皿中制成带药的培养基平板，每个药剂浓度重复3次。

然后用直径为5mm的打孔器，在试验前将已经培养好的高粱叶枯病2号菌种的菌落中打取直径为5mm的菌饼（打取菌落边缘生长旺盛的菌丝），将菌饼分别接种在含不同浓度药剂的PDA平板的中心（使带菌丝的一面接触培养基），加盖，翻转,25℃下放入恒温培养箱中培养。

另外，每个药剂做一个对照处理，对照组取1ml无菌水放入9mlPDA培养基中混合，再倒入平板中，同样用消毒后的打孔器打取菌饼接到培养基上，重复三次。

（高粱叶枯病4号菌种采取同样的方法）最后在培养的第2、4、6天分别调查病原菌菌丝生长情况，并用十字交叉法测量其菌落直径，记录数据。

1.3.2孢子数目法

将培养5至6天的病原菌取出，在培养皿中滴加50ul的土温试剂和500ul的蒸馏水，用玻璃棒搅拌，配制成均匀的孢子悬浮液，用球计数板记录孢子数目。

2结果与分析

2.1单剂抑制率的测定

根据实验记录的菌落直径数据绘制表格，运用数据分析软件计分析，对于高粱叶枯2号菌株，50%异菌脲抑制率范围为82.3%-48.3%，其次为55%烯酰·福美双，抑制率范围为71.3%-42.2%，接下来是50%多菌灵，3%中生菌素，而抑制率最低的是50%嘧菌酯；其中，50%异菌脲500倍液的抑制率最高达82.3%，其抑制效果最好，50%异菌脲1000倍液和55%烯酰·福美双1600倍液的抑制效果仅次之，50%嘧菌酯400倍液的抑制效果最差，仅达17%左右。

表1五种药剂各梯度对高粱叶枯2号菌株菌落生长平均速率及抑制

药剂及有效成分

稀释倍数

GLYK2

菌落生长平均速率

抑制率

CK

6.3333

50%异菌脲

500倍液

1.1222

0.8228

50%异菌脲

1000倍液

1.6278

0.7429

50%异菌脲

1500倍液

2.1944

0.6535

50%异菌脲

2000倍液

2.6278

0.5851

50%异菌脲

2500倍液

3.2722

0.4833

CK

9.1389

50%多菌灵

400倍液

4.4537

0.5127

50%多菌灵

600倍液

6.2944

0.3112

50%多菌灵

800倍液

6.9185

0.2429

50%多菌灵

1000倍液

5.7426

0.3716

50%多菌灵

1200倍液

7.4278

0.1872

CK

12.0556

55%烯酰·福美双

400倍液

6.9685

0.4219

55%烯酰·福美双

800倍液

5.2852

0.5616

55%烯酰·福美双

1000倍液

5.5796

0.5371

55%烯酰·福美双

1200倍液

4.9407

0.5901

55%烯酰·福美双

1600倍液

3.4611

0.7129

CK

12.2778

3%中生菌素

400倍液

7.2111

0.4126

3%中生菌素

600倍液

8.3981

0.3159

3%中生菌素

800倍液

9.5481

0.2223

3%中生菌素

1000倍液

9.3907

0.2351

3%中生菌素

1200倍液

9.5667

0.2208

CK

10.2778

50%嘧菌酯

400倍液

8.4926

0.1736

50%嘧菌酯

800倍液

5.9639

0.4197

50%嘧菌酯

1000倍液

6.4102

0.3763

50%嘧菌酯

1200倍液

5.5454

0.4604

50%嘧菌酯

1600倍液

7.5694

0.2635

对于高粱叶枯4号菌株，50%异菌脲抑制率范围为68.1%-45.6%，其次为55%烯酰·福美双，抑制率范围为67.5%-42.1%，接下来是50%多菌灵，3%中生菌素，其中，50%异菌脲500倍液的抑制率最高，其抑制效果最好，55%烯酰·福美双1000倍液和1200倍液的抑制效果仅次之；而50%嘧菌酯低倍液下对于该菌种的生长具有增效作用，高倍液下仅具有微弱的抑制作用，效果不太明显。

