解剖实验报告.docx

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解剖实验报告

蛙类坐骨神经–腓肠肌标本制备、不同频率刺激对肌肉收缩的影响

一．目的要求

1.掌握蛙类双毁髓的试验方法；

2.掌握坐骨神经—腓肠肌标本标本的制作方法；

3.观察不同刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。

二．根本原理

蛙类动物的某些根本活动，如神经的生物电活动、肌肉收缩等与哺乳动物相似。

其离体组时所需的生活条件比拟简单，易于控制和掌握，而且动物来源丰富，因此在生理实验中常用蛙类的坐骨神经—腓肠肌标本和坐骨神经标本来观察组织的兴奋性、刺激与反响的规律以及骨骼肌收缩的特点等。

肌肉受到一次阈上刺激而产生的一次收缩为单收缩，其过程可分为三个时相，即潜伏期、缩短期和舒期。

肌肉受到连续的阈上刺激时，如果刺激间隔小于单收缩的过程，相邻两单收缩的时相会出现融合，表现为强直收缩现象。

如果表现为每次收缩的开场发生在上次收缩的缩短期，称完全强直收缩，如果表现为每次收缩的开场发生在上次收缩的舒期，称不完全强直收缩。

使用生物信号采集处理系统，可以观察到腓肠肌收缩的情况。

三．实验材料

实验动物：

安康青蛙一只；

实验器材和药品：

蛙类手术器械一套〔粗剪刀一把，组织剪一把，眼科剪一把，镊子一把，探针一根、玻璃分针2把，蛙钉4个、培养皿一个，蛙板一个、滴管一个、棉线假设干〕，力换能器，肌槽，刺激电极，铁架台，生物信号采集处理系统，微机，任氏剂。

四．实验步骤

捣毁蟾蜍脑脊髓：

取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。

左手握蛙，用食指下压头部前端，拇指按压背部，使头前俯。

中指与无名指夹其前肢，无名指与小指夹其后肢，使整个躯干做最大屈曲。

把探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织；再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使其逐渐刺入整个椎管，完全彻底捣毁脊髓。

脊髓破坏完全的标志是：

下颌呼吸运动消失，反射消失，四肢松软。

剪除躯干上部和脏，去皮，制备下肢标本：

用粗剪刀在骶髂关节前1厘米处剪断脊柱，握住蟾蜍下肢，沿躯干两侧〔避开坐骨神经〕剪开腹壁。

此时躯干上部及脏即全部下垂。

剪除全部躯干及脏组织。

剪去肛周皮肤；用圆头镊子夹住脊柱，注意不要碰到坐骨神经，捏住皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。

将全部皮肤剥除后，把标本置于盛有任氏液的培养皿中。

2.1.1.3洗净双手和用过的全部手术器械。

别离两下肢：

避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开，将已别离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。

2.1.1.5取出一下肢，用蛙钉固定于蛙板上，固定时要注意，坐骨神经和腓肠肌朝上。

先用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向别离暴露坐骨神经之大腿局部直至腘窝，在别离过程中，把神经周围的结缔组织去除干净，并把神经的细小分支剪断，但要注意不要用金属器械碰触神经，也不要对神经过度牵拉。

实验期间应不断滴加任氏液使神经保持湿润。

用玻璃分针游离腓肠肌，并在下面穿线，在跟腱处打结。

在结扎线的下方剪断跟腱，在膝关节处把除腓肠肌外的小腿其他局部剪除。

注意保持完整的腓肠肌。

2.1.1.7用棉线在靠近脊柱的位置结扎坐骨神经，并在结扎线的上方剪断神经，用眼科剪剪断坐骨神经的全局部支。

从腘窝处开场剪掉大腿所有的肉，尽量把股骨刮干净，在膝关节上至少1cm处剪去上段股骨。

将标本浸入任氏剂的培养皿中。

实验装置与仪器连接：

1.将标本股骨残端固定在肌槽上的小孔；2.将结扎腓肠肌肌腱的棉线与力换能器连接，调节棉线的松紧，要与桌面垂直；3.将神经置于肌槽的刺激电极上，用任氏剂保持标本湿润；4.刺激电极插入微机上的刺激输入孔；5.力换能器与微机相应通道相连。

翻开电脑，进入生物信号采集处理系统，在菜单栏选择“实验工程〞--------?

“神经肌肉〞-------?

“刺激强度与反响的关系实验模块〞点击开场，调节刺激参数，使频率自动逐渐递增，串间隔为2.连续记录不同频率时的肌肉收缩曲线。

五．结果与分析

不同频率刺激对肌肉收缩的影响：

串间隔为2,频率增量为1时的力变化〔如图〕可见单收缩、不完全强直收缩、完全强直收缩。

分析：

刺激强度到达阈刺激时腓肠肌开场收缩，在最大刺激收缩力前随刺激强度增大而增大，到达最大刺激强度后，收缩力不发生明显改变；在最大刺激强度条件下，某较小频率使腓肠肌发生单收缩（如图中第一次刺激），频率增大到，单收缩变为不完全强直收缩〔如图中第2-6次刺激〕，频率继续增大，不完全强直收缩变为完全强制收缩〔如图中第7、8次刺激〕。

不同的腓肠肌其阈刺激，最大刺激均存在差异；其单收缩，不完全强直收缩和完全强直收缩所要频率也不尽一样。

六．实验总结

本次试验严格按照操作步骤进展，所得实验结果较为理想，很容易观察到腓肠肌的单收缩、不完全强直收缩、完全强直收缩现象。

在实验的过程中，制备坐骨神经-腓肠肌标本是最繁琐的步骤，也是实验成功的关键所在，期间，我们进展的比拟缓慢，生怕弄错了哪一步，一步步想原理、回忆教师是怎么说的，所幸的是我们最终成功了，得到了较好的结果，在这次的不断尝试和思考中，很好地锻炼了我们的动手能力和思维能力。

