3.生理条件下（pH7.0左右），蛋白质分子中的Arg侧链和Lys__侧链几乎完全带正电荷，但His侧链带部分正电荷。
4.测定蛋白质紫外吸收的波长，一般在280nm，要由于蛋白质中存在着Phe、Trp、Tyr氨基酸残基侧链基团。
5.皮肤遇茚三酮试剂变成蓝紫色，是因为皮肤中含有蛋白质所致。
6.Lys的pk1（
）=2.18，pk2（
）=8.95，pk3（
）=10.53，其pI为9.74。
在pH=5.0的溶液中电泳，Lys向负极移动。
7.实验室常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基与中性甲醛反应，然后用碱（NaOH）来滴定NH3+/氨基上放出的H。
8.一个带负电荷的氨基酸可牢固地结合到阴离子交换树脂上，因此需要一种比原来缓冲液pH值小和离子强度高的缓冲液，才能将此氨基酸洗脱下来。
9.决定多肽或蛋白质分子空间构像能否稳定存在，以及以什么形式存在的主要因素是由
一级结构来决定的。
10.测定蛋白质中二硫键位置的经典方法是___对角线电泳。
11.从混合蛋白质中分离特定组分蛋白质的主要原理是根据它们之间的溶解度、分子量/分子大小、带电性质、吸附性质、生物亲和力。
12.蛋白质多肽链主链构象的结构单元包括__α-螺旋__、_β-折叠__、__β-转角__等，维系蛋白质二级结构的主要作用力是__氢__键。
13.蛋白质的
—螺旋结构中，3.6个氨基酸残基旋转一周，每个氨基酸沿纵轴上升的高度为0.15nm，旋转100度。
14.交换层析分离蛋白质是利用了蛋白质的带电/解离性质。
阴离子交换层析在层析柱内填充的交换剂上带正电荷，可吸引带负电荷的蛋白质，然后用带负电荷的溶液洗柱将蛋白质洗脱下来。
二、选择题
1.区分极性氨基酸和非极性氨基酸是根据（C）
A.所含的羧基和氨基的极性 B.所含氨基和羧基的数目
C.所含的R基团为极性或非极性 D.脂肪族氨基酸为极性氨基
2.下列哪一种氨基酸不属于人体必需氨基酸（D）
A.亮氨酸 B.异亮氨酸C.苯丙氨酸 D.酪氨酸
3.下列哪一组氨基酸为酸性氨基酸：
（D）
A.精氨酸，赖氨酸 B.谷氨酸，谷氨酰胺
C.组氨酸，精氨酸 D.谷氨酸，天冬氨酸
4.含硫的必需氨基酸是（B）
A.半胱氨酸B.蛋氨酸/甲硫氨酸C.苏氨酸D.亮氨酸
5.芳香族必需氨基酸包括（D）
A.蛋氨酸B.酪氨酸C.亮氨酸D.苯丙氨酸
6.含四个氮原子的氨基酸是（B）
A.赖氨酸B.精氨酸C.酪氨酸D.色氨酸
7.蛋白质中不存在的氨基酸是下列中的哪一种？
（D）
A.赖氨酸B.羟赖氨酸C.酪氨酸D.鸟氨酸
8.在蛋白质中不是L-氨基酸的是（B）
A.苏氨酸B.甘氨酸C.半胱氨酸D.谷氨酰胺
9.谷氨酸的PK值为2.19,4.25,9.76;赖氨酸的PK值为2.18,8.95,10.53;则它们的PI值分别为（B）
A.2.19和10.53B.3.22和9.74C.6.96和5.56D.5.93和6.36
10.从赖氨酸中分离出谷氨酸的可能性最小的方法是（D）
A.纸层析B.阳离子交换层析C.电泳D.葡萄糖凝胶过滤
11.用于确定多肽中N-末端氨基酸的是（C）
A.Sanger试剂B.Edman试剂C.两者均可D.两者均不可
12.有一蛋白质水解物,在PH6时,用阳离子交换柱层析,第一个被洗脱的氨基酸是（C）
A.Val（PI5.96）B.Lys（PI9.74）C.Asp（PI2.77）D.Arg（PI10.76）
13.下列关于离子交换树脂的叙述哪一个是不正确的？
（D）
A.是人工合成的不溶于水的高分子聚合物B.阴离子交换树脂可交换的离子是阴离子C.有阳离子交换树脂和阴离子交换树脂两类D.阳离子交换树脂可交换的离子是阴离子
