基因工程复习V21指南.docx

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基因工程复习V21指南

第一章绪论

名词解释（镇鸿）

基因工程：

通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因以及蛋白质的活性表达，使转基因生物获得新的遗传性状的操作。

基因操作：

泛指对基因进行酶切、连接、转化等分子生物学操作，是基因工程的技术基础。

遗传工程：

根据遗传学原理，按照人们预先设计的生物蓝图，对生物的遗传物质进行有计划的操作，以达到定向改造生物的遗传组成，使其获得新的遗传性状，这个工程称为遗传工程。

包括常规的有性杂交育种，染色体工程，细胞工程以及基因工程等。

基因克隆：

是指对基因进行分离和扩大繁殖等操作过程，其目的在于获得大量的基因拷贝，它在技术上包括载体构建、大肠杆菌遗产转化改良。

1、什么是基因工程？

它包括哪些环节？

基因工程是通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因以及蛋白质的活性表达，使转基因生物获得新的遗传性状的操作。

具有以下几个重要特征：

（1）打破物种的界限，实现跨物种的基因转移；

（2）通过已知功能基因的遗传转化，可进行物种的定向改良；（3）可以创造出自然界中原本没有的生物。

它包括以下环节：

①目的基因克隆②载体的准备③目的基因与载体的连接④重组DNA转转染/转导  ⑤重组体的筛选与鉴定⑥重组体的大量培养，外源基因表达效应分析与开发应用

2、基因工程与基因操作、基因克隆、遗传工程等概念有什么异同？

基因操作泛指对基因进行酶切、连接、转化等分子生物学操作，是基因工程的技术基础。

基因克隆是指对基因进行分离和扩大繁殖等操作过程，其目的在于获得大量的基因拷贝，它在技术上主要包括载体构建、大肠杆菌遗传转化、重组子筛选和扩大繁殖等环节，很多时候并不涉及动物、植物等的转化及性状的遗传改良，显然与基因工程不完全一致。

遗传工程广义的是指所有能改变生物体遗传性状的技术，包括常规的有性杂交育种、染色体工程、细胞工程以及基因工程等。

3、基因工程的基本条件有哪些？

它们各自在基因工程中起着什么作用？

①目的基因:

 是开展基因工程的目标和物质基础。

②载体:

 是运载工具，引入的外源基因到宿主细胞中，使其进行复制或表达。

③工具酶:

 指体外进行DNA合成、切割、修饰和连接等系列过程中所需要的酶。

④受体细胞:

摄取外源目的DNA并使其稳定维持和表达。

4、基因工程的技术策略有哪些？

（1）强化基因的表达，通过增强目标性状对应基因的拷贝数，提高目的酶表达量与活性，实现目标性状的改良。

（2）关闭特定基因的表达，实现目标性状的改良。

（3）基因的异源表达赋予生物新的功能。

第二章：

基因工程酶学基础

名词解释（仁杰）

限制性内切酶：

能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其附近切割双链DNA的一类内切核酸酶。

黏性末端：

DNA分子在限制性内切核酸酶的作用下形成的具有互补碱基的单链延伸形成的末端结构。

平末端：

限制性内切核酸酶在识别序列的对称轴上切割，形成的片段为平末端。

同切点酶：

又称同裂酶，是一类来源于不同的微生物、能识别相同靶序列的限制性内切核酸酶。

同尾酶：

来源不同，识别靶序列也不同，但切割后能产生相同的黏性末端的限制性内切核酸酶。

DNA连接酶：

能催化双链DNA片段靠在一起的3'羟基末端和5'端磷酸基团末端之间通过形成磷酸二酯键，使两末端连接的一种核酸酶。

DNA聚合酶：

在引物和模板存在下，把脱氧核糖单核苷酸连续的加到双链DNA分子引物链的3'-OH末端，催化核苷酸的聚合作用的一类酶。

反转录酶：

依赖于RNA的DNA聚合酶，普遍存在于含RNA的反转录病毒中，以RNA为模板，催化合成互补的DNA单链，进而合成DNA的第二条链。

末端脱氧核苷酸转移酶：

简称末端转移酶（TDT），一般从小牛胸腺中提取的一种碱性蛋白，在末端转移酶的催化下将脱氧核苷酸添加到DNA分子的3'-OH末端，伴随无机磷酸的释放。

碱性磷酸酶：

能够催化核酸分子脱掉5'的磷酸基团，从而使DNA（或RNA）片段的5'-P末端转化成5'-OH末端。

脱氧核糖核酸酶I：

简称DNA酶I（DNase I），来源于牛胰脏的糖蛋白，需要二价阳离子的内切核酸酶，能从嘧啶核酸5'端磷酸基处随机降解单链或双链DNA，生成具有5'磷酸末端的寡核苷酸。

