分子生物学笔记干细胞.docx
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分子生物学笔记干细胞
干细胞
1干细胞概述
▪胚胎干细胞的分化性
▪成体干细胞的可塑性
▪按照发育阶段分类
▪胚胎干细胞（EmbryonicStemcell，ES细胞）。
▪成体
▪造血
▪神经
▪肌肉
▪骨髓
2干细胞应用研究
▪美容领域
▪器官移植
▪疾病治疗
▪生物修复
干细胞概述编辑
干（gàn）细胞即为起源细胞。
干细胞是具有增殖和分化潜能的细胞，具有自我更新复制的能力（Self-renewing），能够产生高度分化的功能细胞。
简单来讲，它是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。
干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。
干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。
干细胞是自我复制还是分化功能细胞，主要由于细胞本身的状态和微环境因素所决定。
包括调节细胞周期的各种周期素（Cyclin）和周期素依赖激酶（Cyclin－DependentKinase）、基因转录因子、影响细胞不对称分裂的细胞质因子。
微环境因素，包括干细胞与周围细胞，干细胞与外基质以及干细胞与各种可溶性因子的相互作用。
人体内的干细胞分两种类型，一种是全功能干细胞（totipotentstemcell），可直接克隆人体；另一种是多功能干细胞（pluripotentstemcell），可直接复制各种脏器和修复组织。
人类寄希望于利用干细胞的分离和体外培养，在体外繁育出组织或器官，并最终通过组织或器官移植，实现对临床疾病的治疗。
“原位培植皮肤干细胞再生新皮肤技术”不仅实现了利用干细胞复制皮肤器官，而且做到了人体原位皮肤器官的复制，从而使人类从干细胞体外培植组织成器官移植治疗，直接跨入了人体原位干细胞复制器官。
科学家普遍认为：
干细胞的研究将为临床医学提供更为广阔的应用前景。
干细胞具有经培养不定期地分化并产生特化细胞的能力。
在正常的人体发育环境中，它们得到了最好的诠释。
人体发育起始于卵子的受精，产生一个能发育为完整有机体潜能的单细胞，即全能性受精卵。
受精后的最初几个小时内，受精卵分裂为一些完全相同的全能细胞。
这意味着如果把这些细胞的任何一个放入女性子宫内，均有可能发育成胎儿。
实际上，当两个全能细胞分别发育为单独遗传基因型的人时，即出现了各方面都完全相同的双胞胎。
大约在受精后四天，经过几个循环的细胞分裂之后，这些全能细胞开始特异化，形成一个中空环形的细胞群结构，称之为胚囊，胚囊由外层细胞和位于中空球形内的细胞簇（称为内细胞群）所构成。
外层细胞继续发展，形成胎盘以及胎儿在子宫内发育所需的其它支持组织。
内细胞群细胞亦继续发育，形成人体所须的全部组织。
尽管内细胞群可形成人体内的所有组织，但它们不能发育为一个单独的生物体，因为它们不能形成胎盘以及子宫内发育所需的支持组织。
这些内细胞群细胞是多能性的----它们能产生许多种类型的细胞，但并非胎儿发育所需的全部细胞类型。
因为它们不是全能性的，不是胚胎，没有完全的发育潜能。
如果内细胞群被放入女性子宫，它不会发育成胎儿。
多能性干细胞经历进一步的特异分化，发展为参与生成特殊功能细胞的干细胞。
如造血干细胞，它能产生红细胞、白细胞和血小板。
又如皮肤干细胞，它能产生各种类型的皮肤细胞。
这些更专门化的干细胞被称为专能干细胞。
胚胎干细胞（Embryonicstemcell）的发育等级较高，是全能干细胞（Totipotentstemcell），而成体干细胞的发育等级较低，是多能干细胞或单能干细胞。
干细胞的发育受多种内在机制和微环境因素的影响。
人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。
最新研究发现，成体干细胞可以横向分化为其他类型的细胞和组织，为干细胞的广泛应用提供了基础。
在胚胎的发生发育中，单个受精卵可以分裂发育为多细胞的组织或器官。
胚胎的分化形成和成体组织的再生是干细胞进一步分化的结果。
胚胎干细胞是全能的，具有分化为几乎全部组织和器官的能力。
而成体组织或器官内的干细胞一般认为具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织。
