《降纤酶药品标准》word版.docx

《降纤酶药品标准》word版.docx

《《降纤酶药品标准》word版.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《降纤酶药品标准》word版.docx（9页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

《降纤酶药品标准》word版

国家药品监督管理局

国家药品标准

WS1-XG-031-2000

___________________________________________________________________________________________

降纤酶

Jiangxianme

                                Defibrase                                        

 本品系长白山白眉蝮蛇[Agkistrodonhalys（ussriensisEmelianor）]或尖吻蝮蛇[Agkistrodonacutus（Guenther）]蛇毒中提取的蛋白水解酶，每1mg蛋白含降纤酶效价不得少于1200单位。

【性状】本品为白色非结晶状粉末，有引湿性。

 本品易溶于水。

【鉴别】

（1）取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液。

取人-枸橼酸血浆[取枸橼酸钠38g，加水1000ml溶解，按枸橼酸钠溶液-人血（1:

9）比例混合，3000转/min离心30分钟。

取上清液分装成每支1ml，冷冻干燥，使用前加水1ml，摇匀，三小时内使用]0.3ml，加400IU/ml肝素钠溶液0.05ml，混匀，加入供试品溶液0.05ml，37℃保温，1分钟内，血浆应凝固，加入1％氯醋酸溶液1ml，振荡，凝块全部溶解，呈澄清透明溶液。

（2）取上述供试品溶液0.2ml，加L-BAPA液[取盐酸苯酰-L-精氨酰-P-硝基苯胺（Benzoyl-L-Argi-nyl-P-NitroanilineHydrochloride）5mg，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.2）（取三羟基甲基氨基甲烷18.17g与氯化钠0.8g，加水800ml溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.2，加水至1000ml）5ml，溶解]0.2ml，置37℃保温30分钟，溶液呈黄色。

（3）取本品适量，照SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（附一）测定，其主成分分子量应为36000（±5000）。

【检查】纯度  

（1）取本品适量（约相当于蛋白量10μg），照SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定（附一），在分子量31000～41000以外不得出现其他电泳带。

（2）照高效液相色谱法测定（中国药典2000年版二部附录ⅤD）。

色谱条件与系统适用性试验  用凝胶色谱柱（如BiosepS20007.8mm×300mm，5μm）；以0.2mol/L磷酸钠缓冲液（pH6.8）（取磷酸氢二钠175.4g与磷酸二氢钠79.56g，溶解于900ml水中，调节pH值至6.8，加水至5000ml）为流动相；流速为每分钟1ml；检测波长为280nm。

理论板数按降纤酶峰计算应不得低于3000。

测定法  取本品用流动相稀释成每1ml中含1mg的溶液作为供试品溶液，取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，供试品中主峰相对百分含量不得低于90.0％。

出血毒  取本品，用氯化钠注射液制成每1ml中含100单位的溶液作为供试品溶液。

取体重18～22g的小白鼠5只，背部皮下注射供试品溶液0.2ml，注射后24小时处死动物，剥皮观察，小鼠背部注射部位不得有出血现象。

神经毒  取本品，用氯化钠注射液制成每1ml中含75单位的溶液作为供试品溶液。

取体重为300～500g的鸽3只，每1kg体重静脉注射供试品溶液0.5ml，观察24小时，动物不得出现抽搐、死亡，如3只鸽中有一只出现抽搐或死亡，应另取鸽5只复试，均不得出现死亡。

___________________________________________________________________________________________

国家药品监督管理局发布国家药典委员会审定

16-88  

【效价测定】酶活力  以每1mg蛋白含酶活力计。

标准品溶液的制备  取降纤酶标准品，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.4）制成每1ml中含20、10、5、2.5单位的溶液。

供试品溶液的制备  取本品适量，用三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.4）（取三羟甲基氨基甲烷2.42g与氯化钠0.585g，加水适量使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，加水稀释至500ml）制成标准曲线范围内浓度的溶液。

