《动物细胞工程》课件.ppt

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动物细胞工程常用的技术手段：

动物细胞工程常用的技术手段：

动物细胞培养、动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞核移植、动物细胞融合、动物细胞融合、单克隆抗体单克隆抗体动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。

是其他动物细胞工程技术的基础。

提问：

提问：

v植物细胞工程常用的技术手段有哪些植物细胞工程常用的技术手段有哪些？

植物组织培养植物组织培养,植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术v动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

中，让这些细胞生长和增殖。

1、选材：

、选材：

动物动物胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物的组织、器的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。

分化程度低，容易培养。

v在进行动物细胞培养时，用在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶胰蛋白酶分散分散细胞，说明细胞间的物质主要是细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质蛋白质。

动。

动物细胞培养适宜的物细胞培养适宜的PH为为7.27.4，此环境下，此环境下胃蛋白酶（胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶）没有活性，而胰蛋白酶（7.2-8.4）的活性较高。

的活性较高。

2.如何分散成单个细胞？

如何分散成单个细胞？

一般选取胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物的组织细胞的组织细胞的原因是的原因是代谢旺盛代谢旺盛增殖能力强增殖能力强分化程度低分化程度低4.4.过程：

过程：

幼龄动物组织幼龄动物组织剪碎组织剪碎组织用胰蛋白酶处理分散成单个细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞转入培养液中进行原代培养转入培养液中进行原代培养用胰蛋白酶处理分散成单个细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞转入培养液中进行原代培养转入培养液中进行原代培养贴满甁壁的细胞用胰蛋白酶处理贴满甁壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成分散成单个细胞，制成细胞悬液细胞悬液分甁进行传代培养分甁进行传代培养动物细胞生长特性动物细胞生长特性：

v细胞贴壁：

细胞贴壁：

将动物细胞在液体培养基中培养，悬液中分将动物细胞在液体培养基中培养，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。

散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。

要求：

要求：

培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。

附。

细胞的接触抑制细胞的接触抑制：

当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

制。

注意：

癌细胞失去了接触抑制注意：

癌细胞失去了接触抑制细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限传无限传代代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系5.5.如何界定原代培养和传代培养；细胞株和如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？

细胞系？

多数组织细胞固定在表面多数组织细胞固定在表面生长和分裂。

生长和分裂。

随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变基本概念基本概念1、原代培养：

通常将直接从动物体内取出的、原代培养：

通常将直接从动物体内取出的动物组织消化后的初次培养称为原代培养动物组织消化后的初次培养称为原代培养2、传代培养：

原代培养的细胞出现接触后，、传代培养：

原代培养的细胞出现接触后，贴满甁壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，贴满甁壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分甁继续培养，让细胞增殖，称为传代然后分甁继续培养，让细胞增殖，称为传代培养。

培养。

3、细胞株：

原代培养的细胞一般传至、细胞株：

原代培养的细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大多数细胞衰代左右细胞生长停滞，大多数细胞衰老死亡，少数细胞存活到老死亡，少数细胞存活到40到到50代，代，这种传代细胞为细胞株。

这种传代细胞为细胞株。

4、细胞系：

细胞株传至、细胞系：

细胞株传至50代后又出现细胞代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下无限增殖，这种的改变，使其在培养条件下无限增殖，这种传代细胞称为细胞系。

传代细胞称为细胞系。

问题：

为什么在培养液中要使细胞分散开来？

问题：

为什么在培养液中要使细胞分散开来？

1、培养时接触抑制、培养时接触抑制2、每个细胞与培养液充分接触，吸收营养、每个细胞与培养液充分接触，吸收营养总结：

总结：

动物细胞培养条件：

动物细胞培养条件：

1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境（培养液和所用培养用具进行无菌处理培养液和所用培养用具进行无菌处理添加一定量的添加一定量的抗生素抗生素定期更换培养液）定期更换培养液）2、营养、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。

葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。

）血清主要提供一些激素和生长因子血清主要提供一些激素和生长因子3、温度和、温度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、气体环境：

