抑菌圈直径和MIC解释标准.docx

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抑菌圈直径和MIC解释标准

缩写：

ATCC，美国模式菌种保藏所；CAMHB，调节过阳离子的Mueller-Hinton肉汤；FDA，美国食品和药品管理局；MHA，Mueller-Hinton琼脂；MIC，最低抑菌浓度；MRS，耐甲氧西林葡萄球菌；MRSA，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；MOD-SA，修饰的金黄色葡萄球菌；PBP，青霉素结合蛋白；PCR，聚合酶链反应；QC，质量控制；VRSA，耐万古霉素金黄色葡萄球菌；vanA，万古霉素耐药基因。

BHI，脑心浸液；AST，抗菌药物敏感性试验；ATCC，美国模式菌种保藏所；BSC，生物安全柜；BSL-2，二级生物安全水平；BSL-3，三级生物安全水平；CAMHB，调节过阳离子的MuellerHinton肉汤；CDC，疾病预防控制中心；CFU，菌落形成单位；LHB，溶解马血；MHA，Mueller-Hinton琼脂；MIC，最低抑菌浓度；QC，质量控制。

抑菌圈直径和MIC解释标准

铜绿假单胞菌抑菌圈直径和MIC解释标准

试验条件

培养基:

纸片扩散法：

MHA

肉汤稀释法：

CAMHB

琼脂稀释法：

MHA

接种物:

生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准

孵育:

35±2°C；空气环境

纸片扩散法：

16-18h

稀释法：

16-20h

（1）对于纸片扩散法，直径150mm平板最大放置12只，直径100mm平板放置5只进行试验（见M02第9.2节）。

测量抑菌圈直径（用肉眼判读），包括纸片直径。

保

持平板在反射光照明的、非反射黑的背景上方几英寸，肉眼观察无明显生长的地区作为抑菌圈边缘。

在抑菌圈边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略

不计。

（2）用纸片扩散法和稀释法能可靠地测定分离于囊性纤维化病人的铜绿假单胞菌的敏感性，但在作为敏感结果报告前，应将孵育时间延长至24小时。

（3）所有抗菌药物在延长治疗期间可致铜绿假单胞菌发生耐药。

因此，初次分离的敏感菌株在开始治疗后3~4

不动杆菌属抑菌圈直径和MIC解释标准

试验条件

培养基：

纸片扩散法：

MHA

肉汤稀释法：

CAMHB

琼脂稀释法：

MHA

接种物：

生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准

孵育：

35±2°C；空气环境；20-24h，所有方法

由于培养基中可能存在拮抗剂，甲氧苄啶和磺胺类药物抑菌圈内可允许出现菌株轻微生长；因此，在测量抑菌圈直径时可忽视轻微生长

（20%或较少的菌苔）而测量较明显抑制的边缘。

（2）对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。

然而，某些对四环素中介或耐药的菌株可以对多西环素或米诺环素或二者敏感。

洋葱伯克霍尔德菌抑菌圈直径和MIC解释标准

试验条件

培养基：

纸片扩散法：

MHA

肉汤稀释法：

CAMHB

琼脂稀释法：

MHA

接种物：

生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准

孵育：

35±2°C；空气环境；所有方法，20-24h

嗜麦芽窄食单胞菌抑菌圈直径和MIC解释标准

试验条件

培养基：

纸片扩散法：

MHA

肉汤稀释法：

CAMHB

琼脂稀释法：

MHA

接种物：

生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准

孵育：

35±2°C；空气环境，所有方法，20-24h

由于培养基中可能存在拮抗剂，甲氧苄啶和磺胺类药物抑菌圈内可允许出现菌株轻微生长；因此，在测量抑菌圈直径时可忽视轻微生长（20%或较少的菌苔）而测量较明显抑制的边缘。