表1五种药剂各梯度对高粱叶枯4号菌株菌落生长平均速率及抑制率比较

药剂及有效成分

稀释倍数

GLYK4

菌落生长平均速率

抑制率

CK

7.1667

50%异菌脲

500倍液

2.2889

0.6806

50%异菌脲

1000倍液

2.9611

0.5868

50%异菌脲

1500倍液

3.4778

0.5147

50%异菌脲

2000倍液

2.9278

0.5914

50%异菌脲

2500倍液

3.9000

0.4558

CK

8.6667

50%多菌灵

400倍液

4.6019

0.4690

50%多菌灵

600倍液

6.0204

0.3053

50%多菌灵

800倍液

6.3352

0.2690

50%多菌灵

1000倍液

5.3981

0.3771

50%多菌灵

1200倍液

6.7519

0.2209

CK

10.3056

55%烯酰·福美双

400倍液

5.9722

0.4204

55%烯酰·福美双

800倍液

6.2685

0.3917

55%烯酰·福美双

1000倍液

3.3500

0.6749

55%烯酰·福美双

1200倍液

3.6407

0.6467

55%烯酰·福美双

1600倍液

3.7611

0.6350

CK

12.2222

3%中生菌素

400倍液

6.2204

0.4911

3%中生菌素

600倍液

8.6296

0.2939

3%中生菌素

800倍液

9.6556

0.2099

3%中生菌素

1000倍液

9.6759

0.2083

3%中生菌素

1200倍液

9.8722

0.1922

CK

5.8333

50%嘧菌酯

400倍液

8.0648

-0.3825

50%嘧菌酯

800倍液

8.7148

-0.4939

50%嘧菌酯

1000倍液

5.2954

0.0922

50%嘧菌酯

1200倍液

3.1417

0.4614

50%嘧菌酯

1600倍液

1.8472

0.6833

2.2孢子抑制率及其显著性分析

根据试验记录的孢子数量进行相对抑制率的分析和显著水平分析，对于2号菌种，处于0.05的显著水平下，50%异菌脲显著水平较其他杀菌剂高，最高的是50%异菌脲500倍液，孢子抑制效果应是最好的；其次为50%异菌脲1500倍液，50%异菌脲2000倍液；显著水平最低的为3%中生菌1200倍液，55%福美双和50%多菌灵差异显著性均处于中间同一水平。

处于0.01的显著水平下，最高的仍是50%异菌脲500倍液，孢子抑制效果是最好的；其次为50%异菌脲1000倍液，50%异菌脲1500倍液，50%异菌脲2000倍液；55%福美双和50%多菌灵差异显著性均处于中间同一水平。

表3五种药剂各梯度对高粱叶枯2号菌株孢子抑制率显著性差异比较

药剂及有效成分

稀释倍数

孢子相对抑制率

显著水平

0.01

0.05

3%中生菌素

1200倍液

0.8321

g

K

50%嘧菌酯

800倍液

0.8754

fg

HK

3%中生菌素

400倍液

0.8016

efg

GHK

3%中生菌素

600倍液

0.8495

defg

FGHK

3%中生菌素

800倍液

0.8567

cdefg

EFGH

50%嘧菌酯

1600倍液

0.8431

cdefg

defgh

3%中生菌素

1000倍液

0.8852

cdefg

EFGH

50%嘧菌酯

400倍液

0.8946

bcdef

DEFGH

50%嘧菌酯

1200倍液

0.8846

abcdef

CDEFG

50%多菌灵

1000倍液

0.9089

abcdef

BCDEF

50%嘧菌酯

1000倍液

0.8992

abcde

ABCDE

50%多菌灵

1200倍液

0.9115

abcde

ABCDE

50%多菌灵

800倍液

0.9123

abcde

ABCDE

50%多菌灵

400倍液

0.9216

abcd

ABCDE

55%烯酰·福美双

1600倍液

0.9253

abcd

ABCDE

50%多菌灵

600倍液

0.9311

abcd

ABCDE

55%烯酰·福美双

400倍液

0.9564

abcd

ABCDE

55%烯酰·福美双

1000倍液

0.9434

abc

ABCD

55%烯酰·福美双

1200倍液

0.9658

abc

ABCD

55%烯酰·福美双

800倍液

0.9684

abc

ABC

50%异菌脲

2500倍液

0.9838

ab

AB

50%异菌脲

2000倍液

0.9844

a

A

50%异菌脲

1500倍液

0.9857

a

A

50%异菌脲

1000倍液

0.9864

a

AB

50%异菌脲

500倍液

0.9875

a

A

对于4号菌种，处于0.01和0.05显著水平下的显著性差异基本相同，50%异菌脲显著水平较其他杀菌剂高，最高的是50%异菌脲500倍液，其孢子抑制效果为最佳；显著水平最低的为50%嘧菌酯，其抑制效果不仅小，反而低倍液下右微弱的促进效果；而3%中生菌素，55%福美双和50%多菌灵差异显著性之间没有大的差别。