14.可使二硫键氧化断裂的试剂是（C）
A.尿素B.巯基乙醇C.过甲酸D.SDS
15.Sanger试剂是（B）
A.苯异硫氰酸酯B.2,4—二硝基氟苯C.丹磺酰氯D.β—巯基乙醇
16.下列哪种氨基酸可使肽链之间形成共价交联结构（D）
A.MetB.SerC.GluD.Cys
17.以下氨基酸中哪一种可能会改变多肽链的方向和阻断a－螺旋（D）
A.PheB.CysC.TrpD.Pro
18.蛋白质分子中α螺旋的特点是（C）
A.肽键平面完全伸展B.靠盐键维持稳定C.多为右手螺旋D.螺旋方向与长轴垂直
19.为从组织提取液中沉淀出活性蛋白最有可能的方法是加入（A）
A.硫酸铵B.三氯乙酸C.NH4ClD.氯化汞
20.有一个肽用胰蛋白酶水解得：
②H-Ser-Ala-Arg-OH③H-Gly-Tyr-OH①H-Met-Glu-Leu-Lys-OH三组片段，用BrCN处理得：
④H-Ser-Ala-Arg-Met-OH⑤H-Glu-Leu-Lys-Gly-Tyr-OH两组片段，按肽谱重叠法推导出该九肽的序列应为（C）
A.3+2+1B.5+4C.2+1+3D.2+3+1E.1+2+3
21.蛋白质变性后，不发生下列哪种改变（C）
A.生物活性丧失 B.易被降解 C.一级结构改变 D.空间结构改变E.次级键断裂
22.关于蛋白质三级结构的描述，下列哪项是正确的（A）
A.疏水基团位于分子内部B.亲水基团位于分子内部
C.羧基多位于分子内部D.二硫键位于分子表面
23.下列蛋白质通过凝胶过滤层析柱时，最先被洗脱的是（D）
A.牛胰岛素（分子量5700）B.肌红蛋白（分子量16900）
C.牛β乳球蛋白（分子量35000）D.马肝过氧化物酶（分子量247500）
24.镰刀型贫血病患者，Hb分子中氨基酸的替换及位置是（D）
A.α链第六位Val换成GluB.β链第六位Val换成Glu
C.α链第六位Glu换成ValD.β链第六位Glu换成Val
三、名词解释
1.α-氨基酸：
是含有氨基的羧酸，氨基连接在α-碳上。
是蛋白质的构件分子。
2.氨基酸的等电点：
在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性，在电场中既不向阳极也不向阴极移动。
此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。
3.层析：
按照混合物在移动相（可以是气体或者液体）和固定相（可以是液体或固体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。
4.蛋白质的沉淀：
如果加入适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层（消除相同电荷，除去水膜），蛋白质胶体溶液就不再稳定并将产生沉淀。
5.蛋白质的变性：
蛋白质在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。
6.结构域：
指多肽链在二级结构或超二级结构的基础上形成三级结构的局部折叠区，它是相对独立的紧密球状实体，称为结构域。
四、问答题
某八肽的氨基酸组成是2Lys,Asp,Tyr,Phe,Gly,Ser和Ala。
此八肽与FDNB反应、酸水解后释放出DNP—Ala。
用胰蛋白酶水解该八肽，得到两个三肽及一个二肽，其三肽的氨基酸组成分别为Lys,Ala,Ser和Gly,Phe,Lys。
用胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）水解该八肽，释放出游离的Asp及一个四肽和一个三肽，四肽的氨基酸组成是Lys,Ser,Phe,Ala,三肽与FDNB反应后，经酸水解释放出DNP—Gly。
根据上述结果分析，写出该八肽的氨基酸排列顺序，并简述分析过程。
解答：
Ala-Ser-Lys-Phe-Gly-Lys-Tyr-Asp
生化测试二：
酶化学
一、填空题
1.酶的活性中心有结合部位和催化部位两个功能部位，其中结合部位直接与底物结合，决定酶的专一性，催化部位是发生化学变化的部位，决定催化反应的性质。
2.温度对酶活性的影响有以下两个方面，一方面随着温度的升高酶活性增加，另一方面过高的温度会使酶蛋白变性。
3.酶活力是指酶催化一定化学反应的能力，一般用单位时间内酶催化反应产物的增加量表示。
4.全酶有酶蛋白和辅助因子组成，在催化反应时，二者所起的作用不同，其中酶蛋白决定专一性和效率，辅助因子起传递电子、原子或化学基团的作用。
5.酶活性的快速调节方式包括变构调节和可逆修饰。
6.酶作为生物催化剂的特点为专一性、高效性、催化条件温和、活性可调节。
二、选择题
1.竞争性可逆抑制剂的抑制程度与下列哪种因素无关（A）
A.作用时间B.抑制剂浓度C.底物浓度D.酶与抑制剂亲和力的大小
E.酶与底物亲和力的大小
2.关于变构酶下列哪一种说法是错的（C）
A.变构效应剂多为酶的底物或产物B.存在催化与调节两个活性部位
C.反应符合米-曼氏方程式D.反应曲线呈S形E.一般由多个亚基组成
3.酶的竞争性可逆抑制剂可以使（C）
A.Vmax减小，Km减小B.Vmax增加，Km增加C.Vmax不变，Km增加
D.Vmax不变，Km减小E.Vmax减小，Km增加
4.酶的活化和去活化过程中，酶的磷酸化和去磷酸化的位点通常在酶的哪一种氨基酸残基上（D）
A.天冬氨酸B.脯氨酸C.赖氨酸D.丝氨酸E甘氨酸
5.酶的抑制剂（B）
A.由于引起酶蛋白变性而使酶活性下降B.使酶活性下降而不引起酶蛋白变性
C.只引起酶蛋白变性而可能对酶活性无影响D.一般为强酸，强碱E.都和底物结构相似
6.同工酶的叙述，正确的是（C）
A.结构相同来源不同B.由不同亚基组成
C.电泳迁移率往往不同D.对同一底物具有不同专一性
7.丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响属于（C）
A反馈抑制B底物抑制C竞争性可逆抑制
D非竞争性可逆抑制E反竞争性可逆抑制
8.关于酶的必需基团的错误描述是（E）
A.可催化底物发生化学反应B.可与底物结合C.可维持酶活性中心的结构
D.可存在于酶的活性中心以外E.只存在于酶的活性中心
9.某一符合米曼氏方程的酶,当[S]=2Km时,其反应速度V等于（B）
A.VmaxB.2/3VmaxC.3/2VmaxD.2VmaxE.1/2Vmax
10．酶的非竞争性抑制作用的特点是（D）
A.抑制剂与酶的活性中心结构相似B.抑制剂与酶作用的底物结构相似
C.抑制作用强弱与抑制剂浓度无关D.抑制作用不受底物浓度的影响
E.动力学曲线中Vmax不变,Km值变小
11．关于修饰酶的错误描述是（C）
A.酶分子可发生可逆的共价修饰B.这种修饰可引起其活性改变
C.修饰反应可在各种催化剂催化下进行D.磷酸化和脱磷酸化是常见的修饰反应
E.绝大多数修饰酶都具有无活性和有活性两种形式
12．有关全酶的描述下列哪一项不正确（D）
A.全酶由酶蛋白和辅助因子组成B.通常一种酶蛋白和辅助因子结合
C.而一种辅助因子则可与不同的酶蛋白结合D.酶促反应的特异性取决于辅助因子
E.酶促反应的高效率取决于酶蛋白