氯霉素：

分离于泌尿道菌株不常规报告。

其他非-肠杆菌科细菌MIC解释标准（μg/mL）

葡萄球菌属抑菌圈直径和MIC解释标准

试验条件

培养基：

纸片扩散法：

MHA

肉汤稀释法：

CAMHB；CAMHB+2%NaCl用于苯唑西林、甲氧西林和奈

夫西林；CAMHB补充50µg/mL钙用于达托霉素

琼脂稀释法：

MHA；MHA+2%NaCl用于苯唑西林、甲氧西林和奈夫西

林；琼脂稀释测试达托霉素还未被批准

接种物：

直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准

孵育：

35±2°C；空气环境

纸片扩散法：

16-18h；24h（凝固酶阴性葡萄球菌与头孢西丁）

稀释法：

16-20h

所有方法：

苯唑西林、甲氧西林、奈夫西林和万古霉素需24h

试验温度超过35°C可能检测不出MRS

（1）对于纸片扩散法，直径150mm平板最大放置12只纸片，直径100mm平板放置5只进行试验（见M02第9.2节）。

测量抑菌环直径（用肉眼判读），包括纸片直径。

保持平板在反射光照明的、非反射黑的背景上方几英寸，除外利奈唑胺、苯唑西林、万古霉素应用透射光阅读（平板正对光源）。

肉眼观察无明显生长的地区作为抑菌圈边缘。

在抑菌圈边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。

由于培养基中可能存在拮抗剂，甲氧苄啶和磺胺类药物抑菌环内可允许出现菌株轻微生长；因此，在测量抑菌环直径时可忽视轻微生长（20%或较少的菌苔）而测量较明显抑制的边缘。

在抑菌环内任何可辨别的菌落生长提示苯唑西林、利奈唑胺或万古霉素耐药。

（2）过去，将对青霉素酶稳定的青霉素类（见术语表I）耐药称为“耐甲氧西林”或“耐苯唑西林”，MRSAs是指表达mecA或具有另一种甲氧西林耐药机制，如青霉素结合蛋白与苯唑西林的亲和力改变（修饰的金黄色葡萄球菌[MOD-SA]菌株）的金黄色葡萄球菌。

（3）对于耐苯唑西林金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌（MRS），被认为对其它β-内酰胺类药物，即，青霉素类、β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合物，头孢类（新的“具有抗-MRSA活性的头孢菌素”例外）和碳青霉烯类等是耐药。

这是因为大多数文献报道了MRS

（4）在大部分葡萄球菌中，苯唑西林耐药是由mecA基因介导，此基因编码青霉素结合蛋白2a（PBP2a,也称为PBP2'）。

测试分离菌株mecA或PBP2a阳性应报告苯唑西林耐药。

通过苯唑西林MIC、头孢西丁MIC或头孢西丁纸片法测试分离菌株为耐药，应报告苯唑西林耐药。

非mecA介导的耐药机制较罕见，包括新的mecA同系物mecC1。

具有mecC菌株的头孢西丁和/或苯唑西林MICs典型地落在耐药范围；通过直接检测mecA或PBP2a不能检测出mecC介导的药。

（5）由于对常规用于治疗急性、无并发症的泌尿道感染的抗菌药物（如，呋喃妥因、甲氧苄啶±磺胺甲恶唑或一种氟喹诺酮）在尿液中可达到浓度的治疗反应是敏感的，因此，不建议对尿液中分离的腐生葡萄球菌进行常规试验。

（6）对于某些细菌/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药菌株，因此，除了“敏感”以外没有标明任何其他药敏类型。

如果菌株的结果提示“非敏感”，应确证菌株鉴定和抗菌药物敏感性试验结果。

（见附录A）。

（7）β-内酰胺酶、苯唑西林耐药性、使用头孢西丁检测mecA-介导的苯唑西林耐药性、万古霉素敏感性减低、诱导型克林霉素耐药和高水平莫匹罗星耐药（仅金黄色葡萄球菌）等筛选试验，金黄色葡萄球菌查阅表2C补充表1和2，凝固酶阴性葡萄球菌查阅表2C补充表3。