、气体环境：

O2和和CO2（95%空气和空气和5%CO2）O2是细胞代谢所必需；是细胞代谢所必需；CO2的主要作用是维持培养液的的主要作用是维持培养液的PH值值动物细胞培养液的主要成分：

动物细胞培养液的主要成分：

葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和、氨基酸、无机盐、维生素和动物动物血清血清等。

等。

与植物培养基相比其特点是：

与植物培养基相比其特点是：

（11）液体培养基）液体培养基（22）含有动物血清）含有动物血清动物细胞培养与植物组织培养的比较动物细胞培养与植物组织培养的比较细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细或细胞产物胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物葡萄糖、动物血清血清蔗糖、植物激蔗糖、植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较动物细胞培养应用动物细胞培养应用v大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）扰素、单克隆抗体）v作为基因工程中的受体细胞作为基因工程中的受体细胞v人造皮肤人造皮肤v培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性判断某种物质的毒性v为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据据二、动物体细胞核移植技术二、动物体细胞核移植技术:

1、概念、概念将动物的一个细胞的细胞核，移入一将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。

物个体。

用核移植的方法得到的动物用核移植的方法得到的动物称为克隆动物称为克隆动物2、核移核移植种类植种类胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植（难度高难度高）受体细胞：

受体细胞：

M期的期的卵母细胞卵母细胞3、过程：

、过程：

问题：

问题：

1、为什么要选择、为什么要选择M期的卵母细胞做受体细胞？

期的卵母细胞做受体细胞？

M期的卵母细胞含有促进供体核表达全能性的物期的卵母细胞含有促进供体核表达全能性的物质，即成熟促进因子（质，即成熟促进因子（MPF），而且活性很高。

），而且活性很高。

2、在供体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，、在供体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须去掉受体卵母细胞的核？

为什么必须去掉受体卵母细胞的核？

为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞。

要利用价值的动物提供的体细胞。

3、用于核移植的供体细胞为什么都选用传代、用于核移植的供体细胞为什么都选用传代10代代以内的细胞？

以内的细胞？

10代以内的细胞一般都能保持正常的二倍体核型代以内的细胞一般都能保持正常的二倍体核型小结：

小结：

原理：

动物细胞核的全能性原理：

动物细胞核的全能性主要的生物技术：

主要的生物技术：

、动物细胞培养技术、动物细胞培养技术、动物细胞核移植、动物细胞核移植、胚胎移植技术、胚胎移植技术属于无性生殖属于无性生殖4.4.应用应用1.1.加速家畜遗传改良进程，促进优良种畜繁殖加速家畜遗传改良进程，促进优良种畜繁殖2.保护濒危物种保护濒危物种3.3.生产医用蛋白生产医用蛋白4.4.作为异体移植的供体作为异体移植的供体5.5.用于组织器官的移植用于组织器官的移植5.5.体细胞核移植技术存在的问题：

体细胞核移植技术存在的问题：

1.1.成功率低成功率低2.2.克隆动物存在健康问题克隆动物存在健康问题3.3.克隆食品的安全性问题存在争议克隆食品的安全性问题存在争议卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程融合后的卵细胞融合后的卵细胞11、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是（）AA细胞系细胞系BB细胞株细胞株CC原代细胞原代细胞DD传代细胞传代细胞22、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是（）（）A.A.动物细胞融合动物细胞融合B.B.单克隆抗体单克隆抗体C.C.胚胎移植胚胎移植D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD33、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞（）A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异BB具有更强的全能性具有更强的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便DD分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D4.4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于A.A.培养基不同；培养基不同；B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。

养成植株。

A5.5.关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是（）（）A.A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中B.B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等长素和动物血清等C.C.动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌蛋白动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌蛋白D.D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理D6.6.下列哪项不属于体细胞核移植技术的应用下列哪项不属于体细胞核移植技术的应用A.A.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育B.B.保护濒危物种保护濒危物种C.C.获得组织器官异体移植的供体获得组织器官异体移植的供体D.D.大量产生紫杉醇大量产生紫杉醇D2.2.回答下列有关动物细胞培养的问题：

回答下列有关动物细胞培养的问题：

（11）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长）在动物细胞培养过程中，当