表4五种药剂各梯度对高粱叶枯4号菌株孢子抑制率显著性差异比较

药剂及有效成分

稀释倍数

孢子相对抑制率

显著水平

0.01

0.05

50%嘧菌酯

400倍液

-0.3529

h

K

50%嘧菌酯

800倍液

-0.4165

g

H

50%嘧菌酯

1000倍液

0.1521

f

G

3%中生菌素

1200倍液

0.8105

h

K

50%嘧菌酯

1600倍液

0.8452

ef

EF

50%多菌灵

1200倍液

0.7986

e

F

50%嘧菌酯

1200倍液

0.5498

de

F

50%多菌灵

600倍液

0.8213

cde

EF

50%多菌灵

800倍液

0.8252

cde

EF

50%多菌灵

1000倍液

0.8123

cde

EF

50%多菌灵

400倍液

0.8547

bcde

EF

3%中生菌素

1000倍液

0.8426

bcde

EF

3%中生菌素

800倍液

0.8245

bcde

CDEF

3%中生菌素

600倍液

0.8459

abcde

BCDEF

55%烯酰·福美双

1200倍液

0.8947

abcde

BCDEF

55%烯酰·福美双

1600倍液

0.8959

abcde

BCDEF

3%中生菌素

400倍液

0.8989

abcde

ABCDEF

55%烯酰·福美双

1000倍液

0.9018

abcde

ABCDE

55%烯酰·福美双

800倍液

0.9125

abcde

ABCDE

50%异菌脲

2500倍液

0.9431

abcd

ABCD

55%烯酰·福美双

400倍液

0.9541

abc

ABC

50%异菌脲

2000倍液

0.9689

abc

ABC

50%异菌脲

1500倍液

0.9657

ab

ABC

50%异菌脲

1000倍液

0.9798

ab

AB

50%异菌脲

500倍液

0.9875

a

A

2.3毒力回归方程的计算

最后对5种杀菌剂进行毒力回归方程的计算，对于高粱叶枯2号菌株，五种杀菌剂的EC50高低排列为:

50%异菌脲可湿性粉剂<50%多菌灵可湿性粉剂<55%烯酰·福美双水分散粒剂<50%嘧菌酯可湿性粉剂<3%中生菌素可湿性粉剂，50%异菌脲最灵敏，因此抑菌效果最好，而3%中生菌素EC50很大，且r值是负值，浓度与抑制率表现负相关，其抑菌效果最差。

表5五种杀菌剂对高粱叶枯2号菌株的毒力回归方程

药剂

r

毒力回归方程

EC50（mg/L）

50%异菌脲可湿性粉剂

0.92

y=6.97+0.08x

4.98E-26

50%多菌灵可湿性粉剂

0.69

y=5.68+0.23x

1.09E-03

55%烯酰·福美双水分散粒剂

0.51

y=5.65+0.34x

1.23E-02

3%中生菌素可湿性粉剂

-0.59

y=7.30-0.41x

4.27E+05

50%嘧菌酯可湿性粉剂

0.70

y=5.29+0.29x

9.88E-02

对于高粱叶枯4号菌株，50%异菌脲可湿性粉剂的EC50为7.47E-02，表现为最灵敏，抑菌效果最好，而50%嘧菌酯可湿性粉剂的EC50非常，抑菌效果表现为最差。

表6五种杀菌剂对高粱叶枯4号菌株的毒力回归方程

药剂

r

毒力回归方程

EC50（mg/L）

50%异菌脲可湿性粉剂

0.96

y=5.55+0.49x

7.47E-02

50%多菌灵可湿性粉剂

0.94

y=4.65+0.41x

7.21E+00

55%烯酰·福美双水分散粒剂

0.90

y=4.44+0.64x

7.60E+00

3%中生菌素可湿性粉剂

0.89

y=3.76-0.72x

5.15E+01

50%嘧菌酯可湿性粉剂

-0.62

y=10.39-1.82x

9.35E+02

3结论与讨论

本文选用农业生产中用来防治真菌病害常用的5种杀菌剂对高粱叶枯病进行室内的药剂筛选和毒力测定，这5种杀菌剂对于链格孢的病害都具有很好的防治作用，并且具有不同程度的抑制作用，通过选取不同梯度的药剂用于试验，计算菌丝的生长抑制率和孢子抑制率，最终结合毒力回归方程，结果初步显示50%异菌脲可湿性粉剂对于该病菌的防治