测定法  取试管（1cm×10cm）4支，各精密加入0.4％纤维蛋白原溶液[取纤维蛋白原，用上述三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.4）制成0.4％可凝蛋白溶液]0.2ml，置（37±0.5）℃水浴中保温2分钟，依次精密量取4种浓度的标准品溶液各0.2ml，迅速加入上述各试管中，立即摇匀，同时记时，于（37±0.5）℃水浴中观察纤维蛋白原的初凝时间，每种浓度测5次，求平均值（5次测定最大与最小值之差不得超过平均值的10％，否则重测）。

在双对数坐标纸上，以标准品单位数（U）为横坐标，初凝时间为纵坐标计算回归方程（相关系数应大于0.99）。

取供试品溶液按上法测定，用直线回归方程求得每1mg的单位数。

蛋白含量  取本品适量，加水制成每1ml中含0.15mg蛋白的溶液作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1.0ml，照附件“福林酚测定法”测定，计算每1mg中蛋白含量。

【类别】蛋白水解酶。

【贮藏】遮光，密闭，在10℃下保存。

【制剂】注射用降纤酶

附一                               

     SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测降纤酶分子量及纯度

一、试剂            

1．丙烯酰胺-双丙烯酰胺贮备溶液  取丙烯酰胺29.2g，双丙烯酰胺0.8g，加水溶解并稀释至100ml，过滤至棕色瓶中，4℃保存。

2．羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.8）取三羟甲基氨基甲烷18.15g，加水溶解，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至8.8，加水稀释至100ml，4℃保存。

3．羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH6.8）  取上述三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.8）适量，加水（1:

2）稀释，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至6.8，4℃保存。

4．10％十二烷基硫酸钠溶液取十二烷基硫酸钠10g，加水溶解并稀释至100ml，室温保存。

5．供试品缓冲液取水4.8ml，三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH6.8）1.2ml，甘油1.0ml，10％十二烷基硫酸钠溶液2.0ml，0.5％（W/V）溴酚蓝溶液0.5ml，β-巯基乙醇0.5ml混匀，4℃保存。

6．电极贮备液（pH8.3）  取三羟甲基氨基甲烷15g，甘氨酸72g，十二烷基硫酸钠5g，加水溶解并稀释至1000ml，4℃保存。

临用前5倍稀释。

7．10％过硫酸铵（临用前配制）            

8．固定液取三氯醋酸5g，加水200ml溶解，加入甲醇200ml，再加水至500ml。

9．染色液取考马斯亮蓝R-2500.5g，溶于200ml水中，量取甲醇200ml与冰醋酸50ml，再加水至500ml。

10．脱色液取甲醇400ml、醋酸100ml，加水至1000ml，充分混合。

11．保存液取甲醇400ml、醋酸100ml与甘油100ml，加水至1000ml，充分混合。

二、操作法          

1．凝胶的制备          

（1）分离胶的制备（12％）取水3.35ml，三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.8）2.5ml，10％十二烷基硫酸钠100μl，丙烯酰胺-双丙烯酰胺贮备液4.0ml，混匀，脱气15分钟后，再加入10％过硫酸铵溶液

16-89

50μl，四甲基乙二胺5μl，充分混匀，立即小心地倒入制胶模具中，在胶面上覆盖一层水，水平静置至胶体凝固。

（2）浓缩胶的配制  取水6.1ml，三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH6.8）2.5ml，10％十二烷基硫酸钠100μl，丙烯酰胺-双丙烯酰胺贮备液1.3ml，混匀，脱气15分钟，再加入10％过硫酸铵溶液50μl，四甲基乙二胺10μl，混匀，立即倒入去掉水层的分离胶上，插入梳子，梳子底部与分离胶的前沿距离约1cm，水平放置至胶体凝固。

2．标准品和供试品的制备          

（1）标准蛋白溶液  取标准蛋白，加供试品缓冲液制成每1μl中含1μg蛋白的标准蛋白溶液。

临用前置沸水浴中5分钟，冷却。

（2）供试品溶液  取本品适量（按蛋白含量计算），加供试品缓冲液制成每1μl中含1μg供试品溶液。

临用前置沸水浴中5分钟，冷却。

3．电泳  凝胶板制好后，各孔分别加入10μl的供试品溶液或标准蛋白溶液，倒入电极缓冲液，200伏电压下进行电泳。

当蓝色溴酚蓝接近胶板底部时，停止电泳，取下胶板。

在溴酚蓝处做标记。

4．染色和脱色          

将胶板置于固定液中，固定30分钟，再取出胶板置于染色液中，37℃染色2～3小时，然后将胶板置于脱色液中，至背景清晰（中途可换几次脱色液），将胶板置于保存液中，室温放置1小时。