最新的研究表明，组织特异性干细胞同样具有分化成其他细胞或组织的潜能，这为干细胞的应用开创了更广泛的空间。
干细胞对早期人体的发育特别重要，在儿童和成年人中也可发现专能干细胞。
举我们所最熟知的干细胞之一，造血干细胞为例，造血干细胞存在于每个儿童和成年人的骨髓之中，也存在于循环血液中，但数量非常少。
在我们的整个生命过程中，造血干细胞在不断地向人体补充血细胞——红细胞、白细胞和血小板的过程中起着很关键的作用。
如果没有造血干细胞，我们就无法存活。
干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。
人类胚胎干细胞已成功地在体外培养。
最新研究发现，成体干细胞可以横向分化为其它类型的细胞和组织，为干细胞的广泛应用提供了基础。
在胚胎的发生发育中，单个受精卵可以分裂发育为多细胞组织或器官。
在成年动物中，正常的生理代谢或病理损伤也会引起组织或器官的修复再生。
胚胎的分化形成和成年组织的再生是干细胞进一步分化的结果。
胚胎干细胞是全能的，具有分化为几乎全部组织和器官的能力。
而成年组织或器官内的干细胞一般认为具有组织特异性，只能分化特定的细胞或组织。
然而，这个观点受到了挑战。
最新的研究表明，组织特异性干细胞同样具有分化成其它细胞或组织的潜能，这为干细胞的应用开创了更广泛的空间。
按分化潜能的大小，干细胞基本上可分为三种类型：
一类是全能性干细胞，它具有形成完整个体的分化潜能。
如胚胎干细胞，它是从早期胚胎内的细胞团分离出来的一种高度未分化的细胞系，具有与早期胚胎细胞相似的形态特征和很强的分化能力，它可以无限增殖并分化成为全身200多种细胞类型，进一步形成机体的所有组织、器官。
另一类是多能性干细胞，这种干细胞具有分化出多种细胞组织的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制，骨髓多能造血干细胞是典型的例子，它可分化出至少十一中血细胞，但不分化出造血系统以外的其他细胞。
还有一类干细胞为单能干细胞（也称专能、偏能干细胞），这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化，如上皮组织基底层的干细胞、肌肉中的成肌细胞。
总之，凡需要不断产生新的分化细胞以及分化细胞本身不能再分裂的细胞或组织，都要通过干细胞所产生的具有分化能力的细胞来维持肌体细胞的数量，可以这样说，生命是通过干细胞的分裂来实现细胞的更新及保证持续生长。
胚胎干细胞的分化性
胚胎干细胞具有万能分化性（pluripotency）功能，特点是可以细胞分化（Cellulardifferentiation）成多种组织的能力，但无法独自发育成一个个体。
它可以差转成为外胚层、中胚层及内胚层三种胚层的成员，然后再差转成为人体的220多种细胞种类。
万能分化性是胚胎干细胞与在成年人体内可找到的多功能干细胞的主要分别：
多功能干细胞只能差转成为某几种特定的细胞种类。
在无外界提供差转的刺激之下（即可在实验环境下生长），胚胎干细胞在经过多重细胞分裂之后，仍然能保有万能分化性。
成人干细胞能否保有万能分化性，直到现在仍然有争议。
不过，有研究已示范了万能干细胞可以从成纤维细胞集丛产生出来。
成体干细胞的可塑性
越来越多的证据表明，当成体干细胞被移植入受体中，它们表现出很强的可塑性。
通常情况下，供体的干细胞在受体中分化为与其组织来源一致的细胞。
而在某些情况下干细胞的分化并不遵循这种规律。
1999年Goodell等人分离出小鼠的肌肉干细胞，体外培养5天后，与少量的骨髓间质细胞一起移植入接受致死量辐射的小鼠中，结果发现肌肉干细胞会分化为各种血细胞系。
这种现象被称为干细胞的横向分化（trans-differentiation）[5]。
关于横向分化的调控机制还不清楚。
大多数观点认为干细胞的分化与微环境密切相关。
可能的机制是，干细胞进入新的微环境后，对分化信号的反应受到周围正在进行分化的细胞的影响，从而对新的微环境中的调节信号做出反应。
克隆猪、克隆羊，其技术的机制原理和干细胞是一致的。
按照发育阶段分类
胚胎干细胞（EmbryonicStemCell）和成体干细胞（AdultStemCell）。
1、胚胎干细胞包括ES细胞（EmbryonicStemCell）、EG细胞（EmbryonicGermCell）
