细胞培养复习题.docx

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细胞培养复习题

名称解释

细胞培养（动物细胞培养）：

动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。

组织培养：

从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。

有时泛指所有的体外培养。

器官培养：

是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。

合成培养基：

根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。

无血清培养基：

由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。

完全培养基：

在合成培养基里添加血清后的培养基。

接触抑制：

体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。

无限细胞系：

细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

去分化（脱分化）：

细胞在体外不可逆地失去原有特性。

注意：

去分化不意味分化能力完全丧失！

在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。

但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。

不适应：

各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。

原因：

培养条件变化使分化发生阻抑

细胞分裂指数（MI）：

是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量

细胞群体倍增时间：

是指培养物中细胞数量翻倍的时间。

原代培养：

从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。

培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。

传代培养：

将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。

2）一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型，最常见的为前两种。

3）体外培养细胞的主要生长特点：

①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：

①去分化（脱分化）②不适应

1、细胞培养的基本要求有哪些和工作方法

要求：

1）培养前准备2）操作间消毒3）洗手和着装4）火焰消毒

培养前的准备的基本要求：

培养基的选择和无菌配制

动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理

方法：

1）操作程序规范2）试剂设备专人负责3）培养用品定点存放

2、平衡盐溶液（BBS）：

（1）成分：

无机盐和葡萄糖，少量酚红。

（2）作用：

维持渗透压、缓冲和调节酸碱度（3）常用：

Hanks液、PBS等

消化液

（1）作用：

分散组织或细胞团。

2）常用：

胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液、蜗牛酶等

2、消化液中的胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液作用的原理是什么？

胰蛋白酶消化液主要作用是水解细胞之间的蛋白质，使细胞相互分离。

EDTA-2Na液：

是一种化学螯合剂，其溶液又称Versen液，对细胞有一定的离解的作用。

EDTA-2Na液的主要作用是通过结合（螯合）细胞间质中的二价阳离子从而破坏细胞之间的细胞连接。

达到分散细胞的目的。

胶原酶溶液：

胶原酶是从细胞中提取的一种酶，对胶原组织和细胞间质有较强的消化作用，而对培养细胞一般不产生损伤，常在上皮类细胞原代培养时用来离散细胞与胶原组织。

3、1）天然培养基：

定义:

主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。

优点：

含有丰富的营养物质，渗透压、pH等也与体内环境相似，培养效果好。

缺点：

成分复杂，批间差异大，易被支原体污染。

2）合成培养基：

根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的，配方恒定的培养基。

成分：

氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。

优点：

标准化生产，组分和含量固定。

成本低。

缺点：

缺少某些成分，不能促进细胞增殖生长。

3）完全培养基;定义：

在合成培养基里添加血清后的培养基。

细胞生长培养基:

常用培养基，血清含量高,10-20%。

维持培养基:

