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填空部分参考答案

1、根据培养的材料，植物组织培养分：

  愈伤组织培养 、  器官培养 、  细胞培养 、 原生质体培养 等类型。

2、组织培养植株再生的途径：

体细胞胚胎发生途径和器官发生途径。

3、植物组织培养的发展分为三个阶段：

萌芽阶段、奠基阶段和快速发展和应用阶段。

4、1943年，   white提出了植物细胞 “全能性”学说    ，并出版了《植物组织培养手册》，从而使植物组织培养为一门新兴学科。

5、组织培养实验室必要的设备有   超净工作台、   高压灭菌器 、  空调机  、   天平 、 显微镜、蒸馏水发生器、酸度计等。

6、培养基成分主要包括    ①无机营养成分（大量元素、微量元素和铁盐） 、    ②有机营养成分（包括维生素、氨基酸等） 、  ③植物生长调节物质 、   ④碳水化合物 、 ⑤其它物质 。

7、培养基最常用的碳源是蔗糖，使用浓度在1%-5%常用3%。

8、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的  碳源 ，而且还能维持   培养基渗透压 。

9、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物，一般用量为6-10g／L之间。

10、驯化的目的：

 在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试健壮，提高苗的移裁成活率  。

11、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值

高：

有利于根的形成和愈伤组织的形成；

低：

有利于芽的形成。

12、培养基灭菌一般在108kPa的压力下，锅内温度达121℃，维持20-30min。

13、选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。

14、诱导胚状体比诱导芽的优点：

（1）数量多、

（2）速度快、（3）结构完整。

15、试管苗的生态环境：

高温且恒温、高湿、弱光、无菌。

16、培养基中加入活性炭的目的：

利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响。

17、绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段。

18、愈伤组织形成大致经历诱导期、分裂期和分化期三个时期。

19、使用植物生长调节物质时要注意：

种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值。

20、愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式。

21、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。

22、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。

前者主要是对茎尖长度不超过0.1mm，最小只有几十微米的茎尖进行培养，目的是获得无病毒植株；后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，目的是加快繁殖速度。

23、不定芽产生的途径：

一是从外植体上直接产生；二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生。

24、离体叶培养是指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。

25、在离体叶培养中，6-BA和KT利于芽的形成；2,4-D利于愈伤组织的形成

26、在离体叶组织脱分化和再分化培养中，茎和芽的分化主要有4个途径：

直接产生不定芽、由愈伤组织产生不定芽、胚状体形成、形成球状体或小鳞茎等途径。

27、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。

28、离体胚的培养分为二种类型：

成熟胚培养和幼胚培养。

29、幼胚培养时，其发育过程有三种方式：

胚性发育、早熟萌发、产生愈伤组织。

30、由胚乳培养得到的植株，除少数是三倍体外，多数是由各种倍性细胞组成的嵌合体。

31、胚珠培养分二类：

受精胚乳的培养和未受精胚珠的培养。

受精胚珠培养的目的：

一是用来打破种子的休眠，二是挽救胚的发育，以获得杂交种。

未受精胚珠培养的目的是获得单倍体植株。

32、子房培养分授粉子房培养和未授粉子房的培养。

前者培养的目的是挽救杂种胚，后者培养的目的是获得单倍体植株。

33、花药和发粉培养的共同特点是利用花粉（小孢子）染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株。

34、花药和花粉培养时，花粉发育的最适宜时期是单核中、晚期（单核靠边期）。

35、MS和H培养基适合双子叶植物花药培养；B5培养基适合豆科和十字花科花药培养；N6培养基适合禾谷类作物的花药培养。

36、花药培养前的预处理:

低温冷藏是最常用的方法。

37、压片染色法是检测划分发育时期的简便有效方法，常用染色剂为醋酸洋红。

38、一般平板培养要求细胞密度每毫升为1x103∽100x103个。

39、1.4%琼脂基本培养基+等量细胞培养液=0.7%琼脂条件培养基。

40、小细胞团计数方法：

①低倍显微镜直接计算；②细胞团显影法。

41、条件培养基是悬浮培养过一段时间组织或细胞的液体培养基。

42、细胞悬浮培养主要应用于植物有用物质的生产、诱发和筛选突变体、原生质体培养和细胞器分离、食品生产等。

43、原生质体的分离方法有机械分离法和酶法分离法。

44、用机械法分离原生质体的主要缺点是：

产量低、方法烦琐、局限性较大；优点是能排除外加酶对离体原生质体的有害影响。

45、原生质体培养基常用的渗透压稳定剂有糖溶液系统和盐溶液系统两种。

最常用的渗透剂是甘露醇和山梨醇。

46、原生质体的纯化方法有：

离心沉淀法、漂浮法和界面法。

47、原生质体培养时常用的三个指标是存活率、密度和产量。

48、目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径是茎尖培养脱毒。

49、通过茎尖或根尖离体培养可获得无病毒再生植株。

50、通过茎尖培养脱毒时，常以带1-3个幼叶原基的茎尖（约0.3—0.5mm）作外植体较合适。

51、分子生物学鉴定脱毒苗的主要方法：

①双链RNA法（dsRNA）和②互补DNA（cDNA）检测法。

52、无病毒苗的保存分：

隔离保存和长期保存两种方法。

53、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。

54、马铃薯病毒鉴定的方法主要有指示植物法、症状鉴定法。

55、通过组织培养获得微型薯的技术关键有两个：

单茎节扩大繁殖；微型薯诱导。

56、在葡萄栽培架式，棚架是应用最广泛的类型。

57、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。

58、菊花生根能力比较强，有两种方法：

嫩茎试管生根；无根嫩茎的扦插。

59、菊花的继代增殖有多种技术，多数是诱导愈伤组织产生丛生芽而获得大量的试管苗。

60、百合经茎尖培养脱毒、鉴定合格后，可通过两种继代增殖方式：

①经愈伤组织增殖；②诱导分化不定芽。

61、试管苗的增殖率，是指植物快速繁殖中间繁殖体的增殖率。

62、生产规模（生产量）的大小，要根据：

市场的需求，组织培养试管苗的增殖率和生产种苗所需的时间来确定。

63、试管苗的年生长量决定于每瓶苗数、每周期增殖倍数和年增殖周期数。

64、组培苗的年生产量=全年出瓶苗数×炼苗成活率。

65、种质保存分为原地保存和异地保存两种方式；

66、超低温保存分为：

快速冷冻法、慢速冷冻法、分步冷冻法和干燥冷冻法四种冷冻方法；

67、分步冷冻法分为：

两步冷冻法和逐级冷冻法两种方式；

68、冷冻保存后细胞和器官最基本的活力检测方法是再培养法。

基本概念部分参考答案

1、植物组织培养（planttissueculture）：

是指用无菌方法使植物体的离体器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有培养技术的总称，也叫植物克隆。

亦称为离体培养或试管培养。

2、脱分化（dedifferentiation）：

将已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。

一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。

3、再分化（redifferentiation）：

经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。

4、外植体（explant）：

由活体（invivo）植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。

包括各种器官、组织、细胞或原生质体等

5、愈伤组织（callus）：

在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。

6、器官发生（organgenesis）：

由愈伤组织或外植体诱导形成不定根或不定芽，再获得再生植株的方法。

7、胚状体发生（embryogenesis）：

是指在组织培养中起源于一个非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成具有双极性的胚状结构，而发育成再生植株的途径。

8、细胞全能性（celltotipotency）：

即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。

9、MS培养基（MSmedium）：

它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。

是目前应用最广泛的培养基。

特点是无机盐离子浓度较高，有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。

10、母液（motherliquid）：

是欲配制液的浓缩液。

配成比所需浓度高10-100倍。

母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

好处:

①保证各物质成分的准确性②配制时的快速移取③便于低温保藏。

11、褐变（brownchange）：

是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。

12、玻璃化现象（vitrificationphenomenon）：

在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。

13、消毒（disinfection）：

指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。

14、灭菌（sterilization）：

是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。

15、接种（inoculation）：

在无菌条件下，用灼烧过的镊子将外植体放到培养基上的操作过程。

16、愈伤组织培养（callusculture）:

是指将母体植株上的外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。

17、继代培养（subculture）：

愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。

这个过程叫做继代培养

18、形态建成（organogenesis）：

外植体在适宜的培养条件下经脱分化、再分化形成不定根（adventitiousroots）、不定芽（adventitiousshoots）或直接发育成形态完整的植物体的过程。

19、体细胞胚（somaticembryo）又称胚状体（embryoid）：

指在组织培养中，由一个非合子细胞（体细胞），经过胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成的具有双极性的胚状结构。

20、快速繁殖（微繁殖）（micropropagation）：

用组织培养的方法，使植物的部分器官、组织迅速扩大培养，并移植到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法。

21、纸桥培养法（bridgeculture）：

用酒杯状的滤纸代替琼脂，使杯底朝上塞入试管中，与液体培养基接触，将离体茎尖置于滤纸上方进行培养。

22、胚胎培养（embryoculture）：

是指将植物的胚胎与母体分离，培养在人工的培养基上形成幼苗的过程，包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。

23、胚性发育（embryonaldevelopment）：

植物幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚（有时甚至可能类似种子），然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。

24、早熟萌发（earlymaturesprouting）:

幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发。

25、胚培养（embryoculture）：

是指将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，在进行组织培养，使其生长发育形成幼苗的过程。

26、胚乳培养（endospermculture）：

是指将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。

27、胚珠培养（ovuleculture）：

是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。

28、子房培养（ovaryculture）：

是指将子房从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。

29、花药培养（antherculture）：

是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。

30、花粉培养（pollenculture）：

是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程。

31、看护培养法（nurseculturemethod）：

是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。

32、平板培养法（plateculturemethod）：

是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

33、细胞悬浮培养（suspensionculturemethod）：

是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。

34、初始植板密度（initalplantingdensity）：

单细胞固体平板培养时，细胞悬浮液接种到琼脂培养基上最初细胞密度。

35、临界密度（criticaldensity）：

单细胞培养时，初始植板密度低于某值培养细胞就不能进行分裂和发育成细胞团，则该值就是临界密度。

36、原生质体融合（protoplastfusion）也称体细胞杂交（somatichybridization）：

就是使分离下来的不同亲本的原生质体，在离体条件下通过诱导发生的质膜融合进而细胞核融合，像性细胞受精作用那样互相融合成一体的现象。

37、原生质体（protoplast）：

是指除去了细胞壁后的裸露的植物细胞。

38、无病毒苗（virus-freeplantlets）：

是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。

39、微尖嫁接技术（micrograftingshoot-tip）：

指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。

主要程序：

无菌砧木培养—茎尖准备—嫁接—嫁接苗培养—移栽。

40、指示植物（indicatorplantmethod）：

将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄主），利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。

41、经营思想（managementthought）：

是从事经营活动、解决经营问题的指导思想，它是随着生产力发展而发展的。

在经营思想指导下形成经营管理理论，经营管理理论用于指导生产经营实践，不断促进生产力发展。

42、经营方针（managementpolicy）：

是企业用于指导生产经营思想与经营环境相结合的产物，它规定企业一定时期的经营方向，是企业用于指导生产经营活动的指南针，也是解决各种经营管理问题的依据。

43、营销策略（marketingstrategy）：

是指植物组织培养生产企业在经营方针指导下，为实现企业的经营目标而采取的各种对策，如市场营销策略、产品开发策略等。

44、人工种子（artificialseeds）或体细胞种子（somaticseeds）。

任何一种在离体培养条件产生的繁殖体，无论是在涂膜胶囊中包裹的、裸露的或经过干燥的，只要能够发育成完整的植株，均称之为人工种子。

45、种质保存（germplasmconservation）：

是利用天然或人工创造的适宜环境，保存种质资源，使个体中所含有的遗传物质保持其完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。

46、超低温保存（cryopreservation）：

也叫冷冻保存（freezepreservation），一般以液态氮（-196℃）为冷源，使温度维持在-196℃。

在如此低温下，新陈代谢活动基本停止，处于“生机停顿”状态。

基本原理部分参考答案

1、简述植物组织培养的理论依据？

植物组织培养的理论依据是细胞全能性学说，即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。

2、植物组织培养有哪些特点？

（1）培养条件可以人为控制：

组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基质和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。

（2）生长周期短，繁殖率高：

植物组织培养由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。

另外，植株也比较小，往往20—30d为一个周期。

所以，虽然植物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗

（3）管理方便，利于工厂化生产和自动化控制：

植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，既利于高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。

它是未来农业工厂化育苗的发展方向。

它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫害等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地

3、培养基的种类？

（1）根据态相不同：

固体培养基、液体培养基

（2）根据培养物培养过程：

初代培养基、继代培养基

（3）根据作用不同：

诱导培养基、分化培养基、生根培养基

（4）根据营养水平：

基本培养基、完全培养基、改良培养基。

4、植物组织培养主要应用于哪些方面？

（1）快速繁殖运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株

（2）种苗脱毒针对病毒对农作物造成的严重危害，通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗

（3）远缘杂交利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种

（4）突变育种采用组织培养可以直接诱变和筛选出具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的品种

（5）基因工程主要研究DNA的转导，而基因转导后必须通过组织培养途径才能实现植株再生

（6）生物制品有些极其昂贵的生物制品，如抗癌首选药物--紫杉醇等，可以用大规模培养植物细胞来直接生产

5、固体培养基与液体培养基相比有何特点？

优点:

操作简便，通气问题易于解决，便于经常观察研究.

