唐文军的课程设计.docx
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唐文军的课程设计
湘潭大学
课程设计说明书
题目:
年产1000万人份抗-HIV酶联免疫试剂工厂设计
院（系）：
化工学院
专业：
生物工程
学号：
2008651229
姓名：
唐文军
指导教师：
冯波
完成日期：
2012年3月8日
湘潭大学
毕业设计任务书
设计题目：
年产1000万人份抗-HIV酶联免疫试剂工厂设计
学号：
2008651229学生姓名：
唐文军专业：
生物工程
指导教师姓名：
冯波
系主任：
陶能国
一．主要内容及基本要求
主要内容：
1.拟在湘潭市西郊羊牯塘选择厂址新建立年产1000万人份抗-HIV酶联免疫试剂工厂设计
2．设计范围：
任选车间为主体设计，只做初步设计，不做施工图设计。
3．以生产工艺（流程）设计为主导，为其他配套专业（如全厂总平面，土建，采暖通风，水电，环保，行政管理，技术经济与概算等单项工程设计）提供设计依据和提出要求。
设计任务：
按论文格式完成3000字以上的综述一篇；完成编写设计说明书一份（10000字左右，涵盖总平面及车间布置，生产方案，工艺流程，物料恒算，设备选型，环保与综合利用，技术经济与概算等内容），按规定规格和顺序装订成册；完成下列初步设计图：
全厂总平面布置图，发酵车间设备布置图，发酵车间立面图，带点控制工艺流程图（无控制点的画主要单件设备图）各一份；查阅相关英文原文并翻译。
基本要求：
生产方案和平面布置合理，工艺流程设计和设备选择及生产技术经济指标具有先进性与合理性，工艺计算正确，绘图规范，必须有手工制图和计算机绘图，综合指标达到先进水平，“三废”环保符合国家有关规定。
二．重点研究的问题
生产工艺流程的选择和设计；物料恒算；发酵车间布置设计以及专业设备的选型。
三．进度安排
序号
各阶段完成的内容例如：
完成时间
1
查阅资料、调研
第１周
2
开题报告、制订设计方案 完成综述
第２周
3
初步设计（工艺设计、物料衡算）
第３～５周
4
绘图
第６周
5
编写设计说明书、打印装订
第７～８周
6
指导教师审阅
7
答辩
四．应收集的资料和主要参考文献
[1]刘国刚，钟海明，胡金元.ELISA法检测HIV抗体的几点体会[J].中华医学实践杂志,2004,10
（1）:
84-86.
[2]庄晨杰，吴昊，童葵塘.酶联免疫分析法测定人αl型基因工程干扰素成品中的干扰素蛋白含量[J].病毒学报，1995,11
（2）：
180.
[3]黄秋芳,王微,李永.ELISA检测HBsAg复检结果的分析[J].检验医学,2004,19（4）:
63.
[4]李建武，余瑞元等.生物化学实验原理和方法[M].北京：
北京大学出版社，1994.
[5]陈洪章等.生物过程工程与设备[M].北京：
化学工业出版社，2004.
[6]严希康.生物分离技术[M].北京：
化学工业出版社，2001.
[7]伦世仪.生化工程[M].北京：
中国轻工业出版社，1993.
[8]焦奎，张书圣。
酶联免疫分析技术及应用.北京：
化学工业出版社[M]，2004.
[9]SaitoTImai.MeasurementofreversetranscriptaseoffelineimmunodeficiencyvirusbypolyA-linkedcolorimetricassay[M].JournalofVeterinaryMedicalScience，1997,59（6）:
425-429.