维持细胞不死或缓慢生长，血清含量低,2-5%。

4）无血清培养基：

定义：

由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。

用途：

用于研究细胞生长因子、单克隆抗体制备、细胞分泌产物研究等。

优点：

保证实验结果的准确性、可重复性和稳定性，减少细胞污染，简化提纯和鉴定等程序。

3、完全培养基中各成分的作用是什么？

合成培养基（基础培养基）的成分只能维持细胞生存

血清：

常用牛血清，含有促进细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质。

一定量的抗生素：

防止污染

4、体外培养细胞与体内培养细胞的差异都有哪些？

5、论述培养细胞的一代生存期可分为几个阶段及其特点？

培养细胞的“一代生存期”，是指从细胞接种后到再次传代培养之前的这一段时间，它与细胞世代或倍增时间不同。

可分为潜伏期、指数生长期、停滞期（平顶期）

1.潜伏期特点：

1）细胞适应新环境的恢复期（包括悬浮期、贴壁期、潜伏期三个时期）2）可有运动活动，基本无增殖，少见分裂相。

2.指数生长期特点：

1）细胞增殖最旺盛的时期，细胞数量呈指数生长，是实验研究和生产的主要阶段。

2）用细胞分裂指数和细胞群体倍增时间表示。

3.停滞期特点：

特点：

细胞数量不再增加，仍有代谢活动

6、动物细胞培养具有一系列优点：

①可简化细胞的生长环境。

在细胞存活的基础上独立研究细胞生命活动、逐项研究细胞生存条件和细胞功能。

②能够方便地控制实验因素。

研究某种实验因素对细胞的生物学作用，只需在培养液中有针对性地加入或者删除这种成分。

③易于观测实验结果。

利用细胞培养技术研究细胞的生命活动规律，可以很方便地采用各种实验技术和方法来观察、检测和记录。

④可供研究的细胞种类极其广泛。

⑤可同时提供大量均一性较好的细胞群，降低实验成本。

⑥能够进行大规模生物制品的生产。

包括酶、单克隆抗体以及多种疫苗等生物制品或者基因工程产品。

2、动物细胞培养的缺点：

①体外培养的动物细胞对营养的要求较高。

②动物细胞生长缓慢，对环境条件要求严格。

③体外培养的细胞与体内生长的细胞存在或多或少的差异。

（形态和功能的差异）

7.动物细胞培养实验室有哪几个部分组成？

理想的培养实验室可分为：

准备室、缓冲室（与培养室相连的消毒房间，作为隔离培养室与外面非消毒房间的缓冲地带）、培养室（一间或几间），普通实验室、办公室。

8.论述细胞培养的生长特点。

培养细胞生命期：

指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。

包括三个阶段：

原代培养期、传代培养期、衰退期。

1.原代培养期（也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周）

特点：

二倍体，细胞分裂次数少，异质性，独立生存性差。

用途：

药物测试，疫苗制备等。

2.传代培养期（定义：

原代细胞接种到两个或以上的器皿继续进行培养标志进入传代培养期）

特点：

细胞分裂增殖旺盛，去分化，在全生命期中此期的持续时间最长，传代10-50次。

3.衰退期（定义：

传代培养一定代数后，细胞生命活动明显减弱，增殖很慢或不增殖，直至衰退死亡的时期。

）

细胞特点：

细胞形态轮廓增强，色泽变暗，细胞质内出现暗的颗粒样结构及空泡状结构，胞质突起回缩，最后衰退凋亡。

9.论述玻璃制品清洗步骤

10、论述动物细胞培养技术的应用

1.在生物学领域基础研究中的应用

（1）在细胞生物学上的应用研究细胞的形态、结构、生长发育、细胞营养、代谢以及病变等微观过程。

（2）在遗传学上的应用染色体分析，杂交育种。

（3）在胚胎学上的应用通过体外培养卵母细胞，进行体外受精、胚胎分割和移植。

（4）在病毒学上的应用培养细胞为病毒的增殖提供场所。

（5）在药理学领域的应用药品、食品添加剂等对机体的毒性及其产生不良影响的安全性调查。

（许多致畸、致癌物质加入动物细胞培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。

）

2.在临床医学上的应用

（1）用于遗传疾病和先天畸型的产前诊断用羊膜穿刺技术获得胎儿细胞，培养后进行染色体分析，诊断胎儿是否患有遗传性疾病或先天畸型。

（2）用于癌症的早期诊断和预防通过培养淋巴细胞，对其染色体进行对比分析检测出易患癌症的病人，进行及早的预防和治疗。

（3）用于临床治疗目前已有将正常骨髓细胞经大量培养后植入患造血障碍症患者体内进行治疗的报道。

（4）用于药物效应的检测检测的药物具有组织特异性时，可选用相应的细胞，如检测治疗肝病的药物可选用肝细胞、检测抗癌药物可选用癌细胞。

3.在动物育种上的应用

新品种的培育可大大缩短育种进程，且更加经济有效。

胚胎干细胞的研究成果和克隆羊多莉的

问世为动物遗传育种开辟了一条新途径。

4.在生物制品生产上的应用

用动物细胞可生产的生物制品有各类疫苗、干扰素、激素、酶、生长因子、病毒杀虫剂、单克隆抗体等。

11、血清

种类：

人血清、牛血清、马血清等。

成分：

基本营养物、激素、生长因子、结合蛋白、贴壁和扩展因子等。

标准:

透明,淡黄色,无沉淀物,无细菌、支原体、病毒污染。

使用：

逐步解冻，热灭活，10%浓度，超低温保存。

牛血清又分胎牛血清和小牛血清，它们的区别

胎牛血清是从母牛剖腹取出的胎牛中分离出来的血清，对许多细胞系均有促进生长作用，主要用于细胞株的保藏及特殊娇贵细胞株的体外培养，但价格昂贵。

小牛血清是从刚出生但尚未哺乳的小牛分离出来的血清。

12、细胞传代方法

贴壁细胞的消化法传代步骤

（1）吸出或倒掉瓶内的旧培养液。

（2）加入适量的消化液消化。

（3）镜检，发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，应立即终止消化。

（4）吹打瓶壁细胞，制成细胞悬液。

（5）计数，接种到新的培养瓶。

悬浮细胞多采用离心法传代

将细胞连同培养液一并转移到离心管内，800-1000rpm离心5min,然后取出上清，加入新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液，然后传代接种。

13、培养细胞的观察和检测技术

1）培养液观察培养液的颜色和透明度的变化。

正常培养液pH介于7.2～7.4之间，呈桃红色、清亮透明。

培养中细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。

2～3天或3～4天换液一次。

2）细胞生长状况倒置显微镜观察。

原代细胞培养中最先可见从组织块中边缘“长出”细胞。

成纤维细胞是最易生长的细胞。

细胞长满瓶底80%应及时传代。

3、细胞形状变化

生长良好的细胞：

透明度大，折光性强，轮廓不清。

细胞生长状态不良的细胞：

轮廓增强，细胞折光性变弱，边缘不齐，胞质中出现空泡、脂滴、颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞表面及周围出现丝絮状物。

采取措施：

换液、排污、废弃。

4、微生物污染

细菌污染：

培养液浑浊、漂浮菌丝。

支原体污染：

生长减缓、胞质颗粒增多、培养液不变混。

细胞交叉污染。

化学物质污染。

14、去分化和不适应的区别

“去分化”不可逆（染色体变化）。

“不适应”可重新诱导（培养条件变化）

关于去分化需要注意：

①去分化并不意味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态。

如:

高度分化的神经细胞和心肌细胞已经丧失的增生活性不可能恢复，但已经具备的生物电活动特性不会完全失去。

②可重新表现出分化特点。

如：

把表皮细胞放在气液界面上培养，可分化成含大量角蛋白丝的角质细胞、内皮细胞，但，这种能力会随着培养时间延长逐渐丧失。

15、谷氨酰胺在培养基中的主要作用？

配液时应该注意哪些问题？

作用：

在细胞代谢中有重要作用，是细胞合成核酸和蛋白质必需氨基酸，（在缺少时，细胞生长不良死亡）

配液时：

由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20度冰箱中保存，在使用前加入培养液内。

已含谷氨酰胺的培养液在4度