（有Mg2+存在时，DNase I能在双链DNA上随机独立的产生切口，在Mn2+存在时，则在双链DNA的大致同一位置上切割，产生平末端DNA片段。

）

（力坤）

1.II型限制性内切核酸酶的基本特性有哪些？

II型限制性内切核酸酶只有一种多肽，以同源二聚体的形式存在，其识别和切割DNA分子具有严格的特异性。

①识别序列的特异性：

识别序列为4-6bp的双重螺旋对称结构的回文序列

②切割位点的特异性：

在识别序列内或附近特异切割双链DNA分子，水解磷酸二酯键，产生3’端羟基、5’端磷酸基团的DNA片段。

2.大肠杆菌DNA聚合酶I有哪些不同的酶活力特性，各有何利用价值？

【

（1）5'→3'聚合酶活性

大肠杆菌DNA聚合酶I的聚合酶活性是以DNA为模板，利用体系中的4种脱氧核糖核苷（dNTP），催化单核苷酸分子加到引物的3'-OH末端，沿5'→3'合成与模板互补的另一条DNA链，模板DNA可以是单链或双链DNA分子，双链DNA只有在其一条链上有一个或数个断裂时才可以作为有效模板。

（2）3'→5'外切酶活性

大肠杆菌DNA聚合酶I的3'→5'外切酶活性是沿3'→5'方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸，这种外切酶活性在体内DNA复制时主要起校对作用。

当DNA复制中掺入的核苷酸与模板不互补而游离时就会被其3'→5'外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸。

这种校对功能保证了DNA复制的真实性，从而降低突变率。

（3）5'→3'外切酶活性

大肠杆菌DNA聚合酶I的5'→3'外切酶活性，是从5'端降解双链DNA分子。

它也可以降解DNA:

RNA杂合体中的RNA分子，即具有RNA酶H的活性。

这种酶外切活性特点是：

待切除的核酸分子必须具有5'端游离磷酸基团；核苷酸分子被切除前位于已配对的DNA双螺旋区段上；被切除的可以是脱氧核苷酸，也可以是非脱氧核苷酸。

】

3.Klenow片段和大肠杆菌DNA聚合酶I有何异同？

【

（1）Klenow片段是来自大肠杆菌DNA聚合酶I的大片段；

（2）DNA聚合酶I具有5’→3’聚合酶活性，3'→5'核酸外切酶活性，5'→3'核酸外切酶活性；

Klenow片段只有5’→3’聚合酶活性，3'→5'核酸外切酶活性。

】

4.为什么说反转录酶是一种特殊的DNA聚合酶（自己总结的），其主要用途是什么？

反转录酶是依赖于RNA的DNA聚合酶。

它有合成DNA的活性，只不过模板是RNA，这与一般DNA聚合酶不同。

主要用途：

①以mRNA为模板合成其互补DNA（cDNA），用于构建cDNA文库和基因克隆；②对具5’端突出的DNA片段的3’端进行补平和标记，制备杂交探针；③代替大肠杆菌DNA聚合酶IKlenow片段或测序酶，用于DNA序列分析。

5.【几种不同的修饰性工具酶在基因工程中具有的重要用途。

】

∙末端脱氧核苷酸转移酶

o用于克隆DNA片段：

将同聚物尾巴添加到3’末端

o用于DNA片段3’末端标记。

o按照模板合成多聚核糖核苷同聚物

∙多核苷酸激酶

o标记DNA或RNA的5’末端。

o在DNA分子连接时，对缺乏5’磷酸基团的DNA片段或人工合成接头进行磷酸化处理。

∙碱性磷酸酶

oDNA分子片段5’末端的去磷酸化，防止自身连接。

o在5’末端标记之前，去除DNA或RNA分子的5’末端磷酸基团。

第三章载体

名词解释（旭华）：

{红色部分为11.27添加整理}

1.载体：

能携带外源基因（或DNA片段）进入细胞复制、整合或表达的工具就称为载体（vector）.