第一章厂址的选择
1．1原则和基本要求
厂址选择是一项包括政治.经济.技术的综合性工作。
必须贯彻国家建设的个项方针政策，多方案比较论证，选出投资省.建设快.运营费低.具有最佳经济效益.环境效益和社会效益的厂址。
在工艺技术上要先进，考虑机械化、自动化操作，提高劳动生产率。
在设备原材料的选用上要以经济性为原则，达到成本低的目的。
要因地制宜，考虑地区原材料来源及水、电供应。
原料.燃料及产品销售：
接近原料产地及产品地区，运输方便。
燃料质量符合要求，保证供应。
面积：
厂区用地面积应满足生产工艺和运输要求，并预留扩建地。
有废料.废渣的工厂，起堆存废料.废渣所需面积应满足工厂服务年限要求。
居住用地根据工厂规模及定员，按国家.省.市所规定计算所需面积。
施工用地应根据工厂建设规模.施工认输.临建安排的因素考虑
外形与地形：
外型应尽量简单，如为矩形场地长宽比控制在1：
1.5之内，较经济合理。
车间布置.运输联系及场地排水：
一般情况下，自然地形坡度不大于千分之5，丘陵坡地不大雨千分之40，山区不超过千分之60为宜。
气象：
考虑高温.高湿.云雾.风沙和雷击地区对生产的不良影响。
考虑冰冻线对建筑物基础和地下管道辐射的影响。
水文地质：
地下水最好低于地下室和底下结构物的深度，地下水对建筑基础最好无腐蚀性。
了解蓄水层水量。
工程地质：
尽避开发震断层和基本烈度高于九级地震区，泥石流.滑坡.流沙，溶洞等高危地段，
以及较厚的三级自重湿陷性黄土.新近堆积黄土.一级膨胀土等地质恶劣区。
应避开具有开采价值的矿藏区.采空区.以及古井.古墓.坑穴密集地区
场地地基承受力一般不低于0.1Mpa。
交通运输：
根据工厂运货量.物料性质.外部运输条件.运输距离等因素合理确定采用的运输方式（铁路.公路.水运.空运）
运输路线应最短，方面，工程量小，经济合理。
给水排水：
靠近水源，保证供水的可靠性，并符合生产对水质，水量，水温的要求。
污水便于排入附近江河或者城市下水系统。
协作：
应有利于同相临企业和依托城市要科技.信息.生产.修理.公用设施.交通运输.综合利用和生活福利等方面和协作。
能源供应：
靠近热电供应地点，所需电力.蒸汽等应有可靠来源。
自备锅炉房和煤气站时，宜靠近燃料供应地：
煤质应符合要求，并备有储灰场地。
居住区：
有足够的用地面积和良好的卫生条件，有危害性的工厂应位于居住区夏季最小风向频率的下风侧并要有一定的保护地带。
配合城市建设，宜靠近现有城市，以便于利用城市已有的公共设施。
靠近工厂，职工上下班不宜超过30分钟，高原与高寒地区步行不宜超过15到20分钟。
施工条件：
了解当地及外来建筑材料的供应情况.产量.价格，尽可能利用当地的建筑材料。
了解施工期间的水，电，劳动力的供应条件，以及当地施工技术力量.技术水平.建筑机械数量.最大起重能力等。
安全保护：
工人与工厂之间，工厂与居住区之间，必须满足现行安全.卫生.环保各项有关规定。
必须满足人对水.电源的要求。
其他
厂址地下如果有古墓遗址或者底墒有古代建筑物.文物时应征得有管部门的处理意见和同意建厂文件。
避免将厂址选择在建筑物密集.高压输电线路地工程管道通过地区，以减少拆迁。
在基本烈度高与七高地建厂时，应选择对抗震有利的土壤分布区建厂。
厂址不应选择在不能全豹安全的水库下游与防洪堤附近。
1．2可行性的论证
经研究我们选择在湖南省湘潭市西郊的羊牯塘选择厂址新建年产1000万人份的抗-HIV酶联免疫工厂。
1．2．1湘潭市概况
古城湘潭，位于湖南省中部偏东，湘江下游西岸。
东连株洲，南邻衡阳，西接娄底，北靠长沙。
全市总面积5016平方公里。
辖雨湖、岳塘二个区和湘潭县、韶山市、湘乡市。
与长沙、株洲互为犄角，构成湖南经济最为雄厚的“金三角”。
湘潭自古为湖南重镇，自唐设湘潭县，历代都为县治。
1950年设立湘潭市。
境内地势西高东低，南北高中部低。
湘乡境内的白云峰海拔802米，为全市最高点，市区易家湾海拔仅29.6米，为全市最低点。
气候四季分明，冬冷夏热，光照充足，雨量丰沛，无霜期长。
年平均气温摄氏16.7－17.4度。
年降雨量为1200－1445毫米。
湘潭交通便利，通讯发达。
湘江贯穿市区，水路货物可由长江出海。
北京至深圳107国道和上海至昆明的320国道及正在建设的上瑞高速公路均在市区交汇、穿越。
京广、湘黔铁路通过市境，并有广州至韶山的直达旅游列车。
市中心从长潭高速公路至长沙黄花机场只需30余分钟。
航空：
湘潭至黄花国际机场路程仅需30分钟，已开通39条航线，可直飞北京、上海、深圳、香港、曼谷等大中城市。
铁路：
湘黔线横贯市境，京广线在市区经过，10余家大型企业各有铁路专线与这两大主干线相通。
公路：
湘潭公路四通八达，107国道和320国道构成境内公路网的主干，上瑞高速、京珠高速公路穿城而过，辖区内与高速公路的连接口达15个，湘潭为全国地级市高速公路最密集的地区，公路密度大大高于全国和全省平均水平。
港口：
湖南省最大的河流湘江穿过市区，湘潭有集装箱码头，千吨级货轮常年可经洞庭湖，达长江，出上海。
湘潭这座古老而今焕发青春的城市，已列入中国甲类开放城市，被称为"中国湘莲之乡"的莲城以崭新的面貌让人领略到"芙蓉国里尽朝晖"的美好境界。
1．2．2选址的可行性
湘潭教育发达，有湘潭大学、湖南科技大学、湖南工程学院等十几所大中专院校，科技实力雄厚，劳动力素质较高。
为进一步加大对外开放的力度，创造良好的投资环境。
近年来湘潭加大城市基础设施建设。
水、电、气、路基本配套，文化、卫生、体育设施齐全，交通通讯便捷，已成为贯通湖南南北高新技术走廊的核心部分。
在市区黄金宝地建立了高新技术开发区、昭山旅游经贸开发区、九华工业基地，并提供优惠政策，大力开展招商引资。
而且羊轱塘正式湘潭大学的所在地。
经过复校20多年的建设，湘潭大学已经拥有了一批基础较好的学科。
如流变学、凝聚态物理、计算数学、基础数学、高分子化学与物理、马克思主义哲学、中共党史、经济学、诉讼法学等，在国内外均具有一定地位。
近年来，湘潭大学实施争高级别项目、出高水平成果获高层次奖励的科技振兴战略，科技工作进展很快。
仅“八•五”期间，就承担了国家级科研项目37项，省部级以上项目92项，在国内外公开发表论文9700余篇，出版专著600余部，140多项应用性成果通过鉴定，获国家、省部级奖励94项。
所以我们选择在这里建厂各种条件比较不错。
第二章工艺流程
本次设计就是利用特高异性的单克隆抗体作为包被用抗体，值得注意的是，由于单克隆抗体仅针对相应抗原分子上某一抗原决定簌，在应用于ELISA的双抗体夹心法时，包被的抗体与该抗原决定簌结合后，使被结合的抗原不再与酶标记抗体起作用而呈现假阴性反应。
即使应用两种针对不同抗原决定簌的可龙抗体检测具有两种不同决定簌的抗原，也应该考虑“空间位阻”效应，即两个决定簌相邻近时也可以产生ELISA反应阴性。
因此，本设计采用单克隆抗体作为包被用抗体，而采用多克隆抗体作为与酶交联的抗体，目的在于避免上述假阴性现象的出现。
ELISA板的生产步骤：
试剂准备→洗涤ELISA板→包被→洗涤→检测→封闭→洗涤干燥→分装入库→质量监控
结合物的制备流程：
入库提取原料→过碘酸钠氧化反应→洗涤→纯化→确定最佳工作浓度→分装保存
ELISA中有三个必要的试剂：
免疫吸附剂、结合物和酶的底物。
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：
（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；
（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。
2.1 免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2-8℃）干燥的条件下一般可保存6个月。
有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。
以下简述固相载体和包被过程。
2.1.1固相载体
固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。
