常用鉴定试剂的配制和应用.docx
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常用鉴定试剂的配制和应用
常用鉴定试剂的配制和应用
一、通用试剂
1、碘试剂
检查一般有机化合物。
（1）碘蒸气预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内，使容器空间被碘蒸气饱和，将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。
有时，于容器中加放一小杯水，增加容器内的湿度，可提高显色的灵敏度。
（2）0.5％碘的氯仿溶液喷洒试剂，置空气中待过量的碘挥发后，喷1％淀粉溶液，斑点由棕色转为蓝色。
2、硫酸试剂
检查一般有机化合物。
5％硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。
喷洒后，置空气中干燥15min，100℃烤至斑点呈色（不同化合物呈不同颜色）。
3、重铬酸钾-硫酸试剂
检查一般有机化合物。
5g重铬酸钾溶于l00ml40％硫酸中。
喷该试剂后，150℃加热至斑点出现（不同化合物呈不同颜色）。
4、磷钼酸试剂
检查还原性成分。
5％磷钼酸乙醇溶液。
喷洒后，120℃加热至呈蓝色斑点。
5、磷钨酸试剂
检查还原性成分
20％磷钨酸乙醇溶液。
喷洒后，120℃烘烤，还原性物质呈蓝色斑点。
6、硝酸银-氢氧化铵试剂
检查还原性成分。
溶液I：
0.1mol／L硝酸银溶液。
溶液Ⅱ：
10％氢氧化铵溶液。
临用前溶液I和Ⅱ以
1︰5混合。
喷洒后105℃加热5~l0min，至深黑色斑点出现。
7、中性高锰酸钾试剂
检查易还原性成分。
0.05％高锰酸钾溶液。
喷洒后粉红色背景上显黄色斑点。
8、碱性高锰酸钾试剂
检查还原性成分。
溶液I：
1％高锰酸钾溶液。
溶液Ⅱ：
5％碳酸钠溶液。
溶液I和Ⅱ等量混合使用，喷洒后，粉红背景上显黄色斑点。
9、四唑蓝试剂
检查还原性成分。
溶液I：
0．5％四唑蓝甲醇溶液。
溶液Ⅱ：
25％氢氧化钠溶液。
临用前两液等量混合。
喷洒后，微热或室温放置显紫色斑点。
10、荧光素-溴试剂
检查不饱和化合物。
溶液I：
0.1g荧光素溶于l00ml乙醇中。
溶液Ⅱ：
5g溴溶于l00ml四氯化碳中。
先喷洒溶液I，然后将薄层板放入盛有溶液Ⅱ的缸内，黄色斑点出现后，于紫外光灯下检视，红色底板上显黄色荧光斑点。
11．荧光显色试剂
检查一般有机化合物。
（1）0.2％2，7--'氯荧光素乙醇溶液。
（2）0.01％荧光素乙醇溶液。
（3）0.1％桑色素乙醇溶液。
（4）0.05％罗丹明B乙醇溶液。
喷洒任一溶液，不同的化合物在荧光背景上可显黑色或其它荧光斑点。
二、苷类鉴定试剂
1、糖鉴定试剂
（1）1-萘酚-硫酸试剂
检查还原糖。
①溶液I：
10％1-萘酚乙醇溶液。
溶液Ⅱ：
硫酸。
取lml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I2～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液Ⅱ，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。
②15％1-萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13ml、乙醇87ml及水8ml混匀后使用。