2.克隆载体：

用于携带DNA片段进入宿主细胞进行复制或保存的载体（目前主要有：

质粒载体、噬菌体载体、黏性载体、人工染色体等）。

3.表达载体：

表达载体是可携带DNA片段进入宿主细胞进行复制并进行转录、翻译的载体。

（一般在克隆载体的基础上增加了基因表达的调控元件。

）

4.质粒载体：

（P38-39页归纳）通过存在于多种宿主细胞、独立于染色体外的可自主复制闭合环状的质粒进行人工改造（选择合适的复制起始位点、加入合适的选择标记基因、增加或减少酶切位点、缩短长度）而构建的克隆载体。

5.质粒的不相容性：

两种质粒在同一宿主细胞中不能共存的现象称为质粒的不相容性（相反则称为相容性）。

6.RNAi：

双链RNA（double-strandsedRNA,dsRNA）对基因表达的阻断作用被称为RNA干扰（RNAinterference,RNAi）

7.噬菌体载体：

基因克隆另一类重要的载体是病毒载体。

噬菌体主要有双链噬菌体和单链丝状噬菌体两大类。

双链噬菌体为λ类噬菌体，单链丝状噬菌体有M13、f1、fd噬菌体。

重组DNA技术中常用的噬菌体克隆载体主要有λ类噬菌体和M13噬菌体。

（来自XX百科，参照课本自行理解。

）

8.黏粒克隆载体：

粘粒克隆载体由质粒和含有cos位点的λDNA片段所组成，大小一般在5~7Kb,包括质粒的复制起点、抗性标记基因、多克隆位点和λDNA的cos位点，既可以转化大肠杆菌并按质粒复制的方式进行复制，又可以承载40Kb左右的外源DNA片段。

由于黏粒载体带有噬菌体的包装序列，可以用包装蛋白包装，不带外源DNA片段的载体因为包装下限而不能被包装，具有很强选择性。

包装产物通过感染宿主菌高效地将重组DNA导入宿主细胞。

黏粒载体被用于构建基因组文库。

9.人工染色体：

染色体具有复制功能，利用染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体称为人工染色体载体（artificialchromosomevector），其装载外源DNA的容量比质粒、噬菌体和噬菌体-质粒杂合载体等有很大的拓展，甚至可以跟染色体的大小相媲美。

10.质粒表达载体：

质粒表达载体是在以质粒为基本骨架的克隆载体的基础上，组装启动子、转录终止子和核糖体结合位点等表达原件而构成的。

11.大片段表达载体：

（找不到概念，详见课本例子P59：

TAC（可转移人工载体）、MAC（哺乳动物人工染色））

12.VIGS:

病毒诱导的沉默基因（virusinducedgenesilencing，VIGS）是利用植物体内天然存在的免疫机制，将目的基因片段构建到病毒载体中并用病毒侵染寄主植物，目的基因片段作为病毒的一部分同病毒一起复制并扩散到整株植物，植物体的防御机制被病毒激活后，在识别病毒和目的基因的同时，将内源的目的基因mRNA降解，从而达到基因沉默的目的。

简答：

2.什么是克隆载体，克隆载体必须满足哪些基本条件？

克隆载体是用于携带DNA片段进入宿主细胞进行复制或保存的载体。

必须满足如下基本条件：

具有对受体细胞的可转移性，能携带外源基因进入宿主细胞；

能在宿主细胞中自主复制，并实现外源基因的增殖；

具有由单一限制性内切核酸酶识别位点组成的多克隆位点（MCS），可供外源基因的插入；

具有合适的选择性标记，用于含有重组质粒的宿主细胞筛选。

3．质粒具有哪些特性？

复制：

质粒DNA携带有自己的复制起始区（ori）以及与此相关的顺式作用元件，它们使质粒独立于宿主细胞的染色体自主复制并保持其固有的遗传信息及相对稳定的拷贝数。

不同质粒在宿主细胞内的拷贝数可以是不同的，根据其数量可将质粒复制方式分为严谨型（1至数个）和松散型（10个以上）；

质粒的不相容性：

在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒一般不能够在同一宿主细胞中稳定共存；

质粒的转移性：

含有tra基因的质粒会促使宿主细胞与受体细胞接合，使质粒从一个细胞转移到另一个细胞中；不含tra基因的质粒则不具备转移性（即非接合型质粒，分子质量小、拷贝数多、不会自动转移，比较安全）。

