常用试剂的配制.docx
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常用试剂的配制
常用溶液的配制
信息来源：
生物谷 更新时间：
2004-12-211:
33:
00
一、常规溶液
（一）1/15mol/LPBS（磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution，PBS）
甲液：
1/15mol/LNa2HPO4溶液
Na2HPO4 9.465g
蒸馏水 加至1000ml
乙液：
l/15mol/LKH2PO4溶液
KH2P04 9.07g
蒸馏水 加至1000m1
分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:
pH
甲液ml
乙液mI
pH
甲液ml
乙液mI
5.29
5.59
5.91
6.24
6.47
6.64
2.5
5.0
10.0
20.0
30.0
40.0
97.5
95.0
90.0
80.0
70.0
60.0
6.81
6.98
7.17
7.38
7.73
8.04
50.0
60.0
70.0
80.0
90.0
95.0
50.0
40.0
30.0
20.0
10.0
5.0
（二）0.3％台盼兰染液
称取台盼兰（Trypanblue）粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。
（三）0.5％酚红指示剂
酚红 0.5g
0.1N（0.4％）NaOH 15ml
双蒸水 85ml
将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。
（四）5.6％NaHCO3溶液
称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可（如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存）
（五）10μg／ml秋水仙素
秋水仙素 lOmg
生理盐水 100ml
装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。
甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
（六）0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液
将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。
（七）2％柠檬酸钠
称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。
（八）0.2％次甲基兰染液
称次甲基兰（Methyleneblue）0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。
（九）0.5％醋酸洋红（AceioCarmine）染液
洋红 lg
醋酸 90ml
蒸馏水 110ml
将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁（媒染剂）水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。
室温保存。
加铁使洋红沉淀于组织而着色。
此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。
（十）1％甲苯胺兰（Toluidineblue）
称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。
（十一）1/3000中性红染液
取中性红（Neutralred）0.1克，加蒸馏水300ml。
室温保存。
（十二）Giemsa染液
1．贮备液
Giemsa粉 1g
纯甘油 66ml
甲醇 66ml
先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。
再将全部甘油加入，放入56℃温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。
一般两周后使用为好。
2．工作液
临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:
20混合。
（十三）埃利希（Ehrlich）苏木精染液
苏木精 1.0g
乙醇 50ml
醋酸 5ml
甘油 50ml
硫酸铝钾 5g
蒸馏水 50ml
将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。
当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。
二、细胞化学和细胞组分分离溶液
（一）M一缓冲液
眯唑（Imidazole） 3.404g
KCI 3.7g
MgCl2·6H2O 101.65mg
ECTA 380.35mg
EDTA 29.224mg
巯基乙醇 0.07ml
甘油 297ml
蒸馏水 加至1000ml
用lNHCl调pH至7.2室温保存。
（二）2％TritonX一100溶液
量取2mlTritonX一100（聚乙二醇辛基苯基醚）液，加M缓冲液98ml即可。
（三）0.2％考马斯亮兰R-250染液
甲醇 46.5ml
醋酸 7.0ml
考马斯亮兰 0.2g
蒸馏水 加至100ml
（四）A．0.1％碱性固绿染液（pH8.0～8.5）
1．0.1％固绿水溶液
固绿（Fastgreen） 0.1g
蒸馏水 100ml
2．0.05％Na2C03溶液
Na2C03 50mg
蒸馏水 100ml
用时按1:
1体积混合即可。
B．0.1％酸性固绿染液（pH2.2）
1．0.1％固绿水溶液。
2．mol／L×75盐酸液
盐酸（比重1.19）0.109ml加蒸馏水至100ml
用时按l:
1混合。
（五）甲基绿一哌咯宁染液
1.1mol／L醋酸缓冲液（pH4.8）：
（1）醋酸 17ml
蒸馏水 加至200ml
（2）醋酸水 13.5g
蒸馏水 加至lOOml
用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。
2．甲基绿一哌咯宁（methylgreen—Pyrcnln）
5％哌咯宁水溶液 6ml
2％甲基绿水溶液 6ml
蒸馏水 16ml
lmol/L醋酸缓冲液 16ml
lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。
（六）Schiff试剂
将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中，加1NHC11O毫升，冷却至25℃时加入1克NaHSO3，此时需很好的振荡，避光过夜。
次日取出（呈淡黄色）加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。
过滤后即得Schiff试剂。
避光低温保存。
（七）联苯胺混合液
联苯胺（4.4Diaminobenzidine） 0.2g
95％乙醇 lOOml
3％过氧化氢 2滴
此液临用时配制。
（八）l％番红水溶液
番红（Safranin） 1.0g
蒸馏水 100ml
（九）1％SDS（十二烷基硫酸钠Sodiumdodecylsulfate,SDS）
SDS 10g
45％乙醇 100ml
（十）1mol／LTris（三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液TrihydroxymethylaminomethaneTris/HCL）pH7.8
Tris 12.114g
蒸馏水 lOOml
先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml
（十一）RingerSolution
氯化钠（冷血动物用0．65克） 0.9克
氯化钾 0.042克
氯化钙 0.025克
蒸馏水 100ml
（十二）淀粉肉汤培养基
蛋白 2g
淀粉 6g
牛肉汤 100ml
用10％NaHCO3调pH至7.0～7.2
（十三）0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液
蔗糖 85.5g
氯化钙 0.33g
蒸馏水 1000ml
（十四）1％詹纳斯绿B染液