喷洒于薄层板上，100℃烤3～6min，多数糖显蓝色，鼠李糖显橙色，所显颜色于室温可稳定2天～3天。
（2）斐林试剂
检查还原糖。
‘
溶液I：
6.93g结晶硫酸铜溶于l00ml水中。
溶液Ⅱ：
34.6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于l00ml水中。
取lml样品热水提取液，加入4～5滴用时配制的溶液Ⅰ、Ⅱ等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。
如检查多糖和甙，取lml样品水提液，加入lmll0％盐酸溶液，在沸水浴上加热l0min，过滤，再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。
（3）氨性硝酸银试剂
检查还原糖。
硝酸银1g，加水20ml溶解，小心滴加适量氨水，边加边搅拌，至开始产生的沉淀将近全部溶解为止，过滤。
取lml样品的水溶液，加入lml试剂，混匀后，40℃微热数分钟，管壁析出银镜或产生黑色沉淀为阳性反应。
本试剂也可作为色谱显色剂，喷洒后于110℃加热数分钟，显棕黑色斑点为阳性反应。
还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰。
（4）茴香醛-硫酸试剂
检查糖类化合物。
硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中，需临用前配制。
喷洒于薄层板上，105℃加热至显示色斑，不同糖显不同颜色。
（5）苯胺-邻苯二甲酸试剂
检查糖类化合物。
苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。
作色谱显色剂用。
喷后105℃烤5min，显红棕色斑点。
（6）l,3-二'羟基萘酚-磷酸试剂
检查酮糖、醛糖。
0.2％1，3--'二羟基萘酚乙醇溶液50ml与85％磷酸50ml混合均匀后使用。
喷后105℃烤5min～10min，酮糖呈红色，醛糖显淡蓝色。
（7）苯胺-二苯胺-磷酸试剂
检查糖类化合物。
苯胺4ml、二苯胺4g及85％磷酸20ml溶于丙酮200ml中。
喷洒于薄层板上，85℃加热10min，不同糖显不同颜色。
（8）2，3，5-三苯基氯化四氮唑（T．T．C）试剂
检查还原糖。
溶液Ⅰ：
4％T．T．C甲醇溶液。
溶液Ⅱ：
4％氢氧化钠溶液。
临用时将溶液Ⅰ和Ⅱ等体积混合。
喷洒后，100℃加热5～10min，显红色斑点为阳性反应（醛类无干扰）。
（9）三氯化铁-冰醋酸（K．K）试剂
检查-去氧糖，常用于强心甙。
溶液I：
1％三氯化铁溶液0.5ml，加冰醋酸至l00ml。
溶液Ⅱ：
硫酸。
取样品乙醇提取液lml，置试管中，水浴上蒸去乙醇，残渣用0.5ml溶液I溶解，沿试管壁缓缓加入溶液Ⅱlml，静置分层，上层渐显蓝色，下层显红色或棕色为阳性反应（其颜色随苷元羟基和双键的位置和个数不同而不同）。
（10）占吨氢醇试剂
检查-去氧糖（常用于强心甙）。
10mg占吨氢醇溶于100ml冰醋酸中，再加入lml硫酸混合。
取lml样品，加入试剂lml，置水浴上加热30min，显红色为阳性反应。
（11）Gregg-Gisvold试剂
检查2．6-去氧糖。
溶液I：
10％三氯化铁溶液。
溶液Ⅱ：
1％盐酸甲醇溶液（97.2ml甲醇中含2．8ml盐酸）。
0.5ml溶液I与100ml溶液Ⅱ混合。