三、是非题
1.Km是酶的特征常数，只与酶的性质有关，与酶的底物无关。
（×）
2.酶的最适PH值是一个常数，每一个酶只有一个确定的最适PH值。
（×）
3.金属离子作为酶的激活剂，有的可以相互取代，有的可以相互拮抗。
（√）
4.竞争性可逆抑制剂一定与酶的底物结合在酶的同一部位。
（×）
5.从鼠脑分离的己糖激酶可作用于葡萄糖（Km=6X10-6mol/l）或果糖（Km=2X10-3mol/l），则该酶对果糖的亲和力更高。
（×）
6.判断一个纯化酶的方法优劣的主要依据是酶的比活力和总活力。
（√）
四、名词解释
1.酶的变构调节酶在效应物的作用下发生构象改变，同时引起酶的活性变化的调节方
式。
是一种可逆的快速调节方式。
2.酶的活性中心酶分子中少数几个氨基酸残基组成的特定空间结构，包括结合部位和
催化部位。
3.酶的活力单位是指规定条件（最适条件）下一定时间内催化完成一定化学反应量所需的酶量。
是衡量酶活力大小的计量单位。
有国际酶学会标准单位和习惯单位。
4.酶的比活力每单位（一般是mg）蛋白质中的酶活力单位数（酶单位/mg蛋白），可以表示酶的纯度。
五、计算题
焦磷酸酶可以催化焦磷酸水解成磷酸，它的分子量为120000，由6个相同的亚基组成，纯酶的Vmax为2800单位/毫克酶。
一个活力单位规定为：
在标准的测定条件下，37℃，15分钟内水解10微克焦磷酸所需的酶量。
问：
1）毫克酶在每秒钟内水解了多少摩尔底物？
2）每毫克酶中有多少摩尔的活性中心？
（假定每个亚基上有一个活性中心）
3）酶的转换数为多少？
解：
1）根据Vmax为2800单位/毫克酶以及活力单位规定可得：
2800×10÷（15×60×178）=0.175μmol=1.75×10-10mol
2）根据酶的分子量为120000，由6个相同的亚基组成，并假定每个亚基上有一个活性中心，可得：
6×（1÷120000）=0.00005mmol=5×10-8mol
3）转换数定义为：
每秒钟每摩尔酶（活性中心）催化中心转换底物的摩尔数。
则：
Kcat=（1.75×10-10）÷（5×10-8）=3.5×10-3
生化测试三：
核酸化学
一、填空题
1．碱基和核糖构成核苷，核苷和磷酸构成核苷酸，核苷酸残基之间以3’-5’磷酸二酯键
相连。
2．tRNA的二级结构呈三叶草型，三级结构呈倒L型。
3．DNA的稀盐溶液加热至某个特定温度，可使其物化性质发生很大改变，如紫外吸收增加和黏度降低，这种现象叫做变性。
其原因是由于DNA的空间结构被破坏,内部碱基暴露。
4．Watson－Crick提出的双螺旋结构中，核糖和磷酸处于分子外边，碱基处于分子中央，螺旋每上升一圈bp数为10。
5．mRNA分子指导蛋白质合成，tRNA分子用作蛋白质合成中活化氨基酸的载体。
6．双链DNA中若G、C含量多，则Tm值高。
7．核酸在260nm附近有强吸收，这是由于碱基环的共轭双键具有紫外吸收的能力_。
二、选择题
1．DNA和RNA两类核酸分类的主要化学依据是（D）
A.空间结构不同B.所含碱基不同C.核苷酸之间连接方式不同
D.所含戊糖不同E.在细胞存在的部位不同
2．DNA受热变性，下列叙述正确的是（D）
A.在260nm波长处的吸光度下降B.多核苷酸键断裂成寡核苷酸键
C.碱基对可形成共价连接D.加入互补RNA链并复性，可形成DNA-RNA杂交分子
3．在一个DNA分子中，若A占摩尔比为32.8%，则G摩尔比为（C）
A.67.2%B.32.8%C.17.2%D.65.6%E.16.4%
4．对DNA片段作物理图谱分析，需要用（E）
A.核酸外切酶B.DnaseIC.DNA连接酶
