NK系白血病免疫表型特点.docx

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NK系白血病免疫表型特点

NK系白血病免疫表型特点

麻柔，许勇钢，杨晓红，胡晓梅，李柳，唐旭东，

张姗姗，徐述，王洪志，刘锋

【摘要】本研究目的是探讨NK细胞系白血病的的免疫表型。

应用流式细胞术检测了297例急性白血病，并就发觉的6例NK细胞系白血病病例分析其免疫表型特点。

结果说明：

297例急性白血病中CD56阳性43例，占%，CD56阳性率%%。

43例中6例为NK细胞系白血病，其余37均为急性髓系白血病伴CD56表达；6例NK细胞系白血病中1例急性前髓系/NK细胞白血病（myeloid/NKcellprecursoracuteleukemia）；1例伴有早幼粒细胞样形态的急性髓系/NK细胞白血病；2例原始NK细胞白血病（blasticNKcellleukemia），1例NK样T细胞淋巴瘤/白血病（NK-likeT-celllymphoma/leukemia）；1例大颗粒淋巴细胞白血病。

结论：

伴CD56阳性急性白血病，绝大部份是急性髓系白血病伴CD56表达。

NK细胞系白血病免疫表型各异，表现从多能造血干细胞经历髓系抗原阳性的T/NK双向祖细胞，分化为NK系祖细胞，再进一步分化为成熟NK细胞。

对不同发育时期的抗原表达特点，应认真分辨。

【关键词】NK白血病

　　ImmunophenotypicFeaturesinLeukemiaofNKCellSeries

　　AbstractTheaimwastoinvestigatetheimmunophenotypesofNKseriesleukemia.Immunophenotypesof297casesofacuteleukemia（AL）weremeasuredbyflowcytometry，andtheseimmucopenotypicfeatureswereanalyzed.Theresultsshowedthat43outof297casesofAL（%）wereCD56caseswereNKseriesleukemiaand37caseswereacutemyelogenousleukemiawithCD56expressed.Onepatienthasbeendiagnosedasmyeloid/NKcellprecursoracuteleukemia，twopatientswereblasticNKcellleukemia，onewassupposedtobeNK-likeT-celllymphoma/leukemia，whileanotheronewaslargegranularlymphocyteleukemia（LGLL）.ItisconcludedthatalmostallofCD56positiveleukemiawereacutemyelogenousleukemiawithCD56expressed.TheimmunophenotypesofNKseriesleukemiawereantigensfromhematopoieticstemcellstoT/NKprogenitorcellswithmeyloidantigenpositive，andthroughNKprogenitorstomatureNKcells.TheimmunophenotypesofheterogeneousNKleukemiacellsaredifferent，thatshouldbecarefullydistinguished.

　　KeywordsNKleukemia；CD56；flowcytometry

　　从多能造血干细胞分化为成熟NK细胞的途径仍不明确，因此NK细胞系白血病的分析比较困难［1］。

对NK细胞来源的恶性血液病最近10年有了较多的报导，它们包括急性前髓系/NK细胞白血病（myeloid/NKcellprecursoracuteleukemia）、伴有早幼粒细胞样形态的急性髓系/NK细胞白血病（myeloid/NKcellacuteleukemia）、原始NK细胞淋巴瘤/白血病（blasticNKcelllymphoma/leukemia）。

这些分型尚未在WHO和新修订的欧美淋巴瘤（REAL）分型中表现。

为了进一步熟悉这些新的白血病类型，仅就咱们在临床中发觉的从急性前髓系/NK细胞白血病到大颗粒淋巴细胞淋巴瘤/白血病的NK细胞系白血病，就其免疫表型特点作一报告。

　　材料和方式

　　病例

　　急性白血病共297例，符合FAB诊断标准，绝大部份为中国中医研究院西苑医院病例，少部份为外院在我科流式细胞室检测的病例，年龄15-79岁，男183例，女114例。

　　荧光标记技术

　　将每试管中加入EDTA或肝素抗凝的骨髓100μl（106/ml）及三色或四色直接标记的荧光抗体10μl，室温避光孵育20分钟，抗体组合CD34/HLA-DR/CD3八、CD10/CD33、CD19/CD13、CD3/CD5六、CD7/CD2二、CD3/CD4/CD八、CD5/CD20、MPO/cyCD2二、κ/λ、CD41/CD6一、CD64/CD6九、CD9每管中均加入CD45单克隆抗体；CD56单克隆抗体：

克隆N901（NKH1），以上标记单克隆抗体和阴性对照均为法国Immunotech公司产品。

再向各试管中加入溶血素500μl，震荡置室温避光，10分钟后用500μlPBS洗涤细胞1次，加入500μlPBS重悬细胞，上流式细胞仪检测。

　　流式细胞术分析［2］

　　采纳美国Beckman-Coulter公司的EPICS-ELITE流式细胞仪，488nm激发光源，EXPO32软件进行分析。

在利用荧光微球校准及调整机械荧光补偿后，做相应荧光标记同型阴性对照，排除非特异染色的荧光。

依照CD45表达程度和SSC颗粒度大小将细胞分为粒细胞群、单核细胞群、淋巴细胞、不成熟淋巴细胞群和不成熟髓细胞群、红细胞和碎片细胞群，通过对各群一一分析后，确信幼稚细胞群，通过二维表型图谱，分析其抗原表达情形。