2、成体干细胞包括神经干细胞（NeuralStemCe11，NSC）、血液干细胞（HematopoieticStemCell，HSC）、骨髓间充质干细胞（MesenchymalStemCell，MSC）、表皮干细胞（EPidexmisStemCell）等。
按分化潜能，干细胞可分为，全能干细胞，亚全能干细胞，多能干细胞，单能干细胞。
全能干细胞：
具有形成完整个体的分化潜能，如受精卵
亚全能干细胞：
为人类体内存在为数不多的三胚层分化潜能干细胞
多能干细胞：
具有分化出多种细胞组织的潜能。
如胚胎干细胞（ES）
单能干细胞：
只能向一种或两种密切相关的细胞类型分化。
如神经干细胞、造血干细胞
胚胎干细胞：
ES细胞是一种高度未分化细胞。
它具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。
研究和利用ES细胞是当前生物工程领域的核心问题之一。
在未来几年，ES细胞移植和其它先进生物技术的联合应用很可能在移植医学领域引发革命性进步。
胚胎干细胞可来源于畸胎瘤细胞（EC）、桑椹球细胞（ES）、囊胚内细胞团（ES）、拟胚体细胞（ES）、生殖原基细胞（EG）等。
当受精卵分裂发育成囊胚时，将内细胞团（InnerCellMass）分离出来进行培养，在一定条件下，这些细胞可在体外“无限期”地增殖传代，同时还保持其全能性，因此被称为胚胎干细胞。
胚胎干细胞在培养条件下，若加入白血病抑制因子LIF（LeukaemiaInhlbitoryFactor），则能保持在未分化状态，若去掉LIF，胚胎干细胞迅速分化，最终产生多种细胞系，如肌肉细胞、血细胞、神经细胞或发育成“胚胎体”。
成体干细胞：
成年动物的许多组织和器官，比如表皮和造血系统，具有修复和再生的能力。
成体干细胞在其中起着关键的作用。
在特定条件下，成体干细胞或者产生新的干细胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。
成体干细胞可以由下列几个方面得到：
⑴胚胎细胞——由胚胎干细胞定向分化，或移植分化而成。
⑵胚胎组织——由分离胚胎组织、细胞分离、或培养而成。
⑶成体组织——由脐血、新生儿胎盘、骨髓、外周血、骨髓间质、脂肪细胞等得到。
造血干细胞：
造血干细胞是体内各种血细胞的唯一来源，它主要存在于骨髓、外周血、脐带血中。
造血干细胞的移植是治疗血液系统疾病、先天性遗传疾病以及多发性转移性肿瘤疾病的最有效方法。
与骨髓移植和外周血干细胞移植相比，脐血干细胞移植的长处在于无来源的限制，对HLA配型要求不高，不易受病毒或肿瘤的污染。
神经干细胞：
神经干细胞的研究尚处初级阶段。
理论上讲，任何一种中枢神经疾病都可归结为神经干细胞功能的紊乱。
给帕金森氏综合症患者的脑内移植含有多巴胺生成细胞的神经细胞，可治愈部分患者的症状。
周边血干细胞：
骨髓中存有人体内最主要造血干细胞的来源,而周边血干细胞则是指借由施打白细胞生长激素（G-CSF）,将骨髓中的干细胞驱动至血液中,再经由血液分离机收集取得之干细胞.由于与骨髓干细胞极为相近,现已逐渐取代需要全身麻醉的骨髓抽取手术.
脂肪干细胞：
以往人们因塑身而抽出的脂肪,大部分都当废弃物丢掉,现经由医学专家研究证,脂肪中含有大量的间质干细胞,间质干细胞具有体外增生及多重分化的潜力,能运用于组织与器官的再生与修复.
骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSC）：
是干细胞家族的重要成员,来源于发育早期的中胚层和外胚层.MSC最初在骨髓中发现,因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注.如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下,可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞,连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能,可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复.骨髓间充质干细胞由于其来源广泛,易于分离培养,并且具有较强的分化潜能和可自体移植等优点,越来越受到学者们的青睐,被认为是不久即将被引入临床治疗的最优干细胞.