5．数据处理          

（1）以标准蛋白分子量的对数为纵坐标，以迁移率为横坐标，线性回归做出标准曲线。

以样品的迁移率在标准曲线上找到相应的点，计算供试品的分子量。

（2）取胶板在凝胶扫描仪上进行扫描。

（3）将电泳胶板照相保存。

附二

过敏试验法         

本法系将一定剂量的供试品溶液注入豚鼠腹腔和静脉，在规定的时间内观察动物的过敏反应情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。

供试动物  健康豚鼠，雌雄均可，体重250～350g，试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养，做过本试验的动物不得重复使用。

供试溶液的配制  除另有规定外，用氯化钠注射液按各药品项下规定浓度制成供试品溶液。

检查法  取上述豚鼠6只，间日腹腔注射供试品溶液0.5ml，连续3次，然后分成两组，每组3只，分别在第一次注射后第14日及第21日静脉注射供试品溶液1.0ml。

结果判断静脉注射后15分钟内均不得出现过敏性反应，如有竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳嗽3声等现象中的两种以上者；或罗音、抽搐、虚脱或死亡现象之一者应判为阳性。

附三

                       福林酚测定法               

试剂  碱性铜试液  取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使其溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使其溶解，将两液混合作为乙液。

临用前，合并甲、乙两液，并加水至500ml。

操作法  对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。

供试品溶液的制备  照各品种项下规定的方法制备。

标准曲线的制备  精密量取对照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分别置具塞

16-90

试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液（取福林试液中的贮备液1→16）4.0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴10分钟，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录ⅣB），在650nm的波长处测定吸收度；以0号管作为空白。

以对照品溶液浓度与相应当吸收度计算回归方程。

测定法  精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性铜试液”起，依法测定，从回归方程计算多肽的含量，并乘以稀释倍数，即得。

16-91

国家药品监督管理局

国家药品标准

WS1-XG-032-2000

___________________________________________________________________________________________

注射用降纤酶

ZhusheyongJiangxianmei                                

DefibraseforInjection 

本品为降纤酶加适量稳定剂和赋形剂的无菌冻干品。

其效价应为标示量的85.0％～120.0％。

【性状】本品为白色或类白色冻干块状物，有引湿性，易溶于水。

【鉴别】取本品1支，加水1ml溶解，取0.2ml，照降纤酶项下的鉴别

（1）、

（2）项试验，显相同的反应。

【检查】酸度  取本品2支，分别加水2ml溶解后，混匀，依法测定（中国药典2000年版二部附录ⅥH），pH值应为5.5～7.0。

溶液的澄清度与颜色  取本品，加注射用水2ml溶解后，溶液应澄清无色。

干燥失重  取本品，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4小时，减失重量不得过5％（中国药典2000年版二部附录ⅧL）。

无菌  取本品，加注射用水2ml溶解后，依法检查（中国药典2000年版二部附录ⅪH），应符合规定。

细菌内毒素  取本品1支，依法检查（中国药典2000年版二部附录ⅪE），每支含细菌内毒素的量应小于10EU。

过敏试验  取本品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含5单位的溶液，作为致敏液与供试品溶液。

照过敏试验法检查（附），应符合规定。

异常毒性  取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含1单位的溶液，依法检查（中国药典2000年版二部附录ⅪC），按静脉注射法给药，应符合规定。

出血毒  取本品，用氯化钠注射液制成每1ml中含25单位的溶液作为供试品溶液，照降纤酶项下的方法试验，应符合规定。

其他  应符合注射剂项下有关的各项规定（中国药典2000年版二部附录ⅠB）。

【效价测定】取本品3支，分别按标示量加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.4）溶解并稀释成标准曲线范围内浓度，照降纤酶项下的效价测定方法测定。