将样品的乙醇溶液点于滤纸片上，晾干后，喷洒上述混合试剂，110℃加热5min，显蓝色为阳性反应。
（12）3，5-二氨基苯甲酸-磷酸试剂
检查2-去氧糖。
3，5-二氨基苯甲酸二盐酸盐1g溶于80％磷酸25ml，加水稀释至60ml。
喷洒后，100℃加热15min，2-去氧糖在日光下显棕色，在紫外光下显黄绿色荧光。
（13）对硝基苯胺-过碘酸试剂
检查去氧糖。
溶液I：
饱和偏高碘酸溶液1份加水2份混匀。
溶液Ⅱ：
1％对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。
先喷溶液I，放置10min，再喷溶液Ⅱ，去氧糖显黄色，紫外光下显强荧光，再喷5％氢氧化钠甲醇溶液，颜色转绿，乙二醇同样显色。
2、酚类鉴定试剂
（1）三氯化铁试剂
检查酚类化合物、鞣质。
1～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。
取1m1样品的乙醇溶液，加入试剂1～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。
作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或蓝色斑点为阳性反应。
•
（2）4-氨基安替匹林-铁氰化钾（Emerson）试剂
检查酚羟基对位无取代基的化合物。
溶液I：
2％4-氨基安替匹林乙醇溶液。
溶液Ⅱ：
8％铁氰化钾溶液。
作色谱显色剂用，先喷洒溶液I，再喷洒溶液Ⅱ，用氨气熏，显橙红或深红色斑点为阳性反应。
（3）Gibbs试剂
检查酚羟基对位无取代基的化合物。
溶液I：
0.5％2，6-溴（氯）苯醌氯亚胺的乙醇溶液。
溶液Ⅱ：
1％氢氧化钾乙醇溶液。
取lml样品的乙醇溶液，滴加溶液Ⅱ，使pH9～10，再加入1滴～2滴溶液I，显深蓝色为阳性反应。
（4）铁氰化钾-三氯化铁试剂
检查酚类、芳香胺类及还原性物质。
溶液I：
1％铁氰化钾溶液。
溶液Ⅱ：
2％三氯化铁溶液。
临用前等体积混合。
喷洒后酚性成分呈蓝色斑点，再喷20％盐酸，能使颜色加深。
纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液。
（5）重氮化（Pauly）试剂
检查酚羟基对位无取代基化合物。
溶液I：
0.35g对硝基苯胺溶于5ml盐酸中，加水稀释至50ml。
溶液Ⅱ：
5g亚硝酸钠溶于70ml水中。
取1m1样品的乙醇溶液，加入1m13％碳酸钠溶液，在沸水浴中加热3min，再在冰水浴中冷却后，加入1～2滴溶液Ⅰ与Ⅱ的混合液（临用时，在冰水浴中等量混合），显红色为阳性反应。
作色谱显色剂用，将溶液I与Ⅱ各l0ml混合，再加20ml1％碳酸钠溶液（均临用时在冰水浴中混合），喷洒后，显黄、红、紫等色斑点为阳性反应。
（6）牢固蓝B盐试剂
检查酚类化合物。
溶液I：
新配的0.5％牢固蓝B盐的溶液。
溶液Ⅱ：
0.5％氢氧化钠溶液。
先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，呈棕、紫、或绿色者为阳性反应。
能偶合的芳香胺类有干扰。
3．黄酮类鉴定试剂
（1）盐酸-镁粉试剂
检查黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）类化合物。
取lml样品的乙醇溶液，加入数毫克镁粉，滴加数滴盐酸，必要时水浴上微热，显红-紫色为阳性反应。
（2）Shinoda试剂
