重点高中生物实验知识点总结.docx

重点高中生物实验知识点总结.docx

《重点高中生物实验知识点总结.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《重点高中生物实验知识点总结.docx（19页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

重点高中生物实验知识点总结

重点高中生物实验知识点总结

————————————————————————————————作者：

————————————————————————————————日期：

高中生物实验知识点总结

　一、光学显微镜的结构、呈像原理、放大倍数计算方法

结构：

光学部分：

目镜、镜筒、物镜、遮光器（有大小光圈）和反光镜（有平面镜和凹面镜）

机械部分：

镜座、倾斜关节、镜臂、载物台（上有通光孔、压片夹）、镜头转换器、粗、细准焦螺旋。

注：

目镜无旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越小；物镜有旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越大。

呈像原理：

映入眼球内的是倒立放大的虚像。

（物镜质量的优劣直接影响成像的清晰程度）

放大倍数：

目镜和物镜二者放大倍数的乘积）

注：

显微镜放大倍数是指直径倍数，即长度和宽度，而不是面积。

二、显微镜的使用：

置镜（装镜头）→对光→置片→调焦→观察

1．安放。

显微镜放置在桌前略偏左，距桌缘8—10cm处，装好物镜和目镜（目镜5×物镜10×）

2．对光。

转动转换器，使低倍镜对准通光孔，选取较大光圈对准通光孔。

左眼注视目镜，同时把反光镜转向光源，直至视野光亮均匀适度。

调节视野亮度只可用遮光器和反光镜，光线过强，改用较小光圈或用平面反光镜；光线过弱，改用较大光圈或用凹面反光镜。

选低倍镜→选较大的光圈→选反光镜（左眼观察）

3．观察。

将切片或装片放在载物台上，标本正对通光孔中心。

转动粗准焦螺旋（顺时针），俯首侧视镜筒慢慢下降，直到物镜接近切片（约0.5cm），左眼观察目镜，（反时针）旋转粗准焦螺旋，使镜筒慢慢上升，看到物像时轻微来回旋转细准焦，直到物像清晰。

（找不到物像时，可重复一次或移动装片使标本移至通光孔中心）。

．观察时两眼都要睁开，便于左眼观察，右眼看着画图。

侧面观察降镜筒→左眼观察找物像→细准焦螺旋调清晰

4．高倍镜的转换。

找到物像后，把要观察的物像移到视野中央，把低倍镜移走，换上高倍镜，只准用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰，直到物像清楚为止。

顺序：

移装片→转动镜头转换器→调反光镜或光圈→调细准焦螺旋

注：

换高倍物镜时只能移动转换器，换镜后，只准调节细准焦和反光镜（或光圈）。

问1：

低倍镜换为高倍镜后，若看不到或看不清原来的像，可能原因？

（ABC）

A、物像不在视野中B、焦距不在同一平面C、载玻片放反，盖玻片在下面D、未换目镜

问2：

放大倍数与视野的关系：

放大倍数越小，视野范围越大，看到的细胞数目越多，视野越亮，工作距离越长；

放大倍数越大，视野范围越小，看到的细胞数目越少，视野越暗，工作距离越短。

故装片不能反放。

5．装片的制作和移动：

制作：

滴清水→放材料→盖片

移动：

物像在何方，就将载玻片向何处移。

（原因：

物像移动的方向和实际移动玻片的方向相反）

6．污点判断：

1）污点随载玻片的移动而移动，则位于载玻片上；

2）污点不随载玻片移动，换目镜后消失，则位于目镜；换物镜后消失，则位于物镜；

3）污点不随载玻片移动，换镜后也不消失，则位于反光镜上。

7．完毕工作。

使用完毕后，取下装片，转动镜头转换器，逆时针旋出物镜，旋进镜头盒；取出目镜，插进镜头盒，盖上。

把显微镜放正。

实验一：

观察DNA、RNA在细胞中的分布（必修一P26）

一．实验目的：

初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法

二．实验原理：

1．甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。

利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。

2．盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色休中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。