　　结果分析

　　以抗原的表达率进行统计，采纳抗原阳性标准：

cyMPO≥3%，其他抗原≥20%。

　　结果

　　伴CD56+急性白血病的免疫表型及分化类型

　　297例急性白血病中，CD56阳性43例，占%，CD56阳性细胞率%%，除1例（例3）为CD3+CD56+外，另42例均为CD3-CD56+。

其中6例为NK细胞系白血病，其余37均为急性髓系白血病伴CD56表达。

　　NK细胞系白血病免疫表型

　　6例NK细胞系白血病免疫表型见附表。

例1表达CD34、CD33、CD13、CD7、cyCD3、CD9和CD56，虽细胞膜CD3阴性，但胞浆CD3阳性、MPO阴性，CD56阳性率%，符合急性前髓系/NK细胞白血病（myeloid/NKcellprecursoracuteleukemia）。

例2表达HLA-DR、CD13、MPO、CD3八、CD1五、CD64和CD56，形态学极似APL，但无T（15；17）、T（11；17）染色体改变，PML/RARa基因阴性，符合伴有早幼粒细胞样形态的急性髓系/NK细胞白血病。

例3表达HLA-DR、CD7、CD八、CD3+/CD56+阳性率%，是1例NK样T细胞淋巴瘤/白血病（NK-likeT-celllymphoma/leukemia）。

例4仅表达HLA-DR和CD56，CD56阳性率%；惜未测定CD4；例5仅表达HLA-DR、CD7、CD4、CD56，CD56阳性率%；CD1六、CD57阴性，虽抗原表达有所不同，此两例均是原始NK细胞白血病。

例6仅表达HLA-DR、CD二、CD7、CD9和CD56，CD56阳性率%，此例CD57阳性，是1例大颗粒淋巴细胞白血病（此例外院已确诊为大颗粒淋巴细胞白血病，具典型的大颗粒淋巴细胞形态学表现）。

其余37例表达CD56者，一起表达HLA-DR、CD34、CD33、CD13、MPO和CD56，其中4例表达CD41，2例表达CD19，属于急性髓系细胞白血病伴CD56表达。

流式细胞仪测定的例1—例6病人CD56表达见图1-6。

Table.ImmunophenotypesinleukemiaofNKcellseries（略）

　　讨论

　　依据免疫表型能够大致推断某一急性白血病处于相应正常造血细胞分化发育的哪个时期。

另一方面由于白血病是造血细胞的恶性病变，白血病细胞表面抗原的表达与相应正常造血细胞有明显不同。

由于从多能造血干细胞分化成熟为NK细胞的途径仍不明确，对NK细胞系白血病的分析比较困难。

在NK细胞分化发育进程中，CD56最先表达，CD57、CD16表达较晚。

对NK细胞来源的恶性血液病最近10年有了较多的熟悉，但对NK细胞来源的恶性血液病在分化时期定位的熟悉仍有不同。

Shibuya等［1］在体外无基质细胞培育中从CD34+CD33+Lin-细胞中诱导分化生成NK细胞；Miller等［3］在有基质细胞培育中证明NK和B淋巴细胞和髓系来源于一个一起的淋巴髓系定向祖细胞。

Suzuki等［4］推理:

从多能造血干细胞经历髓系抗原阳性的T/NK双向定向祖细胞，分化为NK定向祖细胞，再进一步分化为成熟NK细胞。

与之对应的不同分化发育时期的恶性血液病是急性前髓系/NK细胞白血病（myeloid/NKcellprecursoracuteleukemia）、原始NK细胞淋巴瘤/白血病（blasticNKcelllymphoma/leukemia）、大颗粒淋巴细胞淋巴瘤/白血病（NK-LGLleukemia）（图7）。

急性前髓系/NK细胞白血病、原始NK细胞淋巴瘤/白血病都表达CD56。

Scott等［5］也报导了来源于前髓系/NK细胞的急性髓系/NK细胞白血病。

因此，急性白血病伴CD56+CD57-者是一组较大颗粒淋巴细胞淋巴瘤/白血病分化时期较早的急性NK系白血病，包括如本文所述4种类型。

急性前髓系/NK细胞白血病是一种最近被熟悉的白血病，其特点是有明显髓外涉及，有不成熟的原始淋巴细胞样形态，伴MPO-、CD7+、CD33+/CD13+、mCD3-、cyCD3-、CD56+，预后不良。

已证明与伴有早幼粒细胞样形态的急性髓系/NK细胞白血病（myeloid/NKcellacuteleukemia）不同，其髓外涉及的活检与原始淋巴细胞淋巴瘤很难辨别［6］。

本研究中例1表达CD34、CD33、CD13、CD7、CD9和CD56，虽细胞膜CD3阴性，但胞浆CD3+，CD56阳性率%，符合急性前髓系/NK细胞白血病。

本研究中例2表达HLA-DR、CD13、MPO、CD3八、CD1五、CD64和CD56，染色体无t（15；17）、T（11；17），但有-7，PML/RARa基因阴性，符合伴有早幼粒细胞样形态的急性髓系/NK细胞白血病（myeloid/NKcellacuteleukemia）。