采用含2％锌粉（W／W）-硅胶薄层板，展层后喷20％盐酸溶液，黄酮（醇）类呈红紫色。
（3）三氯化铝试剂
检查具有邻二酚羟基或3-羟基、4-酮基或5-羟基、4-酮基的黄酮类化合物。
1％三氯化铝乙醇溶液或5％三氯化铝乙醇溶液。
喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察，呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应。
也可在滤纸上和试管中进行。
（4）中性醋酸铅或碱式醋酸铅试剂
检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。
饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液。
取1ml样品的乙醇溶液，加1～2滴试剂，产生黄色沉淀。
（5）锆-柠檬酸试剂
检查具3-羟基或5-羟基的黄酮类化合物。
溶液I：
2％二氯氧锆甲醇溶液。
溶液Ⅱ：
2％柠檬酸甲醇溶液。
取1mg样品，用甲醇溶解，加入溶液Ilml，呈鲜黄色示有3-羟基或5-羟基；再加入溶液Ⅱ1m1，黄色不褪，示有3-羟基；黄色褪去，加水稀释后变为无色，示无3-羟基，但有5-羟基。
也可在滤纸上进行，得到的锆盐络合物多呈黄绿色，并具荧光。
（6）氨性氯化锶试剂
检查具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物。
溶液I：
1％氯化锶甲醇溶液。
溶液Ⅱ：
氨蒸气饱和的甲醇溶液。
取1mg样品的甲醇溶液，加入3滴溶液I，再加3滴溶液Ⅱ，产生绿-棕-黑色沉淀为阳性反应。
（7）醋酸镁试剂
检查黄酮类、二氢黄酮类化合物，及羟基蒽醌类衍生物。
1％醋酸镁甲醇溶液。
在滤纸或薄层板上，点1滴样品醇溶液，挥去醇后，点l滴试剂于样品斑点边缘，加热干燥，于紫外灯下观察，黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光。
显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型蒽醌。
（8）硼氢化钾试剂
检查二氢黄酮类化合物。
2％四氢硼钾的甲醇溶液。
取样品1～2mg溶于甲醇中，加等量试剂lml后，加数滴盐酸，呈红-紫红色为阳性反应。
薄层色谱上喷试剂，5min后放人盐酸蒸气槽内呈色。
4．醌类化合物鉴定试剂
（1）Borntrager试剂
检查羟基蒽醌衍生物。
2％氢氧化钠或2％碳酸钠溶液（或甲醇溶液）。
取lml样品的乙醇溶液，加lml试剂，呈红色为阳性反应。
在薄层色谱上喷洒试剂，显橙黄或红色斑点。
黄酮类化合物遇碱也能反应生成黄、橙、红色等。
（2）菲格尔（Feigl）试剂
检查醌类衍生物。
溶液I：
25％碳酸钠溶液。
溶液Ⅱ：
4％甲醛的苯溶液。
溶液Ⅲ：
5％邻二硝基苯的苯溶液，取1滴样品的苯溶液，加入上述3种试液各1滴，混匀，置水浴上加热l～4min，呈显著的紫色为阳性反应。
（3）硼氢化钠-二甲基甲酰胺试剂
检查蒽醌及其衍生物。
20g硼氢化钠溶于100ml二甲基甲酰胺中。
作色谱显色剂用。
喷洒试剂后，于紫外光灯下观察，显强的黄、绿或蓝色荧光为阳性反应。
（4）硼酸试剂
检查羟基蒽醌类化合物。
1％硼酸溶液。
作色谱显色剂用，喷洒后，置紫外光灯下观察，呈黄、橙、红色荧光为阳性反应。
（5）对亚硝基二甲基苯胺试剂
检查蒽酮类衍生物。
0.1％对亚硝基二甲基苯胺的吡啶溶液。