缺点:

培养物与培养基的接触（即吸收）面积小，各种养分在琼脂中扩散较慢，影响养分的充分利用，同时培养物排出的一些代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产生毒害作用。

6、论述植物生长调节物质在组织培养中的作用？

并列举常见的种类

（1）生长素类：

主要被用于诱导愈伤组织形成，促进细胞脱分化；促进细胞伸长；诱导根的分化，促进生根

（2）IAA（吲哚乙酸）；NAA（萘乙酸）；IBA（吲哚丁酸）；2,4—D（2,4—二氯苯氧乙酸）

（3）细胞分裂素类：

①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。

②促进细胞分裂与扩大。

③抑制根的分化。

抑制衰老，减少叶绿素分解，有保鲜效果。

包括6—BA（6—苄基腺嘌呤）、Kt（激动素）、Zt（玉米素）等。

7、在培养基中加入活性炭有什么作用？

（1）主要是利用其吸附作用，减少一些有害物质的影响

（2）活性炭使培养基变黑，有利于某些植物生根

（3）对形态发生和器官形成有良好的效应

8、与常规苗相比，试管苗具有哪些特点？

（1）生长细弱；

（2）光合作用差

（3）叶片气孔数目少，活性差

（4）根的吸收功能弱

（5）对逆境的适应和抵抗能力差

9、愈伤组织细胞的分化一般分几个时期？

各有何特点？

（1）诱导期：

①气体交换增加，如氧气的吸收增加

②RNA含量增加（增加到300%）

③蛋白质量增加（每个细胞的总增加量为200%）d酶活性增强

（2）分裂期：

①细胞的数目迅速增加

②每个细胞平均鲜重下降

③细胞体积小，内无液泡

d细胞的核和核仁增大到最大

e细胞中RNA含量减少，而DNA含量保持不变

f随着细胞不断分裂和生长，细胞的总干重、蛋白质和核酸含量大大增加，新细胞壁的合成极快。

（3）分化期：

①细胞分裂部位和方向发生改变

②形成瘤状或片状的分生组织结节和维管组织结节

③细胞的体积相对稳定，不再减少

d出现了各种类型的细胞

e生长旺盛的愈伤组织呈乳白色、白色或浅绿色，老化的多转化为黄色或褐色

10、分裂期愈伤组织的共同特征是什么？

细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，维持其不分化的状态，颜色浅而透明。

11、何为植物激素控制理论？

生长素与细胞分裂素比值高有利生根，比值低有利芽生长，比例合适诱导愈伤组织。

12、胚状体特点？

（1）不同于合子胚，因为它不是两性细胞融合产生。

（2）不同于孤雌/雄胚，因为它不是无融合生殖的产物。

（3）不同于器官发生方式形成的幼苗，因为它经历了与合子胚相似的发育过程，且成熟的胚状体是双极性结构。

13、单细胞培养有哪些方法？

各有何含义及特点

单细胞培养：

看护培养；微室培养；平板培养

（1）看护培养法是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。

特点：

①简便易行。

②效果好，易于成功。

③不能在显微镜下直接观察细胞生长过程。

（2）微室培养：

即将细胞培养在很少量的培养基中。

特点：

在培养过程中可连续进行显微观察，将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。

（3）平板培养法是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

特点：

可以定点观察；分离单细胞系比液体浅层培养容易；培养细胞气体交换不畅。

14、说明细胞在连续培养中，细胞数目会发生什么变化？

在整个培养过程中，细胞数目不断发生变化，呈现出明显的由慢到快，再到慢，最后增长停止的细胞周期。

细胞的生长呈S型曲线

①延迟期：

细胞很少分裂

②对数生长期：

细胞分裂活跃，细胞数目增加，增长速率保持不变

③直线生长期细胞生长和发育最明显的时期

④缓慢期生长逐渐缓慢：

培养液消耗将尽，有毒代谢物质增多，氧气减少

⑤静止期生长几乎处于停止状态，细胞数目增加极少，甚至开始死亡

15、简述原生质体作为遗传操作和生理生化研究的材料有何特点？

（1）没有细胞壁，有利于体细胞融合、体细胞杂交、基因转移和单细胞培养。

（2）原生质体能比较容易摄取外来的遗传物质。

16、我国的农作物无病毒苗繁育生产体系是怎样的？

国家级（或省级）脱毒中心——无病毒苗繁育基地——无病毒苗栽培示范基地——作物无病毒化生产。

（1）脱毒中心负责作物脱毒、无病毒原种鉴定与保存、提供无病毒母株或穗条；

（2）无病毒苗繁育基地将无病毒母株或穗条在无病毒感染条件下繁殖生产用无病毒苗；

（3）无病毒苗栽培示范基地负责进行无病毒苗栽培的试验和示范，在基地带动下实现作物无病毒化生产。

17、常用的冷冻防护剂有哪些？

其作用是什么？

（1）常见种类：

二甲基亚砜（DMSO），甘油，糖，糖醇类等

（2）作用：

降低冰点，促进过冷却和“玻璃态化”的形