推荐下载关于丹参药材水溶性成分含量的HPLC法分析.docx
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关于丹参药材水溶性成分含量的HPLC法分析
【编者按】：
医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
的论说性文章。
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关于丹参药材水溶性成分含量的HPLC法分析
作者：
李曼玲,冯伟红,康琛,梁日欣,杨洪军,何希荣,黄璐琦
【摘要】目的建立丹参药材水溶性成分中丹酚酸B、丹参素和原儿茶醛的含量测
定方法。
方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱为KromosilC18（4.6mm250mm,5流
动相Ⅰ：
甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）,流动相Ⅱ：
甲醇-冰醋酸-水（20∶1∶80）;流
速：
1.0mL/min;检测波长分别为286、280nm;柱温35℃。
结果测定了10个不同产
地的丹参药材,丹酚酸B含量在0.09%～6.81%之间,平均回收率为99.64%,RSD=1.09%;
丹参素的含量在0.16%～0.68%之间,平均回收率为98.94%,RSD=1.49%;原儿茶醛的含量
在0.01%～0.09%之间,平均回收率为98.96%,RSD=1.66%。
结论本法简便、准确、重
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复性好,可作为丹参药材的含量测定标准。
【关键词】丹参;丹酚酸B;丹参素;原儿茶醛;高效液相色谱法
Keywords：
SalviamiltiorrhizaBge.;SalvianolicacidB;Danshensu;Protocatechuic
aldehyde;HPLC
丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎,味苦,性微寒,归心、肝
经,具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的作用。
用于月经不调,经闭通经,癥瘕积聚,胸
腹刺痛,热痹疼痛,疮疡肿痛,心绞痛等。
丹参的主要药效成分之一是丹参中的水溶性成
分,主要是酚酸类化合物丹酚酸B、丹参素和原儿茶醛。
我们采用HPLC法建立了这3
种成分的含量测定方法,可用于丹参及其饮片和制剂的研究及质量控制等。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：
HP1100高效液相色谱仪,G1315ADAD检测器,G1311A四元
泵,G1313A自动进样器,G1316A柱温箱,G1322A在线脱气机,AgilentChemStation色谱
工作站。
丹酚酸B对照品（批号200201）、丹参素钠对照品（批号855-200102）、原儿茶
醛对照品（批号0801-9402）均为供含量测定用,购于中国药品生物制品检定所。
乙腈：
色
谱纯,美国;甲醇：
色谱纯,北京化工厂;高纯水：
自制;其他试剂均为分析纯。
丹参药材由
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本所生药室提供。
2方法与结果
2.1丹酚酸B的含量测定
2.1.1色谱条件
色谱柱：
KromasilC18（4.6mm250mm,5流动相：
甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶
59）;流速：
1mL/min;柱温：
35℃;检测波长s=286nm;理论板数按丹酚酸B峰计算应不
低于4000。
在此条件下丹酚酸B与其他组分达到良好分离（见图1）。
2.1.2供试品溶液的制备
取本品粉末（过3号筛）0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇50mL,密
塞,称定重量,加热回流1h,取出,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微
孔滤膜（0.45m）滤过,取续滤液,即得。
3
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2.1.3对照品溶液的制备
tips:
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关于治疗病毒性心肌炎中药有效成分单体筛选方法的研究
作者：
雷蕾,崔蒙,尹爱宁,曹洪欣,刘丽红,奚怀平
【关键词】病毒性心肌炎;中药有效成分单体;筛选方法
中药有效成分单体和中药新药研发有着密切的关系。
自麻黄碱成功提取后,我国常用
中药有效成分单体的研究成为中医药领域中的一个重要的研究方向,而后靛玉红、三氧