5．原核表达载体的表达元件及其作用？

元件

作用

启动子

【启动子是与RNA聚合酶特异性结合的DNA序列，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度。

启动子本身并不控制基因活动，而是通过与转录因子结合而控制基因活动的。

】（来自XX百科，课本中只有例子P50）

转录终止子

稳定载体系统，防止克隆的外源基因表达干扰载体的稳定性，转录终止子一般在多克隆位点的下游。

核糖体结合位点

转录出的mRNA必须借助宿主细胞的蛋白质合成系统翻译出目的蛋白。

细胞中的核糖体必须在mRNA上找到有效核糖体结合位点以及其中的SD序列，从而启动临近的翻译起始密码子的蛋白质翻译。

第四章（张奇）

名词解释：

琼脂糖凝胶电泳；用琼脂糖作支持物，在适当的条件下对带电生物大分子进行电泳的技术，主要用于DNA分子的分离、纯化和鉴定。

聚丙烯酰胺凝胶电泳；聚丙烯酰胶凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的垂直板凝胶电泳，可根据电泳样品的电荷、分子大小及形状的差别分离物质。

聚丙烯酰胺凝胶既具有分子筛效应，又具有静电效应，其分辨力高于琼脂糖凝胶电泳，适用于低分子DNA（1-1000bp）、寡聚核苷酸和白质的分离，可分离只相差一个核苷酸的不同DNA片段，是DNA序列分析中的关键技术之一。

Southern杂交：

是将DNA片段从琼脂糖转移到滤膜上。

检测特点DNA

Northern杂交：

检测某一特定RNA分子的方法，可用于RNA定性和定量分析。

Western杂交：

检测结果可知被检生物细胞内目的蛋白的表达与否，表达量及分子质量等情况。

脉冲电泳；是一种交替变换电场方向的电泳，以一定的角度并以一定的时间变换电场的方向，使DNA在微观上按“Z”字形向前泳动，从而达到分离相对分子量大的DNA片段的目的，可区分长度为50kb或100kb以上，甚至Mb级的大片段DNA。

。

探针：

是指用于检测特定基因或转录产物存在或表达DNA、RNA或寡聚核苷酸序列，这些序列在使用之前，需要进行标记。

切口平移法标记：

先DNA酶I随机在探针DNA上打开缺口，然后利用DNA聚合酶I5’→3’外切酶活性，在缺口处按5’→3’方向切除单核苷酸；同时DNA聚合酶I有5’→3’的聚合酶活性，在缺口处3’端加入底物中的单核苷酸，弥补缺口处的核苷酸链。

随着反应的进行底物中被标记单核苷酸，并被随机掺入。

DNA聚合酶I的两种作用交替进行，探针即被标记。

随机引物标记法；利用由6个核苷酸组成的序列随机的寡核苷酸为引物，在Klenow酶的作用下对标记的DNA进行随机扩增。

菌落（或噬菌斑）杂交:

是将标记的核酸（抗体）探针与固定在细胞或组织中的核酸（抗原）进行杂交，所以也称为原位杂交。

聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）简称PCR，是以DNA为模板，利用DNA聚合酶活性体外扩增特定的基因片断，这种方法被称为DNA聚合酶链式反应。

引物：

是指在PCR反应中与待扩增的靶DNA区段两翼互补的寡聚核苷酸，其本质是单链DNA片段。

反转录PCR：

扩增mRNA的一种实验技术。

先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用PCR方法加以扩增。

锚定PCR:

用于扩增已知一端序列的目的DNA。

在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。

反向PCR（inversePCR）:

是用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增.

