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医学标书例文

河南省科技攻关计划项目

申请书

姓名：

LuoBinjie

项目名称：

miRNA与膀胱癌诊断，临床治疗的相关研究

单位：

郑州大学

联系电话：

填报说明

请根据自己的专业及研究方向，针对某具体临床问题，结合所学习临床科研方法的一种或几种写出一份科研设计。

完成后，文件以个人姓名命名，发至：

*****************。

考核成绩依设计书优略评定。

截至日期2013年11月8日。

一、项目的立项依据和意义（说明国内外相关领域技术发展水平和趋势等）

全国肿瘤登记地区膀胱癌发病率为7.49/10万，世界人口标化发病率（世标率）为4.53/10万，膀胱癌居中国男性泌尿生殖系恶性肿瘤发病率第1位,居中国恶性肿瘤发病率第8位，居中国男性恶性肿瘤发病率第6位，全国肿瘤登记人口膀胱癌发病率,呈现逐年增长趋势［1］。

孙思邈《千金要方·卷一·诊候》：

“古之善为医者，上医医未病之病，中医医欲病之病，下医医已病之病。

在医学如此高速发展的今天，我们显然不会满足大多数“发现无痛性肉眼血尿--进行膀胱镜检--再行手术切除—膀胱灌注”的这一套最常见的膀胱癌诊治流程。

介入科韩新巍教授说过未来医学是微创和介入医学的为主导的，内外科为辅助的医学。

显然对miRNA的探求能对膀胱癌的诊治带来前所未有的契机。

微小核糖核酸（microRNA，miRNA）在转录后水平对基因的表达进行调控。

miRNA在膀胱癌的演进过程中发挥着类似于癌基因或抑癌基因的作用。

目前研究表明，对miRNA的调控可为临床膀胱癌的诊治提供一个新的靶点，提高膀胱癌患者的远期生存率和生活质量［2］。

1：

关于miRNA:

miRNAs是一类大小为19个～25个碱基的单小分子RNA。

在细胞核内，它本身不编码蛋白，但是可调节其他基因的翻译表达。

miRNA初级产物在RNA聚合酶Ⅱ作用下合成miRNA转录前体（Pri‐miRNA），然后经RNA聚合酶Ⅲ（Drosha酶）和DGCR８蛋白加工后，形成发卡环结构的miRNA前体（PrecursormiRNA，premiRNA），最终被转运体Exportin５转运至细胞质，由核酸酶Dicer剪切形成RNA诱导的沉默复合体（RNA‐inducedsilencingcomplex，RISC）。

miRNA通过与靶mRNA特异碱基配对而引起靶miRNA的降解或翻译抑制，在转录后水平调控基因表达，从而调控肿瘤细胞的增殖和凋亡。

细胞可分泌含miRNA的复合物进入体液，如尿液、血液、唾液、母乳。

一种miRNA可靶向一个或者多个mRNA，多种miRNA也可同时靶向一个mRNA。

因此，异常表达的miRNA不仅能致癌而且有肿瘤抑制的功能。

2：

miRNA与膀胱癌的关系的研究趋势及范围

表1：

部分膀胱癌相关miRNAs的差异表达（数据来源于《miRNAs在膀胱癌诊治中的研究进展》）

miRNAmiRNA表达变化推测靶基因

miRNA-１９a上调PTEN

miRNA-２２２上调

miRNA‐９９a／１００下调FOXA１

miRNA‐１下调IncRNAUCA１

miRNA‐２４‐１下调FOXM１

miRNA‐１４５下调PAK１

miRNA‐１０１下调

miRNA‐１２６下调ADAM９

miRNA‐１２５b下调SIRT７，MALAT１

表2：

miRNA表达水平变化与膀胱尿路上皮癌的关系［3］

表3：

miRNA家族的一些机制细分

3.国内外相关研究成果

I：

miRNA与膀胱癌早期诊断的一些研究发现

Tolle等在血液中和尿液中不同表达的miRNAs来发现膀胱癌，采用数据库来源于theSangerdatabasev１４的基因芯片分析，在血液中，miRNA‐２６b‐５p、miRNA‐１４４‐５p、miRNA‐３７４‐５p在浸润性膀胱癌中高表达，而且miRNA‐２６b‐５p特异度为９４％，敏感度为６５％。