三．方法步骤：

操作步骤注意问题解释

取口腔上皮细胞制片载玻片要洁净，滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液

用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞

将载玻片在酒精灯下烘干防止污迹干扰观察效果

保持细胞原有形态

消毒为防止感染，漱口避免取材失败

固定装片

水解将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸溶液中，用300C水浴保温5min改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，促进染色体的DNA与蛋白质分离而被染色

冲冼涂片用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10S洗去残留在外的盐酸

染色滴2滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片上染色5min

观察先低倍镜观察，选择染色均匀、色泽浅的区域，移至视野中央，调节清晰后才换用高倍物镜观察使观察效果最佳

实验二检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18）

一．实验目的：

尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质

二．实验原理：

某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。

1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu2O沉淀。

如：

葡萄糖+Cu（OH）2葡萄糖酸+Cu2O↓（砖红色）+H2O，即Cu（OH）2被还原成Cu2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。

2．脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）。

淀粉遇碘变蓝色。

3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。

（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。

）

三．实验材料

1．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。

（因为组织的颜色较浅，易于观察。

）

2．做脂肪的鉴定实验。

应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。

3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。

四、实验试剂

斐林试剂（包括甲液：

质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和乙液：

质量浓度为0.05g/mLCuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：

质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和B液：

质量浓度为0.01g/mLCuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。

五、方法步骤：

（一）可溶性糖的鉴定

操作方法注意问题解释

1.制备组织样液。

（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备。

因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。

2.取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。

3.向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。

应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；

切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。

斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu（OH）2在70~900C下分解成黑色CuO和水；

甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu（OH）2生成。

4.试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：

浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。

也可用酒精灯对试管直接加热。

防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；

缩短实验时间。

（二）脂肪的鉴定

操作方法注意问题解释

花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。

干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。

因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。

切片要尽可能薄些，便于观察。

在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。

染色时间不宜过长。

用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。

酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。

同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。

用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。

滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。

低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。

装片不宜久放。

时间一长，油滴会溶解在乙醇中。

　实验一观察DNA和RNA在细胞中的分布

实验原理：

DNA绿色，RNA红色

分布：

真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。

实验结果:

细胞核呈绿色,细胞质呈红色.

　　实验二物质鉴定

还原糖+斐林试剂～砖红色沉淀

脂肪+苏丹III～橘黄色

脂肪+苏丹IV～红色

蛋白质+双缩脲试剂～紫色反应

1、还原糖的检测

（1）材料的选取：

还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。

（2）试剂：

斐林试剂（甲液：

0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：

0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。

（3）步骤：

取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）

★模拟尿糖的检测

1、取样：

正常人的尿液和糖尿病患者的尿液

2、检测方法：

斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸

3、结果：

（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。

4、分析：

因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。

2、脂肪的检测

（1）材料的选取：

含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。

（2）步骤：

制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央

↓

染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）

↓

制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）

↓

镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）

3、蛋白质的检测

（1）试剂：

双缩脲试剂（A液：

0.1g/mL的NaOH溶液，B液：

0.01g/mL的CuSO4溶液）

（2）步骤：

试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化（紫色）

考点提示：

（1）常见还原性糖与非还原性糖有哪些？

葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。

（2）还原性糖植物组织取材条件？

含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：

苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。

（3）研磨中为何要加石英砂？

不加石英砂对实验有何影响？

加石英砂是为了使研磨更充分。

不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。

（4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？

混合的目的？

为何要现混现用？

混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。

（5）还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为：

浅蓝色棕色砖红色

（6）花生种子切片为何要薄？

只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。

（7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？

切片的厚薄不均匀。

（8）脂肪鉴定中乙醇作用？

洗去浮色。

（9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？

先加A液的目的。

怎样通过对比看颜色变化？

不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。

　　实验三观察叶绿体和细胞质流动

1、材料：

新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片

2、原理：

叶绿体在显微镜下观察，绿色,球形或椭球形。

用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色,细胞质接