每支效价均应符合规定，如有1支不符合规定，另取3支复试，均应符合规定。

【类别】同降纤酶。

【规格】

（1）5单位

（2）10单位            

【贮藏】遮光、密封，在10℃以下保存。

【有效期】2年  

___________________________________________________________________________________________

国家药品监督管理局发布国家药典委员会审定

16-92  

注射用降纤酶说明书

【药品名称】

通用名称：

注射用降纤酶

曾用名:

英文名：

DefibraseforInjection

汉语拼音：

ZhusheyongJianxianmei 

【性状】本品为白色或类白色冻干块状物，有引湿性，易溶于水。

【药理毒理】蛋白水解酶。

能溶解血栓，抑制血栓形成，改善微循环。

【适应症】

1.急性脑梗死，包括脑血栓、脑栓的预防，短暂性脑缺血发作（TIA）。

2.心肌梗死再复发的预防。

3.四肢血管病，包括股动脉栓塞，血栓闭塞性脉管炎，雷诺病。

4.血液呈高粘状态、高凝状态、血栓前状态。

5.突发性耳聋。

6.肺栓塞。

【用法用量】

临用前，用注射用水或0.9%氯化钠溶液适量使之溶解，加入至无菌生理盐水100ml～250ml中，静脉点滴1小时以上。

急性发作期：

一次10单位，一日1次，连用3～4日。

非急性发作期：

首次10单位，维持量5～10单位，一日或隔日1次，二周为一疗程。

【不良反应】

个别病人用药后可能出现少量淤斑、鼻血或牙龈出血、或有一过性GOT或GPT轻度上升，停药后自行消失。

【禁忌】

1.具有出血疾病史者禁用。

2.手术后不久者禁用。

3.有出血倾向者禁用。

4.正在使用具有抗凝作用及抑制血小板功能药物（如：

阿司匹林）者禁用。

5.正在使用具有抗纤溶作用制剂者禁用。

6.重度肝或肾功能障碍及其它如乳头肌断裂、心室中隔穿孔、心源性休克，多脏器功能衰竭症者禁用。

7.对本制剂有过敏史者禁用。

【注意事项】

1.按专业医生处方购买和使用。

2.本品如有外观异常或瓶子破裂、过期失效等情况禁止使用。

3.本品必须用足够量的输液稀释，并立即使用。

4.注意静脉点滴速度（点滴速度过快时，患者易有胸痛、心悸等不适症状）。

5.本制剂具有降低纤维蛋白原（fibrinogen）的作用，用药后可能有出血或止血延缓现象。

因此，治疗前及给药期间应对患者进行血纤维蛋白原和其它出血及凝血功能的检查，并密切注意临床症状。

给药治疗期间一旦出现出血和可疑出血时，应中止给药，并采取输血或其它措施。

6.如患者动脉或深部静脉损伤时，该药有可能引起血肿。

因此，使用本制剂后，临床应避免进行如

16-93

星状神经节封闭、动脉或深部静脉等的穿刺检查或治疗。

对于浅表静脉穿刺部位有止血延缓现象发生时，应采用压迫止血法。

7.下列患者慎用

（1）有药物过敏史者慎用。

（2）有消化道溃疡病史者慎用。

（3）患有脑血栓后遗症者慎用。

（4）70岁以上高龄患者慎用。

【孕妇及哺乳期妇女用药】

慎用。

【药物相互作用】

使用本品应避免与水杨酸类药物（如阿司匹林）合用。

抗凝血药可加强本品作用，引起意外出血；抗纤溶药可抵消本品作用，禁止联用。

【规格】

（1）5单位

（2）10单位

【贮藏】

遮光、密封，10℃以下保存。

【包装】

【有效期】

2年

【批准文号】

【生产单位】

企业名称：

地址：

邮政编码：

电话号码：

传真号码：

网址:

16-94

欢迎您下载我们的文档，后面内容直接删除就行

资料可以编辑修改使用

资料可以编辑修改使用

致力于合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，

打造全网一站式需求

主要经营：

网络软件设计、图文设计制作、发布广告等，

公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！

感谢您下载我们文档