D.DNA聚合酶IE.限制性内切酶
5．单链DNA：
5’—pCpGpGpTpA—3’，能与下列哪一种RNA单链分子进行杂交？
（C）
A.5’—pGpCpCpTpA—3’B.5’—pGpCpCpApU—3’C.5’—pUpApCpCpG—3’D.5’—pTpApGpGpC—3’E.5’—pTpUpCpCpG—3’
6．核酶（ribozgme）的底物是（B）
A.DNA B.RNA C.核糖体 D.细胞核膜 E.核蛋白
三、是非题
1．生物信息的流向只能由DNA→RNA，而决不能由RNA→DNA。
（×）
2．在生物体内存在的DNA分子多为负超螺旋。
（√）
3．若双链DNA中的一条链碱基顺序为pCpTpGpGpApC，则另一条链的顺序为pGpApCpCpTpG。
（×）
4．核酸内切酶是指能切断磷酸二酯键的核酸酶。
（×）
5．核苷中碱基和戊糖的连接一般为C-C糖苷键。
（×）
6．限制性内切酶是特异核酸碱基序列专一性水解酶。
（√）
7．DNA中碱基摩尔比规律（A=T；G=C）仅适用于双链DNA，而不适用于单链DNA。
（√）
8．RNA的局部螺旋区中，两条链之间的方向也是反向平行的。
（√）
9．DNA是生物界中唯一的遗传物质。
（×）
10．在一个生物体不同组织中的DNA，其碱基组成不同。
（×）
11．DNA双螺旋中A、T之间有3个氢键，G、C之间有2个氢键。
（×）
四、名词解释
1.分子杂交：
两条来源不同但有碱基互补关系的DNA单链分子，或DNA单链分子与RNA分子，去掉变性条件后互补的区段能够退火复性形成双链DNA分子或DNA/RNA杂交双链分子的过程。
2.增色效应：
天然DNA分子在热变性条件下，双螺旋结构破坏，碱基暴露，在260nm波
长处的吸收明显增加，此现象称为增色效应。
3.Tm值：
当50%的DNA变性时的温度称为该DNA的解链温度，即增色效应达到一半
时的温度。
4.DNA的变性：
是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂，变成单链结构的过程。
5.DNA复性：
变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋
结构，其物理性质和生物活性随之恢复的过程。
6.超螺旋：
超螺旋是指双螺旋进一步扭曲或再螺旋的构象。
包括正超螺旋（变紧，过旋）
和负超螺旋（变松，欠旋）。
生化测试四：
生物氧化
一、填空题
1.真核细胞的呼吸链主要存在于线粒体内膜，而原核细胞的呼吸链存在于细胞膜。
2.呼吸链上流动的电子载体包括CoQ和cytC。
3.内膜上能够产生跨膜的质子梯度的复合体是复合体Ⅰ、复合体Ⅲ和复合体Ⅳ。
4.氰化物使人中毒的机理是氰化物阻断了电子从cytaa3向O2的传递，从而抑制了ATP（能量）的生成。
5.典型的呼吸链包括NADH呼吸链和FADH2呼吸链两种，这是根据接受代谢物脱下
的氢的受体不同而区别的。
6.填写电子传递链中阻断电子流的特异性抑制剂：
NAD→FMN→CoQ→Cytb→Cytc1→Cytc→Cytaa3→O2、
7.化学渗透学说主要论点认为：
呼吸链组分定位于线粒体内膜上。
其递氢体有质子泵作用，因而造成内膜两侧的质子浓度差，同时被膜上ATP合成酶所利用，促使ADP＋Pi→ATP。
8.呼吸链中氧化磷酸化生成ATP的偶联部位是复合体Ⅰ、复合体Ⅲ和复合体Ⅳ。
二、选择题
1.关于有氧条件下，NADH从胞液进入线粒体氧化的机制，下列哪项描述是正确的？
（D）
A.NADH直接穿过线粒体膜而进入