离体蛙心灌流

一、【目的要求】

1、学习斯氏离体蛙心灌流法;

2、了解心肌的生理特性;

3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素（Adr）,乙酰胆碱（ACh）等对离体心脏活动的影响。

二、【原理】

将离体蛙心〔失去神经支配的蛙心〕保持在适宜的环境中，在一定的时间仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。

心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。

血钾浓度过高时〔高于7.9mmol/L〕，心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒期。

血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。

血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。

血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。

肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱那么与肾上腺素的作用相反。

三、【实验仪器】

青蛙、常用手术器械、蛙板（或蜡盘）、蛙心夹、计算机采集系统、力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿（或小烧杯）、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。

蛙心套管（斯氏套管或八木氏套管）、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：

5000肾上腺素、1：

10000乙酰肌碱、300U／mL肝素。

四、【方法与步骤】

1、斯氏蛙心插管法

〔1〕一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。

仔细识别心脏周围的大血管（见右图）。

在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎（动物个体小时，结扎位置可靠上些）。

再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。

左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。

选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量（套管2～3cm高度）任氏液（参加一滴肝素溶液）的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥（见右图）。

当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔（于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口）。

此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，说明操作成功（否那么需退回并重新插入）。

用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。

稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧（不得漏液），再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。

轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保存静脉窦与心脏的联系，使心脏离体（切勿损伤静脉窦）。

用任氏液反复冲洗心室余血，使套管灌流液不再有残留血液。

保持套管液面高度一致（1.5～2cm），即可进展实验。

〔2〕将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉（不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液）。

再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与力传感器相连〔如右图〕。

注意：

勿使灌流液滴到传感器上。

调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。

2、实验观察

（1）记录正常心搏曲线

（2）改用0．65％NaCI溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。

待曲线氏插管装置出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2—3次，待心搏恢复正常。

注意：

换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一致（以下同）。

观察可得，NaCI溶液会阻遏心脏搏动。

（3）迅速用新鲜任氏液清洗2～3次，待心搏恢复正常。

向套管参加1～3滴2％CaCI：

溶液，观察并记录心搏曲线的变化。

当出现明显变化时，立即更换任氏液，待心搏恢复正常（如果恢复缓慢，可屡次冲洗）。

（4）同法向套管中加1—2滴1％KCl溶液，记录心搏曲线的变化。

留神搏曲线变化时，同法更换灌流液，待心搏恢复正常。

（5）同法记录套管中参加l～2滴的肾上腺素溶液（1：

10000）后心搏曲线的变化。

（6）同法记录套管中参加1—2滴乙酰胆碱溶液（1：

10000）后心搏曲线的变化。

五、【实验结果与原因分析】

曲线的幅度————收缩的程度

曲线的密度————心率

曲线的基线————舒的程度

1、正常收缩曲线图

分析：

2、滴加含钠离子溶液图

分析：

滴加Na离子溶液后，心跳减弱，这种现象出现的原因是由于灌注液中缺乏Ca2+，当Na＋明显增高时，膜外钠离子的浓度梯度增大，因此，细胞Na离子流加快，去极速度和幅度均增加，导致传导性和自律性增高。

同时，Na离子流的增多促进细胞Ca2＋的外运使细胞Ca2＋浓度降低，因此，心肌收缩能力减弱。

3、滴加2%CaCl溶液

分析：

细胞外Ca2＋在细胞膜上对Na＋流有竞争性抑制作用，称为膜屏障作用。

[Ca2＋]

增高时，Na＋流受抑制，细胞0期除极速度与幅度减小，使兴奋性及传导性均降低。

[Ca2

＋]增高使Ca2＋流增多，因此慢反响细胞0期去极化加快加强，传导性增高，而快反响细胞平台期缩短，有效不应期缩短，复极加速。

Ca2＋流增多，使心肌收缩能力增强。

[Ca2＋

]降低时，所引起的变化与高钙时相反。

因此参加CaCl2后，心率减少、振幅减少，基线上移。

4、滴加1%KCl溶液

分析：

滴加1％KCl后的心搏曲线，曲线的频率逐渐减小，愈来愈疏，幅度逐渐下降，最后停顿在基线处，即心脏停博于舒状态。

因为当细胞K+浓度增高时，K+与Ca2+有竞争性拮抗作用，K+抑制细胞膜对Ca2+的转运，使进入细胞Ca2+减少，心肌的兴奋—收缩偶联过程减弱，心肌收缩力降低。

所以心搏曲线振幅减小。

5、滴加1：

10000肾上腺素溶液

分析：

滴加肾上腺素后，蛙心收缩增强，心脏舒完全，描记的心搏曲线幅度明显增大。

其作用机理是，肾上腺素可与心肌细胞膜上的B受体结合，提高心肌细胞和肌浆网膜Ca2+通透性，导致肌浆中Ca2+浓度增高，使心肌收缩增强。

另外，肾上腺素还有降低肌钙蛋白与Ca2+亲和力，促使肌钙蛋白对Ca2+的释放速率增加，提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度，刺激Na+与Ca2+交换，使复极期向细胞外排出Ca2+的作用加速，这样，将使心肌舒速度增快，整个舒过程明显增强。

6、滴加1：

10000乙酰胆碱溶液

分析：

上图可示，蛙心收缩减弱，心率减慢，最后出现蛙心停顿舒阶段。

其机理为：

乙酰胆碱与心肌细胞膜M受体结合，一方面提高心肌细胞膜K+通道的通透性，促使K+外流，将引起：

1〕窦房强细胞复极时K+外流增多，最大复极电位绝对值增大；Ik衰减过程减弱，自动除极