另外，使用头孢西丁预报mecA介导的苯唑西林

耐药性的进一步解释参见M07-A9第12

青霉素酶不稳定青霉素类

（8）青霉素敏感葡萄球菌也对葡萄球菌感染有临床疗效的其他β-内酰胺类药物敏感。

青霉素耐药葡萄球菌对青霉素酶不稳定青霉素耐药，包括氨苄西林、阿莫西林、阿洛西林、羧苄西林、美洛西林、哌拉西林和替卡西林。

（9）青霉素可被用于测试葡萄球菌对所有青霉素酶不稳定青霉素类的敏感性。

青霉素耐药葡萄球菌产生β-内酰胺酶。

当青霉素对葡萄球菌分离株MICs≤0.12µg/mL或抑菌圈直径≥29mm，在报告青霉素结果为敏感前，应对葡萄球菌执行β-内酰胺酶试验。

罕见葡萄球菌含β-内酰胺酶基因而β-内酰胺酶试验结果为阴性。

因此，对需青霉素治疗的严重感染，从相同患者随后分离的所有菌株，实验室应测定青霉素MIC和执行诱导β-内酰胺酶试验。

也可考虑用PCR测试分离菌株blaZβ-内酰胺酶基因。

见表2C后的表2C补充表1和3

（10）苯唑西林耐药葡萄球菌应报告对青霉素耐药或不报告。

青霉素酶稳定青霉素类

（11）苯唑西林（或头孢西丁）结果可应用于其他青霉素酶稳定青霉素类（邻氯西林、双氯西林、氟氯西林、甲氧西林和萘夫西林）。

具有确切临床疗效的抗菌药物，考虑感染部位和适当的剂量，苯唑西林（头孢西丁）敏感葡萄球菌可考虑对下列抗菌药物也敏感：

β∙-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合物（阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、替卡西林-克拉维酸）；

∙口服头孢烯类（头孢克罗、头孢地尼、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢呋辛、氯碳头孢）；

∙注射用头孢烯类包括I、II、III和IV代头孢菌素（头孢孟多、头孢唑啉、头孢吡肟、头孢美唑、头孢尼西、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢替坦、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢噻吩、头孢洛林、拉氧头孢）；和碳青霉烯（多利培南、厄他培南、亚胺培南、美罗培南）。

除了新的具有抗MRSA活性的头孢菌素外，耐苯唑西林葡萄球菌对目前所有β-内酰胺类药物耐药。

因此，对各种β-内酰胺类抗菌药物敏感或耐药结果，可以通过只检测青霉素和头孢西丁或苯唑西林而推测得到。

除不建议常规测试其他β-内酰胺类药物，具有抗-MRSA活性药物除外。

见注释（4）。

苯唑西林用于金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌

（12）苯唑西林纸片试验不可靠，当使用头孢西丁作为替代试验报告苯唑西林纸片试验结果时见头孢西丁和注释（13）。

（13）头孢西丁可被用作苯唑西林的替代品；r根据头孢西丁结果来报告苯唑西林敏感或耐药。

（14）如果用头孢西丁和苯唑西林测试金黄色葡萄球菌或路登葡萄球菌，二种药物中有任一结果为耐药，则应报告受试菌株对苯唑西林耐药。

苯唑西林用于除路登葡萄球菌外的凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）

（15）对于某些CoNS，由于某些非表皮葡萄球菌苯唑西林MIC为0.5~2μg/ml，而缺乏mecA基因，因此，苯唑西林MIC解释标准可能高估了耐药性。

除表皮葡萄球菌外，对于苯唑西林MIC为0.5~2μg/mlCoNS引起的严重感染，适合于测试分离菌株mecA基因或PBP2a或头孢西丁纸片扩散法敏感性。

.

万古霉素用于金黄色葡萄球菌。

（18）测定所有葡萄球菌分离株对万古霉素敏感性应执行MIC试验。

纸片扩散法既不能区别万古霉素敏感与中介金黄色葡萄球菌，也不能区分万古霉素敏感、中介和耐药凝固酶阴性葡萄球菌，对所有分离菌株给出相似大小抑菌圈。

（19）除了下述情况外，葡萄球菌纸片扩散法抑菌圈直径大小与万古霉素MIC不存在相关性。

30µg万古霉素纸片试验可检测含vanA基因的万古霉素耐药金黄色葡萄球菌（VRSA）。

上述菌株在纸片周围表现无抑菌圈（直径=6mm）。

应确证无抑菌圈分离菌的鉴定结果。

对未测定万古霉素MIC，而万古霉素抑菌圈直径≥7mm葡萄球菌分离株，不能报告其对万古霉素敏感。

（20）检测到万古霉素MIC≥8μg/mL的任何金黄色葡萄球菌，应送到参考实验室。

见附录A。

（VRSA）耐万古霉素金黄色葡萄球菌

（21）检测到万古霉素MIC≥32μg/mL的任何凝固酶阴性葡萄球菌，应送到参考实验室。

（23）分离于呼吸道的菌株不报告达托霉素结果。

（24）对试验敏感的葡萄球菌，可使用氨基糖苷类与试验敏感的具有活性的其他药物一起进行联合。

大环内酯类

（25）对泌尿道分离的菌株不常规报告。

四环素类

（26）对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。

然而，某些对四环素中介或耐药菌株可对多西环素、米诺环素或二者敏感。

氟喹诺酮类

（27）用喹诺酮类治疗葡萄球菌引起的感染，在延长治疗期间，葡萄球菌敏感株可发展为耐药株。

因此，起初敏感菌株在开始治疗后3~4天内可发展为耐药株。

应对重复分离菌株进行敏试验。

（29）诱导型克林霉素耐药性可用D-抑菌圈纸片扩散试验和使用单一孔含红霉素和克林霉素的肉汤稀释法进行检测。

当前建议见表2C补充表2和3，以及M02-A11第12节和M07-A9第13节总建议。

（30）磺胺异噁唑可代表当前使用的任何磺胺药制剂。

（31）Rx:

利福平不能单独用于抗菌治疗。

a.检测金黄色葡萄球菌是否产生β-内酰胺酶，青霉素纸片扩散法抑菌圈-边缘试验比nitrocefin-试验敏感。

假如实验室只使用一种检验β-内酰胺酶试验，则推荐青霉素抑菌圈-边缘试验。

然而，某些实验室可选择先执行nitrocefin-试验，如果此试验阳性，报告β-内酰胺酶结果阳性（或青霉素耐药）。

假如nitrocefin试验是阴性，且必须用青霉素治疗的情况下（如，心内膜炎），在报告青霉素为敏感前，应执行青霉素抑菌圈-边缘试验。

b.3个实验室共研究测试了168株临床分离的路登葡萄球菌，结果表明使用CLSI参考肉汤微量稀释法（MIC法）和纸片扩散法测试为耐药菌株均产生β-内酰胺酶，并且所有菌株是诱导nitrocefin试验β-内酰胺酶阳性。

青霉素纸片扩散法抑菌圈-边缘试验相比诱导nitrocefin试验要差些，因此，不用于路登葡萄球菌β-内酰胺酶的检测。

假如实验室使用的是一种非CLSI推荐的参考方法，并且不确定这种方法是否能可靠检出路登葡萄球菌对青霉素耐药性，则在报告分离菌株为青霉素敏感前，实验室应执行诱导nitrocefin

肠球菌属抑菌圈直径和MIC解释标准

试验条件

培养基：

纸片扩散法：

MHA

肉汤稀释法：

CAMHB；CAMHB补充50µg/mL钙用于达托霉素

琼脂稀释法：

MHA；琼脂稀释法用于达托霉素不未被认可

接种物：

生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准

孵育：

35±2°C；空气环境

纸片扩散法：

16-18h

稀释法：

16-20h

所有方法：

测试万古霉素需24h

（1）纸片扩散法，直径150-mm平板最大放置12只纸片，直径100-mm平板放置5只纸片（见M02第9.2节）。

测量抑菌圈直径（用肉眼判读），包括纸片直径。

保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方几英寸，但万古霉素需用透射光阅读（平板正对光源），肉眼观察无明显可见生长的地区作为抑菌圈边缘。

在抑菌圈边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。

在抑菌圈内任何可辨别的菌落生长提示万古霉素耐药。

（2）警告：

对于肠球菌属，头孢菌素、氨基糖苷类（除外高水平耐药筛选）、克林霉素和复方新诺明可以在体外显示活性但临床上治疗无效，因此，对于分离菌株这些药物不应报告为敏感。

（3）应用高水平的氨基糖苷类（庆大霉素和链霉素）筛选试验，能够预测氨苄西林、青霉素或万古霉素与一种氨基糖苷类抗生素之间的协同效应。

其它的氨基糖苷类不需进行测试，因为它们对肠球菌的活性并不优于庆大霉素和链霉素。

（4）对于某些微生物/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药株，因此，除了“敏感”以外没有标明任何其他类型。

如果菌株的结果提示“非敏感”，应确证菌株鉴定和抗菌药物敏感性试验结果（见附录A）。

（5）氨苄西林是氨苄西林和阿莫西林的代表药。

氨苄西林的结果可用于预报不产β-内酰胺酶的肠球菌对

阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦敏感性。

假如菌株被确认为粪肠球菌，氨苄西林敏感性能用于预报对亚胺培南的敏感性。

（6）对青霉素敏感非产β-内酰胺酶肠球菌可预报其对氨苄西林、阿莫西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西

林/克拉维酸、哌拉西林和哌拉西林/他唑巴坦敏感。

然而，对氨苄西林敏感肠球菌不能推定其对青霉素敏感。

假如需要青霉素结果，必须对青霉素进行试验。

（7）Rx:

对严重的肠球菌感染，如心内膜炎，需要氨苄西林、青霉素或万古霉素（敏感株）加一种氨基糖苷类药物进行联合治疗，除非证明其对庆大霉素和链霉素高水平耐药，上述药物联合对肠球菌可起到协同杀菌效果。