巢式PCR:

采用两对引物进行PCR，其中第二对引物位于第一对引物内.【回答不够，还要回到课本中】

实时定量PCR:

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对模板中特定基因进行定量分析的方法。

双脱氧链终止法测序：

核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧碱基存在条件下复制或转录时，如果在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧碱基，只要双脱氧碱基掺入链端，该链就停止延长，链端掺入单脱氧碱基的片段可继续延长。

如此每管反应体系中便合成以共同引物为5’端，以双脱氧碱基为3’端的一系列长度不等的核酸片段。

反应终止后，分四个泳道进行电泳。

以分离长短不一的核酸片段（长度相邻者仅差一个碱基），根据片段3’端的双脱氧碱基，便可依次阅读合成片段的碱基排列顺序。

（文斌）（问老师）凝胶阻滞试验，又叫DNA迁移率变动试验。

在凝胶电泳中，由于电场的作用，裸露的DNA朝正电极移动的距离与其分子质量的对数成反比。

如果DNA分子结合上一种蛋白质，由于分子质量加大，在凝胶中的迁移子作用便会受到阻滞，朝正电极移动速度变慢，移动的距离相应缩短。

所以，当特定的DNA片段同细胞提取物混合之后，若它在凝胶电泳中的移动距离变短了，说明它已同提取物中的某种特殊蛋白质分子发生了结合。

（问老师）DNaseI足迹试验是一种鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上结合位点的方法，它不仅能找到与特异性DNA结合的目标蛋白，而且能告知目标蛋白结合在哪些碱基部位。

足迹试验的方法较多，常用的有DNaseI足迹试验和硫酸二甲酯足迹试验（dimethylsulfate，DMS），两者原理基本相同。

（问老师）甲基化干扰试验（删除）通过对核苷酸进行甲基化修饰，检验DNA链中哪些区域与特定蛋白质结合的试验方法。

4、如何检测、评价提取的DNA、RNA的【质量】？

⑴核酸、蛋白、多糖等在紫外光区吸收峰各不相同，蛋白质的最大吸收峰在280nm处，多糖的最大吸收峰在230nm处，而核酸的最大吸收峰在260nm处，据此可以通过紫外光光度法测定OD260/OD230与OD260/OD280即A260/230与A260/280检测所提取核酸的污染程度；

⑵琼脂糖凝胶电泳鉴定采用凝胶电泳也可以粗略鉴定DNA或RNA的是否发生降解或污染。

5.如何确定提取的DNA、RNA的浓度

紫外分光光度法

（1）.原理基于DNA（或RNA）分子在260nmm处有特异的紫外吸收峰且吸收强度与系统中DNA或RNA的浓度成正比。

分子形状、双链与单链之间的转换也会导致吸收水平的改变，但是这种偏差可以用特定的公式来校正。

该法的特点是准确、简便，但所需仪器较昂贵。

（2）.在波长260nm紫外光下，1OD值的吸光度相当于双链DNA浓度为50μg/ml；单链DNA为37μg/ml；RNA为40ug/ml。

（第二点自己选择记忆。

）

6.（老师给的）琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳和脉冲电泳的原理是什么？

各有什么用途?

影响因素有哪些？

原理：

核酸分子中磷酸基团一般呈离子化状态，DNA和RNA的多核苷酸链实际上是多聚阴离子（polyanions），它们在电场中可向着正电极方向迁移。

在一定的电场强度下，DNA或RNA分子的迁移速度取决于核酸分子大小和构型。

分子量小比分子量大的分子迁移【快】，紧密构型分子比同分子量的松散型开环分子或线性分子迁移快，据此，可分离不同大小的DNA或RNA分子。

琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为支持物，在适当的条件下对带电生物大分子进行电泳的技术，主要用于DNA分子的分离、纯化和鉴定。

聚丙烯酰胶凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的垂直板凝胶电泳，可根据电泳样品的电荷、分子大小及形状的差别分离物质。

聚丙烯酰胺凝胶既具有分子筛效应，又具有静电效应，其分辨力高于琼脂糖凝胶电泳，适用于低分子DNA（1-1000bp）、寡聚核苷酸和白质的分离，可分离只相差一个核苷酸的不同DNA片段

是一种交替变换电场方向的电泳，以一定的角度并以一定的时间变换电场的方向，使DNA在微观上按“Z”字形向前泳动，从而达到分离相对分子量大的DNA片段的目的，可区分长度为50kb或100kb以上，甚至Mb级的大片段DNA。