在尿液中miRNA‐６１８、miRNA‐１２５５b‐５p在浸润性膀胱癌中高表达，而且miRNA‐１２５５b‐５p特异度为６８％，敏感度为８５％。

由此推断，根据血液、尿液中一些特异的miRNAs来诊断浸润性膀胱癌成为一种可能［4］。

Zhang等检测９７例膀胱癌患者手术标本的癌组织和邻近正常组织miRNA‐２２２表达水平，分析它们与临床病理参数和预后评估相关性。

结果显示肿瘤组织miRNA‐２２２的表达水平显著高于相应的非癌组织（P＜０．０００１）。

Kaplan‐Meier分析表明，具有较高miR‐２２２表达水平的患者与低表达水平患者相比较，５年生存率分别为２９．５３％和５２．７５％。

其中包括miRNA‐２２２过表达，肿瘤病理分级，肿瘤分期和肿瘤数目的多变量Cox回归分析，miRNA‐２２２的过表达与较差存活率独立相关（HR６．１７，９５％CI：

２．３３～１０．３９，P＜０．００１）。

miRNA‐２２２的过表达提示膀胱癌预后不良，并且可以被用来作为警示预后不良的生物标志物［5］。

Feng等利用Taqman探针茎－环法PCR精确测量１００对患者的膀胱癌组织、相邻的非肿瘤组织、膀胱癌患者和正常人对照的血浆miRNA‐１９a水平。

用miRNA‐１９a模拟和抑制剂转染膀胱癌细胞。

结果发现miRNA‐１９a在膀胱癌组织中显著上调，而且miRNA‐１９a的表达水平与癌细胞的侵袭能力相对应。

同时，获得或丢失miRNA‐１９a的功能性试验印证了它可能在膀胱癌的发展中起癌基因作用。

此外，膀胱癌患者的血浆中检出的miRNA‐１９a支持发展为膀胱癌的潜在诊断标记物。

另一组研究者利用互补的反义核酸转染到原先上调的miRNAs，发现其表达明显受到抑制，并检测出肿瘤细胞增殖明显减缓［6］。

Zhu等通过小干扰RNA（siRNA）和miRNA‐１４５介导的IGF‐IR的敲除实验揭示了miRNA‐１４５促进癌细胞凋亡，进一步分析发现主要通过影响的IGF‐IR信号传导，以抑制IGF‐IR的表达，抑

制癌细胞增殖和迁移，起到抑癌基因的作用。

另一组研究者发现膀胱癌中miRNA‐３４a、miRNA‐１００、miRNA‐１４９、miRNA‐３４０均体现为抑癌基因的作用。

他们采用转染的方式上调其表达，发现癌细胞增殖、分化能力明显受抑制，而且侵袭、迁移能力也减弱，印证了它抑癌基因作用的推测［7］.（检测出来了说明对于膀胱癌患者是好的）

II:

miRNA与膀胱癌的治疗

Li等研究发现，以顺铂为基础的化疗诱导了miRNA‐３４a的启动子去甲基化，增加miRNA‐３４a的表达，反过来增强了肌层侵入性膀胱癌细胞对顺铂的敏感性，降低了癌细胞侵袭性和增殖能

力［8］。

Kozinn等根据miRNAs的变化来预测是否对吉西他滨有抵抗性，研究结果提示miRNA‐１２９０、miRNA‐１３８、miRNA‐let‐７i、miRNA‐let‐７b通过调节黏蛋白４，使吉西他滨产生耐药性。

由此设想，通过调控的特定miRNAs的表达或者影响其上游基因信息传递通路，可以增强膀胱癌化疗的敏感性以及减少其耐药性［9］。

把表达p５３基因的腺病毒载体和靶向于CDKN１A基因的人工miRNA转染进入癌细胞可增加癌细胞对阿霉素的化疗敏感性；miRNA‐５２１的表达增加可通过靶向DNA修复酶位点增强肿瘤细胞在辐射中的敏感性［10］.