（8）在肠球菌中，因产β-内酰胺酶导致的对青霉素或氨苄西林耐药较少报道。

用常规纸片法或稀释法不

能可靠检测出因产β-内酰胺酶而致青霉素或氨苄西林耐药，但可使用直接的头孢硝噻吩β-内酰胺酶试验进行检测。

由于罕见β-内酰胺酶阳性肠球菌，常规不需要做此试验，但可用于选择性病例。

β-内酰胺酶试验阳性预报菌株对青霉素、氨基和脲基青霉素耐药（见术语表I）。

万古霉素（9）当测试肠球菌对万古霉素敏感性时，为准确检测耐药性，应将平板孵育24h。

使用透射光检测抑菌圈；在抑菌圈内出现雾状或任何生长表示耐药。

具中介抑菌圈菌株应根据CLSI文件M07-A9描述进行MIC试验。

对万古霉素MICs8-16μg/mL菌株，执行生化试验来鉴别表2D后的表2D补充表1中“万古霉素耐药”栏下列出的菌种。

（10）分离于呼吸道的菌株不报告达托霉素结果。

红霉素（11）分离于泌尿道菌株不常规报告。

四环素类（12）对四环素敏感菌株也被认为对多西环素和米诺环素敏感，但是，对四环素中介或耐药的某些株可以对多西环素或米诺环素或二者敏感。

（14）Rx:

利福平不能单独用于抗菌治疗。

.

磷霉素（15）仅用于泌尿道分离的粪肠球菌。

（16）认可的MIC试验方法是琼脂稀释法。

琼脂培养基中应补充25μg/ml6-磷酸葡萄糖。

不能使用肉汤稀释法。

（17）200-μg磷霉素纸片中含50μg6-磷酸葡萄糖。

流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌抑菌圈直径和MIC解释标准

试验条件

培养基：

纸片扩散法：

嗜血杆菌试验培养基（HTM）

肉汤稀释法：

HTM肉汤

接种物：

直接菌落悬液法：

相当于0.5麦氏标准，从孵育过液

（20-24h更适宜）巧克力平板上挑取菌落进行制备[见注

释

（2）]

孵育：

35±2°C

纸片扩散法：

5%CO2；16-18h

肉汤稀释法：

空气环境；20-24h

（1）此表中使用的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌。

其他嗜血杆菌试验和报告建议见CLSI文件M45。

（2）0.5McFarland菌悬液近似1~4×108CFU/mL。

由于高接种物浓度可致某些β-内酰胺类药物出现假耐药结果，尤其试验产β-内酰胺酶流感嗜血杆菌，建议使用者仔细练习制备菌悬液。

（3）对于纸扩散法，直径150-mm平板最大放置9只纸片，直径100-mm平板放置4只纸片进行试验。

测量抑菌圈直径（用肉眼判读），包括纸片直径。

保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方几英寸。

肉眼观察无明显可见生长的地区作为抑菌环边缘。

在抑菌环边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。

由于培养基中可能存在拮抗剂，甲氧苄啶和磺胺类药物抑菌环内可允许出现菌株轻微生长；因此，在测量抑菌环直径时可忽视轻微生长（20%或较少的菌苔）而测量较明显抑制的边缘。

（4）从CSF中分离的流感嗜血杆菌，常规只测试氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯霉素和美罗培南的药敏结果并适当报告。

（5）阿莫西林/克拉维酸、阿奇霉素、克拉霉素、头孢克罗、头孢丙烯、氯碳头孢、头孢地尼、头孢克肟、头孢泊肟、头孢呋辛和泰利霉素均是口服药物，可用于嗜血杆菌引起的呼吸道感染的经验治疗。

这些抗菌药物的药敏试验结果对个体患者的管理用处不大，但是，适用于对嗜血杆菌属耐药性监测及流行病学调查。

（6）HTM制备：

首先把50mg氯化血红素粉溶解在100mL0.01mol/LNaOH溶液中，加热搅拌至完全溶解，制成新鲜的氯化血红素原液。

再将30mL氯化血红素原液加到1L含5g酵母粉的Mueller-Hinton琼脂（MHA）中，高压灭菌并冷却后，无菌手续加入3mLNAD原液（50mgNAD溶解在10mL蒸馏水中，过滤除菌）。

（7）对于某些微生物/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药株，因此，除了“敏感”以外没有标明任何其他类型。