凝胶电泳中影响DNA分子泳动的因素很多，主要有DNA分子特性和电泳条件两个方面

（文斌）7.核酸分子杂交的原理是什么？

【Southern杂交、Northem杂交、Western杂交的基本原理及其应用（重新认真再整理）】

核酸分子杂交的原理：

具有互补的特定核苷酸单链DNA或RNA混在一起时，其相应同源区段将会退火形成双链结构。

把一段已知基因（DNA或RNA）的核酸序列用合适的标记物（如放射性同位素、生物素等）予以标记，当作探针（probe）,与变性后的单链基因组DNA或RNA等进行杂交，再用合适方法（如放射自显影或免疫组织化学等技术）把标记物检测出来，就可确定靶核苷酸序列的存在情况。

核酸杂交技术应用于重组子鉴别、基因分离、DNA片段分析、基因表达研究等

8.PCR的反应步骤有哪些？

PCR反应体系含有哪些基本成分？

步骤：

◆变性（denatureation）：

92-96℃的高温处理可使模板DNA双链间氢键断裂，解离成单链但不改变其化学性质，变性的时间一般为30秒,如果模板的G+C含量较高，变性时间可适当延长。

变性后的单链DNA游离于反应体系中作为模板;

◆退火（annealing）：

体系温度降至合适温度，使加入的引物与模板DNA碱基序列互补结合。

退火的温度取决于引物的Tm值;

◆延伸（extension）：

在72℃温度下，DNA聚合酶将dNTP连续加到引物的3’-OH端，以互补的DNA单链为模板，沿着模板延伸合成模板DNA的互补链，称为延伸。

一般每1min/kb来保证充足的延伸时间。

反应体系：

1.缓冲液2.MgCl23.dNTPs4.模板DNA（Template）5.TaqDNA聚合酶6.引物（Primer-P）

第五章（林亿）

RACE：

cDNA末端的快速扩增也是一种根据已知部分cDNA序列扩增未知序列的PCR技术。

简并序列：

由于一个氨基酸可对应一个到多个密码子，因此一段氨基酸序列可以有多个可能的编码序列，称之位简并序列。

基因组文库：

是将某一生物基因组DNA片段化并全部克隆后所获得的重组子群体的总称。

cDNA：

cDNA文库是将生物特定的组织器官或特定发育时期的全部mRNA反转录成cDNA，并全部克隆成重组子。

在该重组子群体中包含了其全部表达基因的转录体。

DD-PCR：

是基于PCR的mRNA差异显示技术。

是利用真核生物成熟mRNA的3’polyA结构，用oligo（dTMN）（M=A、C、G，N=A、G、C、T）作为锚定引物与mRNA的polyA结合，在反转录酶的作用下将mRNA反转录为cDNA，再以原oligo（dTMN）和10bp随机引物组成的引物对在不同来源的cDNA中进行PCR扩增，相同引物对在不同来源cDNA中的PCR产物并排在聚丙烯酰胺测序胶上电泳分离。

扩增的cDNA片段通过放射自显影或显色，即可获得差异表达基因的扩增条带。

（建松）如果已知某一蛋白的氨基酸序列，请设计几种方法分离该蛋白质基因的cDNA

答：

设计简并引物、RACE（具体参考P101-P104，P122及其他第五章内容，这个需要自己总结，每个人都不一样。

）

【（诗鹏）】7.什么是简并引物？

设计简并引物时怎样降低简并度？

简并引物：

相应合成这一段简并序列PCR扩增体系的引物叫做简并引物。

简并度与选取氨基酸序列的长度和这一序列氨基酸对应密码子的多寡相关。

可见简并度高的引物扩增假阳性率也会增加。

因此在选取氨基酸序列时往往优先选取对应密码子较少的残基，如含甲硫氨酸和色氨酸残基的区域。

选取氨基酸的长度一般为5个，对应一段15个的核苷酸序列。

而且为了降低简并度，放弃最后一个氨基酸放弃其他密码子的第三位碱基，因此合成14个碱基的简并产物。

8．基因文库需要满足什么条件？

有哪些类型的基因文库？

1．首先要满足文库的完整性，即文库应包含基因组的完整序列信息。