运用mega5构建系统发生进化树.docx
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运用mega5构建系统发生进化树
运用mega5构建系统发生进化树
1.准备序列文件
准备fasta格式序列文件(fasta格式:
大于号>后紧跟序列名,换行后是序列。
举例如下)。
每条序列可以单独为一个文件,也可以把所有序列放在同一文件内。
核酸序列:
>sequence1_name
CCTGGCTCAGGATGAACGCT
氨基酸序列:
>sequence2_name
MQSPINSFKKALAEGRTQIGF
2.多序列比对
打开MEGA5,点击Align,选择Edit/BuildAlignment,选择Createanewalignment,点击OK。
这时需要选择序列类型,核酸(DNA)或氨基酸(Protein)。
选择之后,在弹出的窗口中直接Ctrl+V粘贴序列(如果所有序列在同一个文件中,即可全选序列,复制)。
也可以:
点击Edit,选择InsertSequenceFromFile,选择序列文件(可多选)。
序列文件加载之后,呈蓝色背景(为选中状态)。
点击按钮,选择AlignDNA(如果是氨基酸序列,则会出现AlignProtein)。
弹出的窗口中设置比对参数,一般都是采用默认参数即可。
点击OK,开始多序列比对。
比对完成后,呈现以下状态。
这时需要截齐两端含有---的序列:
选中含有---的序列,按键Delete删除(注意:
两端都需要截齐)。
截齐之后,保存文件为:
filename.mas
3.构建系统进化树
多序列比对窗口,点击Data,选择PhylogeneticAnalysis,弹出窗口询问:
所用序列是否编码蛋白质,根据实际情况选择Yes或No。
此时,多序列比对文件就激活了,可以返回MEGA5主界面建树了。
MEGA5主界面。
点击Phylogeny,选择Construct/TestNeighbor-JoiningTree…弹出的对话框询问:
是否使用当前激活的数据,选择Yes。
这时弹出建树参数设置对话框,更改No.ofBootstrapReplications为1000,其他参数默认即可,点击Compute。
这里解释一下,Construct/TestMaximumLikelihoodTree…(ML)或Construct/TestNeighbor-JoiningTree…(NJ)或Construct/TestMinimum-EvolutionTree…(ME)为三种不同的建树方法,NJ方法最常用。
建树完成,效果如下所示。
注意,要点击Bootstrapconsensustree查看树形。
保存文件为filename.mts(可以用MEGA5打开)。
4.后期修改
为了美观,也是为了满足发表文章的要求,需要对进化树进行树形、字体、字号的修改。
点击View,选择Options。
弹出窗口中,在Tree标签中可以修改枝与枝之间的距离(TaxonSeparation)、枝长(BranchLength)和树宽(TreeWidth),调整至美观即可。
Branch标签中,可以选择勾选“Hidevalueslowerthan%”,一般隐藏50%以下的数值。
其他的参数可以自行研究,一般默认即可。
文字字体、字号的修改。
方法1:
点击Image,选择SaveasPDFfile,保存至filename.pdf。
打开软件AdobeIllustratorCS6,文件---打开---选择刚刚保存的PDF文件。
修改好之后,文件---导出---可以导出很多种类型的文件。
一般选择保存成TIFF(.tif)文件,颜色模式选择RGB,勾选LZW压缩,其他默认。
方法2:
点击Image,选择CopytoClipboard。
粘贴到Word中,右击进化树图片,编辑图片。
即可更改字体字号。
修改好可以了。
或者进一步导出图片格式:
先将该word文件打印生成PDF文件,再用AdobeIllustratorCS6或