可作ELISA中载体的材料很多，最常用的是聚苯乙烯。
聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。
聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。
ELISA载体的形状主要有三种：
微量滴定板、小珠和小试管。
以微量滴定板最为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。
为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。
ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。
现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。
聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。
良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。
聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能。
常用的检查方法为：
以一定浓度的人IgG（一般为10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。
控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。
计算全部读数的平均值。
所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。
与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯，作为ELISA固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可剪割，价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。
聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。
为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣，可应用如下的试验：
用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的ELISA操作步骤进行测定，然后比较结果。
在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大，这种载体就是这一ELISA测定项目的最合适的固相载体。
在ELISA中，用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。
ELISA板孔的吸附面积约为200mm2，小珠均为1000mm2，将近ELISA板孔的5倍。
吸附面积的增大即意味着固相抗原或抗体量的增加。
再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于最佳反应状态，因此珠式ELISA的反应往往更为灵敏。
小珠的另一特点是更易于使洗涤彻底，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中滚动淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。
但由于磨砂工艺的难度较大，小珠的均一性较差。
小试管作为固相载体也有较大的吸附表面，而且标本的反应量也相应增加。
板式及珠式ELISA的标本量一般为100-200µl，而小试管可根据需要加大反应体积，标本反应量的增加有助于试验敏感性的提高。
小试管还可以当作比色杯，最后直接放入分光光度计中比色。
也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为ELISA固相载体的。
其优点是表面积极大，反应在悬液中进行，其速率与液相反应近似。
以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体，反应后用磁铁的吸引进行分离，洗涤方便，试剂盒一般均配以特殊仪器。
2.1.2包被的方式
将抗原或抗体固定在过程称为包被（coating）。
换言之，包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。
蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用于。
这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。
载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。
IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联结多发生在Fc段上，抗体结合点暴露于外，因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。
蛋白质抗原大多也可采用与抗体相似的方法包被。
当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充分暴露，在这种情况下，直接包被效果不佳，可以采用间接的捕获包被法，即先将针对该抗原的特异抗体作预包被，其后通过抗原抗体反应使抗原固相化。
此间接结合在固相上的抗原远离载体表面，其抗原决定簇也得以充分暴露。
间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大提高，因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法，试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。
间接包被的另一优点是抗原用量少，仅为直接包被的1/10乃至于/100。
不易吸附在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可采用特殊的包被方式。
例如，在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。
可将聚苯乙烯板先经紫外线照射（例如30W紫外灯，75cm照射12h），以增加其吸附性能。
固相载体先用碱性蛋白质，如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被，也可提高核酸的结合力。
也可用亲和素生物素系统作间接包被，即用亲和素先包被载体，然后加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。
脂类物质无法与固相载体结合，可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。
抗心磷脂抗体的ELISA试剂一般采用这种包被方式。
2.1.3包被用抗原
用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。
天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。
如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例如AFP从脐带血或胎肝中提取）。
重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。
重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。