心脏干细胞:
以色列的科学家研究出了一种用干细胞做成的心脏，这是由干细胞的分裂形成的。
胎盘造血干细胞:
胎盘是胎儿和母亲血液交换的场所，含有非常丰富的血液微循环。
人在母亲子宫内发育的阶段，胎盘是首先形成的器官之一。
胎盘中含有大量的早期干细胞，包括数量丰富的造血干细胞。
这些干细胞在胎盘中行使着造血的功能。
小孩出生后剥离的胎盘内所含的造血干细胞，可以分化形成各种血细胞（红细胞、白细胞、血小板等）的祖宗，注射到体内可以发挥造血功能。
胎盘亚全能干细胞:
亚全能干细胞自胚胎形成的第5到7天开始出现，能分化形成200多种人体组织器官细胞，但不能形成一个完整的人体。
胎盘亚全能干细胞是来源于新生儿胎盘组织的一族亚全能干细胞，其在发育阶段与胚胎干细胞接近，具备分化形成三个胚层的组织细胞的能力，但不会形成畸胎瘤。
羊膜干细胞:
来源于羊膜上皮，表达多种胚胎干细胞的标志物，具有多系分化的能力，其分化能力超过骨髓来源的间充质干细胞，具有较低的免疫原性。
胚胎干细胞（EmbryonicStemcell，ES细胞）
胚胎干细胞当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团（InnerCellMass）的细胞即为胚胎干细胞。
胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。
早在1970年MartinEvans已从小鼠中分离出胚胎干细胞并在体外进行培养。
而人的胚胎干细胞的体外培养才获得成功。
进一步说，胚胎干细胞（ES细胞）是一种高度未分化细胞。
ES细胞的研究可追溯到上世纪五十年代，由于畸胎瘤干细胞（EC细胞）的发现开始了ES细胞的生物学研究历程。
许多研究工作都是以小鼠ES细胞为研究对象展开的，如：
德美医学小组在成功的向试验鼠体内移植了由ES细胞培养出的神经胶质细胞。
密苏里的研究人员通过鼠胚细胞移植技术，使瘫痪的猫恢复了部分肢体活动能力。
随着ES细胞的研究日益深入，生命科学家对人类ES细胞的了解迈入了一个新的阶段。
在98年末，两个研究小组成功的培养出人类ES细胞，保持了ES细胞分化为各种体细胞的全能性。
这样就使科学家利用人类ES细胞治疗各种疾病成为可能。
然而，人类ES细胞的研究工作引起了全世界范围内的很大争议，出于社会伦理学方面的原因，有些国家甚至明令禁止进行人类ES细胞研究。
无论从基础研究角度来讲还是从临床应用方面来看，人类ES细胞带给人类的益处远远大于在伦理方面可能造成的负面影响，因此要求展开人类ES细胞研究的呼声也一浪高似一浪。
成体
过去认为成体干细胞主要包括上皮干细胞和造血干细胞。
研究表明，以往认为不能再生的神经组织仍然包含神经干细胞，说明成体干细胞普遍存在，问题是如何寻找和分离各种组织特异性干细胞。
成体干细胞经常位于特定的微环境中。
微环境中的间质细胞能够产生一系列生长因子或配体，与干细胞相互作用，控制干细胞的更新和分化。
造血
造血干细胞是体内各种血细胞的唯一来源，它主要存在于骨髓、外周血、脐带血中、胎盘组织中。
协和医大血液学研究所的庞文新又在肌肉组织中发现了具有造血潜能的干细胞。
造血干细胞的移植是治疗血液系统疾病、先天性遗传疾病以及多发性和转移性恶性肿瘤疾病的最有效方法。
在临床治疗中，造血干细胞应用较早，在20世纪五十年代，临床上就开始应用骨髓移植（BMT）方法来治疗血液系统疾病。
到八十年代末，外周血干细胞移植（PBSCT）技术逐渐推广开来，绝大多数为自体外周血干细胞移植（APBSCT），在提高治疗有效率和缩短疗程方面优于常规治疗，且效果令人满意。
在东北地区首例脐血干细胞移植成功，又为中国造血干细胞移植技术注入新的活力。
随着脐血干细胞移植技术的不断完善，它可能会代替APBSCT的地位，为全世界更多的血液病及恶性肿瘤的患者带来福音。
神经
