磷酸盐缓冲液配制方法.docx

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磷酸盐缓冲液配制方法

磷酸盐缓冲液配制方法

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

0.01MPBS

PBS（135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2）

PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：

NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L

称7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4（or1.44gNa2HPO4）和1.8gK2HPO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L。

保存于4℃冰箱中即可。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。

母液的配制：

0.2MNa2HPO4：

称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水

0.2MNaH2PO4：

称取31.2gNaH2PO4-2H2O，

55

7.03862

7.13367

7.22872

7.32377

7.419ml81ml

7.51684

7.61387

7.710.590.5

7.88.591.5

7.9793

8.05.394.7

0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

在15lbf/in2（1034×105Pa）高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。

如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。

PH7.67.47.27.0

H2O1000100010001000

NaCl8.58.58.58.5

Na2HPO42.22.22.22.2

NaH2PO40.10.20.30.4

根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。

所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。

所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。

每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。

PBS缓冲液

称取NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO4?

12H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。

PBST缓冲液

取300μlTween-20加入PBS100ml中，混匀后即刻使用。

现用现配。

如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。

不能用盐酸调。

虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。

十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。

不需要其它任何处理。

这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次~

PH8.0的PBS配方详细

1.NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

0.05mol/LPBS（磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution，PBS）的配制：

甲液：

0.05mol/LNa2HPO4溶液：

称取磷酸氢二钠9.465g7.099g,加蒸馏水至1000ml;

乙液：

0.05mol/LKH2P04溶液:

称取磷酸二氢钾,9.07g6.803g,加蒸馏水至1000m1。

将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:

pH甲液ml乙液mI

5.292.597.5

5.595.095.0

5.9110.090.0

6.2420.080.0

6.4730.070.0

6.6440.060.0

6.8150.050.0

6.9860.040.0

7.1770.030.0

7.3880.020.0

7.7390.010.0

8.0495.05.0

你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。