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化二砷成功治疗白血病及青蒿素开发成抗疟疾药物等成功的实例使中药有效成分单体
的研究为世人瞩目。
目前,我国中药有效成分单体的研究主要有两步：
一是化学成分的
分离和提取,二是通过药效筛选,确定哪些化学成分为中药有效成分。
在药效筛选方面,又
分为传统筛选模式即利用体内外药理模型筛选模式和高通量筛选模式[1]。
尽管化学成
分提取方法和药效筛选方法已经有了很大发展,但由于中药本身的复杂性和科技研究手
段的局限性,有效成分单体的发现速度一直十分缓慢。
中医药是我国的瑰宝,如何充分利
用已有的中医药文献资源、建立筛选中药有效成分单体研究新方法是本研究的主要内
容。
病毒性心肌炎是病毒感染引起的常见心脏器质性疾病,目前仍没有治疗的特效药
物。
笔者以治疗病毒性心肌炎的中医药临床文献为基础,结合现代药理实验资料,研究筛
选中药有效成分单体的新方法,并且得到了一些有意义的结果。
1资料与方法
1.1从中医治疗病毒性心肌炎药物确定中药有效成分单体的药理作用
中医认为,病毒性心肌炎主要分以下4个证型：
急性热盛型、心阴虚损型、气阴两虚
型、阴阳两虚型。
结合现代药理学分析,中医治疗病毒性心肌炎药物的药理作用可以概
括为保护心肌作用、抗心肌缺血作用、抗心律失常作用、抗病毒作用、免疫调节作用
等[2-4]。
1.2中药有效成分单体的筛选方法
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中医药治疗病毒性心肌炎疗效显著,而化学成分是中药治病的物质基础,所以,临床使用
的中药包含的化学成分A就可以作为中药有效成分单体筛选中的第一个集合,见图1。
如前所述,中医在治疗病毒性心肌炎时使用的药物基本有保护心肌作用、抗心肌缺血作
用、抗心律失常作用、抗病毒作用、免疫调节作用等药理作用。
那么,具有以上药理作
用的中药化学成分就具有治疗病毒性心肌炎的潜力,所以,这类化学成分可以作为中药有
效成分单体筛选的第二个集合,即化学成分B。
两个集合取交集可以筛选出中药有效成
分单体。
既有临床实践,又有现代药理实验数据的支持,因此筛选出的中药有效成分单体
对于中药新药研发更具有开发潜力。
1.3资料来源
与疾病以及方剂相关的临床文献数据来自《中医临床诊疗文献数据库》,与中药相关
的数据来自《中国中药数据库》,从现代药理实验出发寻找具有保护心肌作用、抗心肌
缺血作用、抗心律失常作用、抗病毒作用、免疫调节作用的数据主要来源于《中药药
理数据库》和《中药化学数据库》。
1.4数据的清理和拆分
由于数据都来自于专题数据库,虽然其内容专一、相对完整、有效实用,但是,专题数据
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库中的数据都是使用自然语言来描述的,不能直接用于分析统计以及数据库之间关联关
系的建立,所以,数据必须进行清理和拆分,使之规范化。
实验方法是使用文本挖掘技术,
即中国中医科学院中医药信息研究所研制的词雀软件,利用特定的程序抽取化学成分
名称,对所需要的数据进行清洗和整理。
例如,龙胆根含裂环烯醚萜苷类苦味成分：
龙胆
苦苷（gentiopicroside）,当药苦苷（swertiamarin）,当药苷（sweroside）整理完毕后的数据见表
1,可以用于统计分析。
整个实验是使用Access和Excel完成的。
表1使用词雀软件处
理后的数据（略）
2结果与讨论
2.1从临床文献筛选的化学成分A
以心肌炎、病毒性为主题词,在中医临床诊疗文献数据库中检索到1645篇文献,
涉及782首方剂,共包含260味中药,6111个化学成分。
2.2从现代药理实验数据筛选的化学成分B
从中药药理数据库和中药化学数据库中筛选具有保护心肌作用、抗心肌缺血作用、
抗心律失常作用、抗病毒作用、免疫调节作用类化学成分共1163个。
这些化学成分的
特点都是经过现代药理实验研究,具有治疗病毒性心肌炎的潜力,但是都没有经过临床实
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践的检验。
2.3中药有效成分单体的筛选
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取丹酚酸B对照品适量,加75%甲醇溶解并制成每1mL含0.14mg的溶液,即得。
2.1.4标准曲线的绘制
分别精密吸取对照品溶液（0.14mg/mL）4、8、12、16、20L,注入高效液相色谱仪,测
定峰面积。
以丹酚酸B的进样量为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线,
并计算回归方程：
Y=-0.1536+895.6X,r=0.9996,结果表明,丹酚酸B在0.56～2.8g范围
内呈线性关系。
2.1.5精密度试验
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取供试品溶液1份,在上述色谱条件下连续进样5次,每次进样5L,测定丹酚酸B含量,