神经干细胞关于神经干细胞研究起步较晚，由于分离神经干细胞所需的胎儿脑组织较难取材，加之胚胎细胞研究的争议尚未平息，神经干细胞的研究仍处于初级阶段。
理论上讲，任何一种中枢神经系统疾病都可归结为神经干细胞功能的紊乱。
脑和脊髓由于血脑屏障的存在使之在干细胞移植到中枢神经系统后不会产生免疫排斥反应，如：
给帕金森氏综合症患者的脑内移植含有多巴胺生成细胞的神经干细胞，可治愈部分患者症状。
除此之外，神经干细胞的功能还可延伸到药物检测方面，对判断药物有效性、毒性有一定的作用。
实际上，到目前为止，人们对干细胞的了解仍存在许多盲区。
2000年年初美国研究人员无意中发现在胰腺中存有干细胞；加拿大研究人员在人、鼠、牛的视网膜中发现了始终处于“休眠状态的干细胞”；有些科学家证实骨髓干细胞可发育成肝细胞，脑干细胞可发育成血细胞。
随着干细胞研究领域向深度和广度不断扩展，人们对干细胞的了解也将更加全面。
21世纪是生命科学的时代，也是为人类的健康长寿创造世界奇迹的时代，干细胞的应用将有广阔前景。
肌肉
成肌细胞（myoblasts）可发育分化为成肌细胞（myocytes），后者可互相融合成为多核的肌纤维，形成骨骼肌最基本的结构。
骨髓
骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSC）是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。
骨髓间充质干细胞具有如下的优点：
一.具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下不仅可分化为造血细胞，还具有分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力。
二.具有免疫调节功能，从而发挥免疫重建的功能。
干细胞的调控是指给出适当的因子条件，对干细胞的增殖和分化进行调控，使之向指定的方向发展。
内源性调控
干细胞自身有许多调控因子可对外界信号起反应从而调节其增殖和分化，包括调节细胞不对称分裂的蛋白，控制基因表达的核因子等。
另外，干细胞在终末分化之前所进行的分裂次数也受到细胞内调控因子的制约。
⑴细胞内蛋白对干细胞分裂的调控：
干细胞分裂可能产生新的干细胞或分化的功能细胞。
这种分化的不对称是由于细胞本身成分的不均等分配和周围环境的作用造成的。
细胞的结构蛋白，特别是细胞骨架成分对细胞的发育非常重要。
如在果蝇卵巢中，调控干细胞不对称分裂的是一种称为收缩体的细胞器，包含有许多调节蛋白，如膜收缩蛋白和细胞周期素A。
收缩体与纺锤体的结合决定了干细胞分裂的部位，从而把维持干细胞性状所必需的成分保留在子代干细胞中。
⑵转录因子的调控：
在脊椎动物中，转录因子对干细胞分化的调节非常重要。
比如在胚胎干细胞的发生中，转录因子Oct4是必需的。
Oct4是一种哺乳动物早期胚胎细胞表达的转录因子，它诱导表达的靶基因产物是FGF-4等生长因子，能够通过生长因子的旁分泌作用调节干细胞以及周围滋养层的进一步分化。
Oct4缺失突变的胚胎只能发育到囊胚期，其内部细胞不能发育成内层细胞团。
另外白血病抑制因子（LIF）对培养的小鼠ES细胞的自我更新有促进作用，而对人的成体干细胞无作用，说明不同种属间的转录调控是不完全一致的。
又如Tcf/Lef转录因子家族对上皮干细胞的分化非常重要。
Tcf/Lef是Wnt信号通路的中间介质，当与β-Catenin形成转录复合物后，促使角质细胞转化为多能状态并分化为毛囊。
外源性调控
除内源性调控外，干细胞的分化还可受到其周围组织及细胞外基质等外源性因素的影响。
⑴分泌因子：
间质细胞能够分泌许多因子，维持干细胞的增殖，分化和存活。
有两类因子在不同组织甚至不同种属中都发挥重要作用，它们是TGFβ家族和Wnt信号通路。
比如TGF家族中至少有两个成员能够调节神经嵴干细胞的分化。
研究发现，胶质细胞衍生的神经营养因子（GDNF）不仅能够促进多种神经元的存活和分化，还对精原细胞的再生和分化有决定作用。