为解决临床膀胱癌患者对顺铂耐药的问题，Drayton等研究发现SLC７A１１基因的表达与miRNA‐２７a的表达呈负相关，当miRNA‐２７a高表达或者通过siRNA、柳氮磺胺吡啶降低SLC７A１１基因的活性时，耐药的膀胱癌细胞株的致敏性得以恢复，由此可推测miRNA‐２７a可作为治疗膀胱癌患者对顺铂耐药的一条途径［11］。

……

4：

选取自己感兴趣的mi-RNA家族成员进行研究

相关研究表明mi-RNA99a作为一个肿瘤抑制因子，在膀胱癌中水平降低，有降低尿路上皮癌侵袭性可能。

其他相关研究：

mi-RNA在人类可以通过靶基因mTOR促进食管鳞状细胞的凋亡［12］，mi-RNA的低表达也能促进口腔鳞癌细胞的增殖［13］。

那么它的高表达是否意味着膀胱癌患者癌细胞同样受到抑制，提示着患者预后较好？

或者依据miRNAs表达的时序性和组织特异性特征，可以探索膀胱癌各个发展阶段中的特定miRNA表达谱，用于判断膀胱癌恶性程度和临床分期？

或者是提前通过测量其相关调控基因产物预测患者患膀胱肿瘤风险？

或者是了解它的表达是否能增强治疗膀胱肿瘤药物的敏感性及耐药性等？

我选取一个比较小的研究点：

研究可以反其道而行之，根据临床上已经确诊的膀胱癌的标本或者细胞株来测量mi-RNA的含量，同时测量一定标本正常人群mi-RNA的含量，来推测膀胱尿路上皮癌各个发展阶段中的特定miRNA表达谱是否与膀胱癌恶性程度和临床分期存在着某些统计学上的联系。

［1］：

韩苏军,张思维，陈万青，李长岭。

《中国膀胱癌发病现状及流行趋势分析》。

中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所，泌尿外科。

［2］：

梁敏，王海峰，王剑松。

《miRNAs在膀胱癌诊治中的研究进展》。

医学与哲学2015年6月第36卷第6B期总第527期。

［3］孙阳综述,郭剑明审校.《miRNA调控与膀胱癌的关系研究进展》。

InternationalJournalofUrologyandNephmlogy。

Jan2011．V01．31NO．I

［4］TolleA，JungM，RabenhorstS，etal．IdentificationofmicroRNAsinbloodandurineastumourmarkersforthedetectionofurinarybladdercancer［J］．OncolRep，2013，30（4）：

1949－1956．

［5］ZhangDQ，ZhouCK，JiangXW，etal．IncreasedexpressionofmiRNA‐222isassociatedwithpoorprognosisinbladdercancer［J］．WorldJSurgOncol，2014，12：

241．

［6］张　明，魏　巍，刘禄成，等．反义微小RNA‐21对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响［J］．吉林大学学报：

医学版，2010，36（3）：

450－452．

［7］张　超，姚志勇，朱鸣阳，等．microRNA‐34a通过Notch１对膀胱肿瘤细胞株T24增殖的影响［J］．解放军医学杂志，2012，37（5）：

426－430．

［8］LiH，YuG，ShiR，etal．Cisplatin‐inducedepigeneticactivationofmiR‐34asensitizesbladdercancercellstochemotherapy［J］．MolCancer，2014，13

（1）：

8．

［9］KozinnSI，HartyNJ，DelongJM，etal．MicroRNAProfiletoPredictGemictabineResistanceinBladderCarcinomaCellLine［J］．GenesCancer，2013，4（1/2）：

61-69．

［