如果菌株的结果提示“非敏感”，应再确证微生物鉴定和抗菌药物敏感性试验结果。

（8）氨苄西林敏感性试验结果可用于预报阿莫西林的活性。

大部分耐氨苄西林和阿莫西林的流感嗜血杆菌可产生TEM-型β-内酰胺酶。

大多数情况下，直接β-内酰胺酶试验可以快速检测对氨苄西林和阿莫西林的耐药性。

（9）BLNAR流感嗜血杆菌罕见，这类菌应当被认为对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢克罗、头孢孟多、头孢他美、头孢尼西、头孢丙烯、头孢呋辛、氯碳头孢和哌拉西林/他唑巴坦耐药，即使某些BLNAR菌株对上述药物在体外显示为敏感。

四环素类（12）对四环素敏感的菌株也被认为对多西环素和米诺环素敏感。

氯霉素（13）从泌尿道分离菌株不常规报告。

（14）利福平仅适用于接触者预防。

此解释标准不适用于流感嗜血杆菌侵袭性疾病患者的治疗。

淋病奈瑟菌抑菌圈直径和MIC解释标准

试验条件

培养基：

纸片扩散法：

GC琼脂基础＋1%特定的生长添加剂。

（纸片扩散法不需要使用无半胱氨酸的生长添加剂）。

琼脂稀释法：

GC琼脂基础＋1%特定的生长添加剂。

（琼脂稀释法测碳青霉烯类和克拉维酸时需要使用无半胱氨酸的生长添加剂。

含半胱氨酸的生长添加剂对稀释法测定其他药物结果影响不显著）。

接种物：

直接菌落悬液法，在MHB或0.9%磷酸缓冲盐水（pH7.0）中，使用巧克力

琼脂平板5%CO2环境孵育过夜（20-24h）生长的菌落制备，浊度相当于0.5麦

氏标准。

孵育：

36±1°C（不超过37°C）；5%CO2；所有方法，20-24h

（1）对于纸片扩散法，直径150-mm平板最大放置9只纸片，直径100-mm平板放置4只纸片进行试验。

对某些药物，如,喹诺酮类或头孢菌素类，每只平板只能放置2~3只纸片进行测试。

测量抑菌圈直径（用肉眼判读），包括纸片直径。

保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方几英寸，肉眼观察无明显可见生长的地区作为抑菌环边缘。

在抑菌环边缘借助放大镜才能观察到的微小菌落生长可忽略不计。

（2）用体外试验呈现产生“中介”结果的头孢美唑、头孢替坦、头孢西丁和大观霉素治疗淋病瑟奈菌感染的临床疗效是未知的。

（3）纸片扩散法测试淋病瑟奈菌，某种抗菌药物试验结果是“中介”，提示或是技术问题，需要重复试验，或者是在处理具有上述抑菌圈的菌株时缺乏临床经验。

对于头孢美唑、头孢替坦、头孢西丁和大观霉素以外的药物产生“中介”的菌株，已有文献报道其临床治愈率（85%-95%）低于敏感菌株治愈率（>95%）。

（4）推荐的测试淋病奈瑟菌的培养基是含1%特定的生长添加剂的GC琼脂。

此添加剂（1升水中加入1.1gL-半胱氨酸、0.03g盐酸鸟嘌呤、3mg盐酸硫胺、13mg对氨基苯甲酸（PABA）、0.01g维生素B12、0.1g辅羧酶、0.25gNAD、1.0g腺嘌呤、10gL-谷氨酰胺、100g葡萄糖和0.02g硝酸铁）是在GC琼脂高压灭菌后加入。

（5）对于某些微生物/抗菌药物组合，尚不存在或罕见耐药株，因此，除了“敏感”以外没有标明任何其他类型。

如果菌株的结果提示“非敏感”，应确证菌株鉴定和抗菌药物敏感性试验结果（见附录A）。

（6）β-内酰胺酶阳性可预报分离菌株对青霉素、氨苄西林和阿莫西林耐药。

（7）β-内酰胺酶试验可检测淋病奈瑟菌对青霉素的一种耐药机制，也可以提供流行病学信息。

染色体介导的耐药仅可通过纸片扩散法或琼脂稀释MIC法检测出来。

（8）淋病奈瑟菌对10单位的青霉素纸片抑菌圈直径≤19mm，很可能是产生β-内酰胺酶的菌株。

但由于β-内酰胺酶试验可快速、准确检出这种质粒介导的青霉素耐药性，所以优于其它敏感性试验方法。

（10）淋病奈瑟菌对30μg四环素纸片抑菌圈直径≤19mm，常提示这是一株质粒介导的四环素耐药的淋病奈瑟菌