取1m1样品的乙醇溶液，置水浴上蒸干，残渣用吡啶溶解，再滴试剂数滴，显紫色或绿色为阳性反应。
（6）活性次甲基试剂
检查苯醌及萘醌类衍生物。
lg活性次甲基试剂（例如丙二酸酯、乙酰乙酸酯等）溶于30ml氨与乙醇的等体积混合溶液中。
取5ml样品的乙醇溶液，加入3ml试剂，显蓝、紫或红色为阳性反应，萘醌分子中具羟基，可使反应减慢或不起反应。
5．内酯、香豆素类鉴定试剂
（1）开环-闭环试剂
检查内酯环。
溶液I：
1％氢氧化钠溶液。
溶液Ⅱ：
2％盐酸溶液。
取lml样品的乙醇溶液，加2ml溶液I，置沸水浴上加热3～4min，溶液比未加热时澄清。
再加溶液Ⅱ酸化（pH2），放置，溶液又变为混浊。
酚性化合物和有机酸有干扰，但可用下法予以区别，取样品乙醇溶液数毫升，置水浴上蒸干溶剂，用乙酸乙酯溶解后置分液漏斗内，用5％氢氧化钠溶液萃取酚性及有机酸成分，乙酸乙酯溶液用水洗至中性后按上法检测。
（2）异羟肟酸铁试剂
检查内酯环。
溶液I：
7％盐酸羟胺甲醇溶液（新鲜配制）。
溶液Ⅱ：
10％氢氧化钾甲醇溶液。
溶液Ⅲ：
1％三氯化铁甲醇溶液。
取1m1样品的甲醇溶液，加入溶液I、Ⅱ各5滴，置沸水浴上加热3min～4min，冷却后，用稀盐酸调至pH3～4，再加入溶液Ⅲ1滴～2滴，显橙红或紫红色为阳性反应。
作色谱显色用，将溶液I，Ⅱ等量混合，喷洒后空气中干燥10min，再喷溶于1％盐酸中的三氯化铁溶液，显橙红或紫红色斑点。
（3）稀氢氧化钠溶液将检样点于滤纸片或薄层上，试样边缘点上碱液，晾干，置紫外灯光下观察，多数羟基香豆素有强的荧光。
配合酚类鉴定试剂的检查，以确定游离酚羟基的存在及取代位置。
6，强心甙鉴定试剂
（1）碱性3，5-二硝基苯甲酸（Kedde）试剂
检查强心甙的、-不饱和内酯环。
2％3，5-二硝基苯甲酸甲醇溶液与5％氢氧化钾溶液，用前按1︰l混合。
取1m1样品的甲醇溶液，加入3～4滴试剂，显紫红色为阳性反应，几分钟后褪色。
也适用于薄层色谱。
（2）碱性苦味酸（Baljet）试剂
检查强心甙的、-不饱和内酯环。
9ml1％苦味酸乙醇溶液与1mll0％氢氧化钠溶液用前配制混合。
用1m1样品的乙醇溶液，加入1滴试剂，放置15min左右，显橙红色或红色为阳性反应。
（3）碱性亚硝酰铁氰化钠（Legal）试剂
检查不饱和内酯、甲基酮或活性亚甲基（常用于强心甙）。
溶液I：
0.5％亚硝酰铁氰化钠乙醇溶液。
溶液Ⅱ：
10％氢氧化钠溶液。
取1m1样品的甲醇溶液，置水浴上蒸干，冷却后加lml吡啶溶解残渣，加入4～5滴溶液I和1～2滴溶液Ⅱ，溶液显红色并逐渐消失为阳性反应。
用于薄层色谱检查，将1g亚硝酰铁氰化钠溶于10％氢氧化钠-乙醇（1︰1）的溶液中，喷洒后，显红色或紫色斑点。
（4）磷酸-溴试剂
检查强心甙。
溶液I：
10％磷酸乙醇溶液。
溶液Ⅱ：
溴化钾饱和溶液-溴酸钾饱和溶液-25％盐酸溶液（1﹕l﹕1）。
用于薄层色谱检查，取溶液I喷洒后，125℃加热12min，紫外光灯下观察。
再将薄层板烤热，趁热喷溶液Ⅱ，不同的强心苷显示不同的颜色斑点。
（5）醋苷-硫酸（Liebermann-Burchard）试剂
检查甾体、甾体皂苷、三萜类及强心苷。
取0.1～0.2mg样品，置于白瓷反应板上，加入0.3ml醋酐，使样品溶解，沿边缘滴入硫酸，出现红-紫-蓝-绿色，最后褪色为甾体皂甙，三萜皂甙只能呈黄-红-紫等。
（6）三氯醋酸-氯胺T试剂
检查洋地黄毒甙元衍生物和2，6-去氧糖苷。
25％三氯醋酸乙醇（氯仿）溶液4ml与3％氯胺T溶液1ml混匀。