取詹纳斯绿（JanusgreenB）1.0gRinger氏液100ml
（十五）1％刚果红染液
刚果红 1g
蒸馏水 100ml
（十六）Gomori硝酸铅作用液
0.05mol／L醋酸缓冲液（pH5） lOOml
0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其 42ml
醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml
B-甘油磷酸钠 2g
醋酸铅 2g
5％氯化镁 5ml
以上作用液在临用时配制，最终在pH5～5.2，过滤使用。
（王世藩 汇编）
三、细胞培养和细胞融合溶液
（一）0.01mol／LPBS（磷酸盐缓冲液PhosphateBufferSaline，PBS）pH7.2。
0.2mol／L磷酸氢二钠液（甲液）：
NaH2PO4·12H2O 35.814g
双蒸水 加至500ml
0.2mol／L磷酸二氢钠液（乙液）:
NaH2PO4·12H2O 15.601g
双蒸水 加至500ml
取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。
混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。
（二）50％PEG（聚乙二醇Polyethyleneglycolmwl500）
称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37℃予热的MEM培养液，混匀，保温在37℃水浴中待用。
（三）MEM培养液（含10％小牛血清）
MEM培养液（日本制药株式会社） 9.4g
双蒸水 1000ml
NaHCO3 1.5g
谷氨酰胺（L-glutamin） 0.292g
56℃灭活30分钟的小牛血清110ml
MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3调pH到7.1（因在抽滤过程中pH升高0.2～0.3），然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置4℃冰箱保存备用。
（四）0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液
胰蛋白酶（Trypsin）粉 0.25g
EDTA粉 20.0mg
0.01mol／LPBS 100ml
先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1小时左右（待彻底溶解，液体呈透明为止），用G5抽滤，分装置4℃冰箱中保存。
（五）Hanks液
1．原液甲
NaCl 160g
KCl 8g
MgSO4·7H2O 2g
MgCI2·6H2O 2g
溶于800ml馏水中。
CaCl2（无水） 2.8g
溶于100ml蒸馏水中。
将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。
原液乙
Na2HPO4·12H2O 3.04g
KH2PO4 1.2g
葡萄糖 20.0g
溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5％酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。
2．使用液
甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。
使用时用5.6％NaHCO3调pH值到所需要求。
（六）1640培养液（含lO％小牛血清）
RPMI-1640粉 10.39g
双蒸水 加至1000ml
通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其（呈透明）完全溶解。
用NaHCO31.5克调pH值到7.2。
双抗1万u/ml 10ml
灭活小牛血清 110ml
混匀上述液体，立即用G6抽滤除菌分装，置4℃冰箱备用。
（七）青、链霉素溶液
青霉素钠盐（40万u／瓶） 5瓶
链霉素（100万u／瓶） 2瓶
将两者溶于200ml0.9％的无菌生理盐水，分装小瓶，-30℃保存。
双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。
（八）二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。
4％。
（九）BrdU溶液（200ug/m1）
用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。
最好用时现配。
（十）2×SSC溶液
用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。
（十一）3％琼脂：
取琼脂粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后（15磅20分钟），冷藏备用，使用前重新加热煮沸（贮存时间不宜过长）。
四、制备电镜标本的溶液
（一）2.5％戊二醛溶液
25％戊二醛 lOml
0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液
装入茶色瓶中，保存于4℃冰箱备用。
（二）0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液
二甲砷酸钠 10.70g
蒸馏水 500ml
将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4℃冰箱保存。
（三）包埋剂
环氧树脂Epon812 56.30g
DDSA（十二烷基琥珀酸酐Dodecenylsuccinic
anhydride，DDSA） 14.60g
MNA（甲基内次甲基邻苯二甲酸酐MethylNadic）
anhydride，MNA 29.00g
混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。
再加加速剂2,4,6一三（二甲氨基甲基）苯酚（2，4，6-tridimethylaminomethylphenol，DMP-30）1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中（室温）备用。
（四）2％单宁酸
单宁酸 2g
双蒸水 100ml
溶解后过滤装茶色瓶中，4℃冰箱保存。
（五）高锰酸钾固定剂
柠檬酸三钠 60mmol/L
氯化钾 25mmol/L
氯化镁 35mmol/L
高锰酸钾 125mmol/L
pH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4℃冰箱中保存，有效期2个月左右。
（六）1％OsO4溶液
OsO4 0.5g
0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。
50ml
OsO4一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡4～12小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸馏水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在瓶中捣碎，轻轻摇动放冰箱中，48小时后完全溶解。
此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用时特别小心，在通风橱内操作。
五、显影、定影溶液
（一）D-72显影液
温水（52℃） 750ml
米吐尔 3g
无水亚硫酸钠 45g
对苯二酚 12g
无水碳酸钠 67.5g
溴化钾 19g
水 加至1000ml
D-72显影液为通用显影液，既能显影胶片又能用于相纸显影。
使用原液，20℃显影时间1～2分钟可得高反差。
加水1:
2稀释后使用可得较低反差。
1:
1稀释使用。
20℃时显影时间3～4分钟可得正常反差。
（二）SB-1停显液配方
水 1000ml
28％醋酸 48ml
停显时间lO秒左右。
（三）F-5酸性坚膜定影液
水 750ml
硫代硫酸钠 240g
无水亚硫酸钠 15g
28％醋酸 48ml
硼酸 7.5g
钾
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