电镜标本制作原理及方法.docx
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电镜标本制作原理及方法
电镜标本制作原理及方法
电镜标本制作原理及方法
一、相关理论
A1型
1.透射电镜最大放大倍数是:
A1000倍
B2000倍
C5万倍
D100万倍
E50万倍
答:
C易
X型
2.透射电镜取材应注意
A动作快捷
B组织体积小(1mm×1mm×1mm)
C固定迅速
D组织损伤小
E冷环境下操作(0-4℃)
答案:
ABCDE中
二、专业知识
A1型
3.透射电镜标本超薄,切片厚为:
A1mm
B1μm
C0.5μm
D0.3μm
E0.1μm
答案:
E中
X型
4.透射电镜标本常用固定液是:
A多聚甲醛
B戊二醛
C锇酸
D丙酮
E乙醇
答案:
BC易
三、实践能力
A2型
5.透射电镜标本制备超薄切片最常用的包埋剂是:
A火棉胶
B蜜蜡
C石蜡
D明胶
E环氧树脂
答案:
E中
A3型
6.透射电镜超薄切片技术如同石蜡切片都需要切片支撑物,所不同是石蜡切片的支撑物为载玻片,超薄切片为载网,在其上覆盖支持膜
问题1超薄切片载网最常用的是:
A铁网
B钢网
C锡网
D铜网
E银网
答案:
D难
问题2最常用的支持膜有:
A环氧树脂膜
B明胶
C火棉胶膜
D甲基丙烯酸甲酯膜
E甲基丙烯酸乙二醇膜
答案:
C难
问题3载网上覆盖支持膜的厚度要求是:
A4-7μm
B10-20μm
C0.2-0.5μm
D30-50nm
E60nm
答案:
B难
A4型
7.透射电镜的样品制备方法,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。
超薄切片的制备流程与石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋、切片、染色等步骤。
问题1透射电镜的样品要求
A新鲜标本组织
B陈旧标本组织
C石蜡标本块
D腐败标本
E冷冻标本
答案:
A易
问题2对动物组织,如脑、动脉、脊髓等最好采用的固定方法为:
A浸泡法
B蒸汽固定法
C微波固定法
D冷固定法
E灌流固定法
答案:
E难
问题3超薄切片技术通常采用双固定法,称谓前固定和后固定,后固定液为:
A甲醛
B甲醇
C乙醇
D锇酸
E戊二醛
答案:
D中
问题4如当时不能完成浸透、包埋步骤时,标本应保存在
A50%脱水剂中
B60%脱水剂中
C70%脱水剂中
D95%脱水剂中
E100%脱水剂中
答案:
C难
X型
8.超薄切片,为了保证包埋介质完全渗入组织内部,必须将组织内水分驱除干净,最常用的脱水剂是乙醇和丙酮,为防止细胞收缩变形,梯度脱水步骤应为:
A50%乙醇或丙酮
B70%乙醇或丙酮
C80%乙醇或丙酮
D90%乙醇或丙酮
E100%乙醇或丙酮(二次)
答案:
ABCDE易
9.脱水操作中应注意的问题
A脱水要彻底
B脱水剂要纯
C脱水剂中可加吸水剂(如无水硫酸铜)
D更换脱水步骤时,动作要迅速
E避免样品干燥出现气泡
答案:
ABCDE中
10.超薄切片常用的染色剂是:
A巴氏染色
B苏木素染色
C醋酸铀
D硝酸银
E柠檬酸铅
答案:
CE中
多项问题
11.透射电镜标本制备中,浸透就是利用包埋剂渗入到组织内部取代脱水剂,这种包埋剂在单体状态时为液体,能渗入组织内,当加入某些催化剂,经加温骤合成固定,便于超薄切片。
问题1理想的包埋剂应具有什么特点:
A粘度低,容易渗入组织
B骤合均匀而充分,骤合前后体积变化小
C具有良好的切割性
D能耐受电子轰击,高温下不变形
E对细胞成份抽提少,微细结构保存良好
F电镜的高倍放大下,本身不显示任何结构
G材料来源丰富,易得,价格低廉,对人体无害
答案:
ABCDFG难
问题2常用环氧树脂包埋剂的性质
A环氧树脂是一类高分子骤合物
B分子中含有两种反应基团,即环氧基和羟基
C加入酸酐类时,树脂分子中的羟基能与酸酐结合
D形成分子间横桥连接
E横桥式连接作用的交联剂叫做硬化剂
F硬化剂有十二烷基琥珀酸酐(DDSA)
G环氧树脂包埋剂骤合前后体积变化小
H耐电子束轰击
答案:
ABCDEFGH难
问题3包埋操作中,应注意什么
A所有试剂要防潮,保存干燥瓶中
B所有器具要烘干
C试剂要搅拌均匀,不能有气泡
D动作轻巧
E骤合时温度要控制适宜
F盛放包埋剂的器具及时用丙酮清洗干净
G皮肤不接触包埋剂
答案:
ABCDEFG中
12.超薄切片是透射电镜样品制备流程中,关键步骤之一,必须把标本切成厚度小于0.1μm以下的薄片才适用,常用超薄切片厚度是50nm。
问题1超薄切片前的准备工作
A手工修包埋块(粗修)
B实体显微镜修块暴露组织
C包埋块修成锥体形
D制刀(玻璃刀和钻石刀)
E载网(100,200,300目)
F支持膜制备(厚度10-20nm)
G半薄切片
答案:
ABCDEFG难
问题2半薄切片制备及意义
A半薄切片厚度为0.2-2μm
B美蓝染色
C显微镜下定位病变
D细修多余组织
E便于光镜、电镜对病变对比观察
F便于保留有用标本
答案:
ABCDEF难
问题3超薄切片步骤包括
A安装包埋块
B安装玻璃刀
C调节刀与组织块的距离
D调节水槽液面高度与灯光位置
E调节加热电流及切片速度
F切片
G捞取切片至载网上
答案:
ABCDEFG难
13.超薄切片技术虽然已在医学、生物学等领域中得到了广泛的应用,但它普及性、广泛性还有不足,更多的人还掌握的不好,常会在制备过程出现一些切片缺陷,这些缺陷原因是复杂的、相互关联的。
问题1经常出现的缺陷有
A超薄切片破碎
B超薄切片颤痕
C超薄切片刀痕
D超薄切片空洞
E超薄切片厚度不一
F超薄切片不成带
答案:
ABCDEF难
问题2如何解决超薄切片,破碎和颤痕问题
A标本彻底脱水
B包埋剂去除气泡和水分
C调整刀的间隙角和切速
D更换新刀
E调包埋块伸出的长度
F调整包埋剂配方
答案:
ABCDEF难
问题3如何解决超薄切片空洞,厚度不一,切片不成带问题
A除去包埋剂的气泡,使渗透完全
B更换新刀
C包埋剂搅拌均匀
D消除震动
E重新修块
F修去硬质材料
答案:
ABCDEF难