B.磷酸二羟丙酮被NADH还原成3-磷酸甘油进入线粒体，在内膜上又被氧化成磷酸二羟丙酮同时生成NADH
C.草酰乙酸被还原成苹果酸，进入线粒体后再被氧化成草酰乙酸，停留在线粒体内
D.草酰乙酸被还原成苹果酸进入线粒体，然后再被氧化成草酰乙酸，再通过转氨基作用生成天冬氨酸，最后转移到线粒体外
E.通过肉毒碱进行转运进入线粒体
2.寡霉素通过什么方式干扰了ATP的合成？
（D）
A.使细胞色素C与线粒体内膜分离B.使电子再NADH与黄素酶之间的传递被阻断
C.阻止线粒体膜上的肉毒碱穿梭D.抑制线粒体膜上的ATP酶
E.使线粒体内膜不能生成有效的氢离子梯度
3.肌肉或神经组织细胞内NADH进入线粒体的主要是（A）
A.磷酸甘油穿梭机制B.柠檬酸穿梭机制C.肉毒碱穿梭机制
D.丙酮酸穿梭机制E.苹果酸-天冬氨酸穿梭机制
4.下列化合物中，除了哪一种以外都含有高能磷酸键？
（D）
A.NAD＋B.ADPC.NADPHD.FMNE.PEP
三、名词解释
1.呼吸链有机物代谢脱下的成对氢原子（2H）经过一系列有严格排列顺序的传递体系，
逐步从高能向低能传递，最终与氧结合生成水，这样的传递体系称为电子传递链。
其中释放的能量被用于合成ATP。
此过程与细胞呼吸有关，此传递链称为呼吸链。
2.氧化磷酸化有机物在氧化过程中脱下的H在电子传递链上进行传递所释放的能量，
同ATP的合成相偶联的过程。
3.高能化合物生化反应中，在水解时或基团转移反应中可释放出大量自由能（>21千焦
/摩尔或5千卡/摩尔）的化合物称为高能化合物。
4.解偶联作用在氧化磷酸化反应中，有些物质能使电子传递和ATP的生成两个过程分
离，电子传递产生的自由能都变为热能。
生化测试题五：
糖代谢
一.填空题
1.糖酵解途径的反应全部在细胞液/质进行。
2.糖酵解途径唯一的脱氢反应是3-磷酸甘油醛生成1，3-二磷酸甘油酸，脱下的氢由
NAD+递氢体接受。
3.糖酵解途径中最重要的关键酶是磷酸果糖激酶。
4.一次三羧酸循环有4次脱氢过程和1次底物水平磷酸化过程。
5.磷酸戊糖途径的生理意义是生成5-磷酸核糖（是合成核酸及核苷酸辅酶的必要原料）和NADPH＋H＋（作为供氢体，参与体内许多重要的还原性代谢反应）。
6.肌肉不能直接补充血糖的主要原因是缺乏6-磷酸葡萄糖磷酸酶。
7.3-磷酸甘油醛脱氢酶催化的反应是EMP途径中的第一个氧化反应。
1，3-二磷酸甘油酸分子中的磷酸基团转移给ADP生成ATP，是EMP途径中的第一个产生ATP的反应。
8.葡萄糖的无氧分解只能产生2分子ATP，而有氧分解可以产生38或36分子ATP。
9.丙酮酸脱氢酶系位于线粒体内膜上，它所催化的反应是葡萄糖代谢中第一次产生CO2的反应。
10.TCA循环的第一个产物是柠檬酸。
由柠檬酸合酶，异柠檬酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶系所催化的反应是该循环的主要限速反应。
11.TCA循环中有两次脱羧反应，分别是由异柠檬酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶系催化。
12.TCA循环中大多数酶位于线粒体基质，只有琥珀酸脱氢酶位于线粒体内膜。
13.EMP途径产生的NADH•H＋必须依靠α-磷酸甘油穿梭系统或苹果酸-天冬氨酸穿梭
系统才能进入线粒体，分别转变为线粒体中的FADH2和NADH•H＋。
14.磷酸戊糖途径是糖代谢的另一条主要途径，广泛存在于动物、植物和微生物体内，在细胞的细胞液内进行。
（删除）15
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