例3表达HLA-DR、CD7、CD八、CD38及CD3+/CD56+，经检查HTLV-1排外成人T淋巴细胞白血病，是1例NK样T细胞淋巴瘤/白血病［7］。

例4仅表达HLA-DR和CD56，CD56阳性率%，惜未测定CD4；例5表达HLA-DR、CD7、CD4、CD56，CD56阳性率%；CD16CD57阴性，此2例检测免疫表型同时测定了TCRαβTCRγδ均为阴性，此两例均是原始NK细胞白血病。

例6外院已明确诊断为大颗粒淋巴细胞白血病，免疫表型表达HLA-DR、CD二、CD7、CD九、CD56和CD57，形态学表现为典型的成熟大颗粒淋巴细胞。

43例CD56阳性病例中37例一起表达HLA-DR、CD34、CD33、CD13、MPO和CD56，其中4例表达CD41，2例表达CD19（因为CD19也可在初期髓系细胞表达，此2例可视为初期髓系），由于MPO+、CD7-，分析其分化发育时期较急性前髓系NK细胞白血病晚，且髓系抗原表达更多。

值得注意的是本研究中43例CD56+病例中4例同时为CD41+（其中2例同时CD61+），占10例CD41+（4/10）的%；咱们曾报导63例急性白血病中2例CD41+者均CD56+，可见髓系白血病中表达CD41者CD56+较多［8］。

NK细胞系白血病是近10年才较多注意到的白血病，对其临床特点，免疫表型、染色体及基因改变需进一步积存病例研究才能完全明了。

CD56尽管没有细胞系列和疾病特异性，但NK祖细胞和NK样T细胞淋巴瘤/白血病的恶性细胞都表达CD56，表达CD56的淋巴瘤/白血病大多临床表现病情进展迅速［9］。

已报到病例以东亚地域明显为多，应引发咱们高度注意。

据文献〖4］列出NK细胞系白血病免疫表性特点和辨别诊断：

急性前髓系/NK细胞白血病免疫表型特点:

MPO-、CD7+、CD33+/CD13+、smCD3-、cyCD3-、CD56+。

形态学特点:

原始淋巴细胞样，细胞大小不等，核不规那么，核仁明显，胞浆灰蓝或淡蓝，无嗜天青颗粒或Auer小体，组织化学检测MPO阴性（<3%），糖原阴性，酯酶阴性。

部份病人可有染色体异样（7p和3p异样）。

少数急性前髓系/NK细胞的白血病病人有TCRβ、TCRγ、TCRδIgH重排。

髓系化疗有效。

原始NK细胞淋巴瘤/白血病免疫表型特点:

cyCD3-，CD56+，无髓系和B系抗原。

形态学方面的特点:

原始淋巴细胞样，胞浆可有嗜天青颗粒。

少数原始NK细胞淋巴瘤/白血病有TCRβ重排，无TCRγTCRδIgH重排。

淋系化疗有效。

但究竟表达CD56的恶性细胞是不是都来自NK细胞系，或表达CD56的急性白血病是不是都可称作NK细胞系白血病，都还需要进一步研究。

【参考文献】

　　1ShiburyA，NagayoshiK，NakamuraK，etal.LymphokinerequirementforthegenerationofnaturalkillercellsfromCD34+hematopoeticprogenitorcells.Blood，1995；85:

35-38

　　2麻柔，薛向军，公殿广等.137例急性白血病免疫表型分析.中华血液学杂志，1996；17:

433-434

　　3MillerJS，McCuullarV，PunzelM，etal.SingleadulthumanCD34+/Lin-/CD38-progenitorgiverisetonaturalkillercells，B-lineagecells，dendriticcells，andmyeloidcells.Blood，1999；93:

96-106

　　4SuzukiR，NakamuraS.Malignanciesofnaturalkiller（NK）cellprecursor:

myeloid/NKcellprecursoracuteleukemiaandblasticNKcelllymphoma/leukemia.LeukRes，1999；21:

615-524

　　5ScottAA，HeadDR，KopeckyKJ，etal.HLA-DR-，CD33+，CD56+，CD16-myeloid/naturalkilleracuteleukemia:

apreviouslyunrecognizedformpfacuteleukemiapotentiallymisdiagnosedasFABacutemyeloidleukemia-M3.Blood，1994；84:

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　　6SuzukiR，YamamotoK，SetoM，etal.CD7+andCD56+myeloid/naturalkillercellprocursoracuteleukemia:

adistincthematolymphoiddiseaseentity.Blood，1997；90:

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　　7麻柔，许勇钢，胡晓梅等.急性白血病伴CD56阳性的临床意义.白血病·淋巴瘤，2001；10:

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　　8JaffeES.Classificationofnaturalkiller（NK）cellandNK-likeT-cellmalignancies.Blood，1996；87:

1207-1212

　　9LoughranTPJr.CD56+hematologicmalignancies.LeukRes，1999；23:

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