以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份，用于ELISA，在反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。
重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。
例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。
目前检测抗HCVELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。
在传染病诊断中，不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。
合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。
多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。
多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质（BSA）等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。
应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。
一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。
另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。
2.1.4包被用抗体
包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性，可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。
如免疫用抗原中含有杂质（即便是极微量的），在抗血清中将出现杂抗体，必须除去（可用吸收法）后才能用于ELISA，以保证试验的特异性。
抗血清不能直接用于包被，应先提取IgG，通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。
一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被，高度纯化的IgG性质不稳定。
如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性，则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。
腹水中单抗的浓度较高，特异性亦较强，因此不需要作吸收和亲和层析处理，一般可将腹水作适当稀释后直接包被，必要时也可用纯化的IgG。
应用单抗包被时应注意，一种单抗仅针对一种抗原决定簇，在某些情况下，用多种单抗混合包被，可取得更好的效果。
2.1.5包被的条件
包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。
抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7-8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。
通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置过夜，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。
包被的最适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。
一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20µg/ml。
2.1.6封闭
封闭（blocking）是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。
抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。
封闭的手续与包被相类似。
最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。
脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，其最大的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）。
高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用，但由于奶粉的成份复杂，而且封闭后的载体不易长期保存，因此在试剂盒的制备中较少应用。
封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。
并非所有的ELISA固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底增高。
一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。
特别是用单抗腹水直接包被时，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用。
但在间接法测定中，封闭一般是不可少的。
包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或锡袋中，在低温可保存数月。
2.2 结合物
结合物即酶标记的抗体（或抗原），是ELISA中最关键的试剂。
良好的结合物应该是既保有酶的催化活性，也保持了抗体（或抗原）的免疫活性。
结合物中酶与抗体（或抗原）之间有恰当的分子比例，在结合试剂中应尽量不含有或少含有游离的（未结合的）酶或游离的抗体（或抗原）。
此外，结合物尚要有良好的稳定性。
2.2.1 酶
用于ELISA的酶应符合以下要求：
纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，制备成酶结合物后仍继续保留它的活性部分和催化能力。
最好在受检标本中不存在相同的酶。
另外，它的相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等。
在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase,HRP）和碱性磷酸酶（alkalinephosohatase,AP）。
在少数商品ELISA试剂中，应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。
国产ELISA试剂一般都用HRP制备结合物。
HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，分子量为44000，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质。
主酶无色糖蛋白在275nm波长处有最高吸收峰，辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。
HRP的纯度用RZ（ReinheitZahl，德文，意为纯度数）表示，是403nm的吸光度与280nm吸光度之比，高纯度的HRP的RZ≥7.0。
HRP除符合上述的ELISA中标记酶的要求外，更有价格低廉和性质较稳定的特点。
值得注意的是，在选用酶制剂时，除其纯度RZ外，更应注意酶的活力。
高纯度的酶如保存不当，活力也会降
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