GDNF缺失的小鼠表现为干细胞数量的减少，而GDNF的过度表达导致未分化的精原细胞的累积[3]。
Wnts的作用机制是通过阻止β-Catenin分解从而激活Tcf/Lef介导的转录，促进干细胞的分化。
比如在线虫卵裂球的分裂中，邻近细胞诱导的Wnt信号通路能够控制纺锤体的起始和内胚层的分化。
⑵膜蛋白介导的细胞间的相互作用：
有些信号是通过细胞-细胞的直接接触起作用的。
β-Catenin就是一种介导细胞粘附连接的结构成分。
除此之外，穿膜蛋白Notch及其配体Delta或Jagged也对干细胞分化有重要影响。
在果蝇的感觉器官前体细胞，脊椎动物的胚胎及成年组织包括视网膜神经上皮、骨骼肌和血液系统中，Notch信号都起着非常重要的作用。
当Notch与其配体结合时，干细胞进行非分化性增殖；当Notch活性被抑制时，干细胞进入分化程序，发育为功能细胞[4]。
⑶整合素（Integrin）与细胞外基质：
整合素家族是介导干细胞与细胞外基质粘附的最主要的分子。
整合素与其配体的相互作用为干细胞的非分化增殖提供了适当的微环境。
比如当β1整合素丧失功能时，上皮干细胞逃脱了微环境的制约，分化成角质细胞。
此外细胞外基质通过调节β1整合素的表达和激活，从而影响干细胞的分布和分化方向。
干细胞的研究被认为开始于1960年代，在加拿大科学家恩尼斯特·莫科洛克和詹姆士·堤尔的研究之后。
1959年，美国首次报道了通过体外受精（ⅣF）动物。
60年代，几个近亲种系的小鼠睾丸畸胎瘤的研究表明其来源于胚胎生殖细胞（embryonicgermcells,EG细胞），此工作确立了胚胎癌细胞（embryoniccarcinomacells,EC细胞）是一种干细胞。
1968年，Edwards和Bavister在体外获得了第一个人卵子。
70年代，EC细胞注入小鼠胚泡产生杂合小鼠。
培养的SC细胞作为胚胎发育的模型，虽然其染色体的数目属于异常。
1978年，第一个试管婴儿，LouiseBrown在英国诞生。
1981年，Evan,Kaufman和Martin从小鼠胚泡内细胞群分离出小鼠ES细胞。
他们建立了小鼠ES细胞体外培养条件。
由这些细胞产生的细胞系有正常的二倍型，像原生殖细胞一样产生三个胚层的衍生物。
将ES细胞注入上鼠，能诱导形成畸胎瘤。
1984—1988年，Anderews等人从人睾丸畸胎瘤细胞系Tera-2中产生出多能的、可鉴定的（克隆化的）细胞，称之为胚胎癌细胞（embryoniccarcinomacells,EC细胞）。
克隆的人EC细胞在视黄酸的作用下分化形成神经元样细胞和其他类型的细胞。
1989年，Pera等分离了一个人EC细胞系，此细胞系能产生出三个胚层的组织。
这些细胞是非整倍体的（比正常细胞染色体多或少），他们在体外的分化潜能是有限的。
1994年，通过体外授精和病人捐献的人胚泡处于2-原核期。
胚泡内细胞群在培养中得以保存其周边有滋养层细胞聚集，ES样细胞位于中央。
1998年美国有两个小组分别培养出了人的多能（pluripotent）干细胞：
JamesA.Thomson在Wisconsin大学领导的研究小组从人胚胎组织中培养出了干细胞株。
他们使用的方法是：
人卵体外受精后，将胚胎培育到囊胚阶段，提取innercellmass细胞，建立细胞株。
经测试这些细胞株的细胞表面marker和酶活性，证实他们就是全能干细胞。
用这种方法，每个胚胎可取得15－20干细胞用于培养。
JohnD.Gearhart在JohnsHopkins大学领导的另一个研究小组也从人胚胎组织中建立了干细胞株。
他们的方法是：
从受精后5－9周人工流产的胚胎中提取生殖母细胞（primordialgermcell）。
由此培养的细胞株，证实
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