经计算,RSD=0.28%。
2.1.6重复性试验
平行制备5份供试品溶液,分别在上述同一色谱条件下,分别进样5L,测定丹酚酸B含
量,经计算,RSD=2.24%。
2.1.7稳定性试验
取供试品溶液1份,上述色谱条件下,分别于样品制备后第0、1、2、4、8、16、24h
进行测定,测定丹酚酸B含量,经计算,RSD=1.76%。
2.1.8加样回收率试验
取已知含量的丹参药材粉末,分别加入等量的丹酚酸B对照品,按上述色谱条件测定,
计算回收率,丹酚酸B为99.64%,RSD=1.09%。
见表1。
表1丹酚酸B回收率试验结果
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（略）
2.1.9含量测定
按供试品溶液制备方法,分别对10个不同来源丹参药材丹酚酸B的含量进行测定。
结果见表2。
表2不同产地丹参药材丹酚酸B的含量测定结果（略）
2.2丹参素和原儿茶醛的含量测定
2.2.1色谱条件
色谱柱：
KromasilC18（4.6mm250mm,5流动相：
甲醇-冰醋酸-水（20∶1∶80）;流
速：
1mL/min;柱温：
35℃;检测波长s=280nm。
理论板数按丹参素峰计算应不低于4
000。
在此条件下,丹参素、原儿茶醛与其他组分达到良好分离（见图2）。
2.2.2供试品溶液的制备
取丹参药材粉末（过3号筛）约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25mL,密
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塞,称定重量,超声提取1h,取出,再加热回流4h,取出,密塞,再称定重量,用水补足减失的
重量,摇匀,滤过。
取续滤液,即得。
2.2.3对照品溶液的制备
精密称取丹参素钠、原儿茶醛对照品适量,分别加甲醇溶解,并制成每1mL分别含丹
参素钠0.08mg（相当于丹参素0.07mg）、原儿茶醛0.012mg的溶液,即得。
2.2.4标准曲线的绘制
分别精密吸取丹参素钠对照品溶液（0.08mg/mL）和原儿茶醛对照品溶液（0.012mg/mL）
各3、6、9、12、15L,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。
以丹参素钠和原儿茶醛的进
样量（g）为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线并计算回归方程。
丹参素
钠Y=-7.1472+406.353X,r=0.9991;原儿茶醛Y=-0.7727+4943.475X,r=0.9992。
结果表
明,丹参素钠在0.24～1.2g范围内呈线性关系;原儿茶醛在0.036～0.18g范围内呈线性
关系。
2.2.5精密度试验
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取供试品溶液1份,在上述色谱条件下连续进样5次,每次进样5L,测定丹参素、原儿
茶醛含量,经计算,丹参素的RSD=1.26%,原儿茶醛的RSD=0.86%,二者之和的
RSD=1.13%。
2.2.6重复性试验
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平行制备5份供试品溶液,分别在上述同一色谱条件下,分别进样5L,测定丹参素、原
儿茶醛含量,经计算,丹参素的RSD=2.60%,原儿茶醛的RSD=0.66%,二者之和的
RSD=2.20%。
2.2.7稳定性试验
取供试品溶液1份,在上述色谱条件下,分别于样品制备后0、1、2、4、8、16、24h
进行测定,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的RSD=0.58%,原儿茶醛的
RSD=1.47%,二者之和的RSD=0.58%。
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2.2.8加样回收率试验
取已知含量的丹参药材粉末,分别加入等量的丹参素钠、原儿茶醛对照品,按上述色谱
条件测定,二者回收率分别为98.94%和98.96%,RSD分别为1.49%和1.66%（见表3、表
4）。
表3丹参素钠回收率试验结果（略）表4原儿茶醛回收率试验结果（略）
2.2.9含量测定
按供试品溶液制备方法,分别对10个不同来源丹参药材中的丹参素、原儿茶醛的含量
进行测定。
结果见表5。
表5不同来源丹参药材中丹参素、原儿茶醛的含量测定结果
（略）
3讨论
在丹酚酸B含量测定中,曾经试用过甲醇-乙腈-甲酸-水不同配比的流动相,结果正文采
用的流动相配比分离效果最好,所以最终选择其作为流动相。
试验过程中曾对供试品的
提取溶媒、溶媒用量、提取方法、提取时间等因素进行了考察,结果表明,正文所列的供
试品溶液制备方法为各因素最佳组合。
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