喷洒后，100℃加热数分钟，于紫外光灯下观察。
洋地黄毒甙元的苷类显黄色荧光，羟基洋地黄毒苷元的甙类显亮蓝色荧光，异羟基洋地黄毒苷元的苷类呈灰蓝色荧光。
洋地黄毒糖的苷（2，6-去氧糖苷）在可见光下呈暗蓝色。
强心苷的鉴定应由苷元（甾体母核和不饱和五元内酯）和2-去氧糖两部分共同证实。
7、甾体、三萜及其苷的鉴定试剂
（1）三氯化锑试剂
检查甾体、萜类、皂苷。
25g三氯化锑溶于75ml氯仿中。
喷后100℃加热5min，不同的皂苷元在可见光或紫外光灯下显不同颜色。
（2）三氯醋酸试剂
检查皂甙。
3.3g三氯醋酸溶于10ml氯仿，再加入1～2滴30％过氧化氢溶液。
将样品的氯仿溶液滴在滤纸上，加试剂l滴，加热至60℃，生成红色-紫色为甾体皂甙；加热到100℃始见显色为三萜皂甙o
（3）硫酸：
甲醇（1︰1）试剂喷后加热，不同皂苷元可显红褐色、紫色、黄色或黑色。
所显颜色与温度无关。
（4）氯磺酸：
乙酸（1︰1）试剂喷后130℃加热5min，各种皂苷元可显天蓝色、
紫色、粉红色、淡棕色等，在紫外光灯下也显不同的荧光。
（5）香草醛-硫酸试剂
检查高级醇类、酚类、甾体、萜类、芳香油。
1g香草醛溶于100ml硫酸中，或0.5g香草醛溶于100ml硫酸-乙醇（4﹕1）中。
喷洒后，室温、120℃加热观察，显示红、蓝、紫等各种颜色斑点。
8．氰苷鉴定试剂
（1）苦味酸试纸取适当大小的滤纸，浸入苦味酸饱和溶液中，浸透后取出，晾干。
再浸入10％碳酸钠溶液内，迅速取出，晾干即得。
取样品粉末0.5g置试管中，加水混合均匀，加入稀硫酸数滴。
在试管口夹放一条苦味酸试纸（试纸不能接触到药液），塞紧。
将试管在沸水浴中加热数分钟，试纸变成红色，表明含氰苷。
（2）普鲁士蓝试验
溶液I：
10％硫酸亚铁溶液（用前配制）。
溶液Ⅱ：
5％三氯化铁溶液。
取样品粉末0.5g置试管中，加水湿润，立即用经10％氢氧化钾溶液湿润的滤纸将试管口包紧，于热水浴上加热10min后，在滤纸上加溶液I、稀盐酸和溶液Ⅱ各1滴，滤纸显蓝色为阳性。
三、挥发油鉴定试剂
1、茴香醛-硫酸试剂
硫酸1m1加至50ml冰醋酸中，冷却后加入茴香醛0．5ml（必须临用时配制）。
喷洒后,105℃加热，挥发油中各成分显不同颜色。
2、碘化钾-冰醋酸-淀粉试剂
检查过氧化物。
溶液I：
4％碘化钾溶液10ml与冰醋酸40ml混和，再加锌粉一小勺过滤。
溶液Ⅱ：
新制的1%淀粉溶液。
先喷溶液I，5min后大量喷溶液Ⅱ，直至薄层透明为止。
显蓝色斑点为过氧化物。
3、2，4-二硝基苯肼试剂
lg2，4-二硝基苯肼、36％盐酸l0ml溶于1000ml乙醇中。
喷洒后，显黄红色斑点为阳性反应。
4、硝酸铈试剂
检查醇类化合物。
硝酸铈6g溶于2.5％100ml硝酸溶液中，喷洒后，黄色背景上显棕色斑点为阳性反应。
5、钒酸铵（钠）-8-羟基喹啉试剂
检查醇类化合物
1％钒酸铵（钠）溶液1ml和8-羟基喹啉的6％乙醇溶液1ml混和，用30ml苯萃取，分取灰蓝色的苯溶液为试剂。
喷洒后，微加热，灰蓝色背景上显淡红色斑点为阳性反应。
挥发油组成复杂，需依据结构特征如醇、醛、酮、酚、醚、酯、内酯等选择鉴定试剂。
四、生物碱鉴定试剂
1、改良碘化铋钾试剂
为生物碱通用显色剂。
溶液I：
0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸，加水40ml。
溶液Ⅱ：
8g碘化钾溶于20ml水中。
溶液I和溶液Ⅱ等量混和，于棕色瓶中可以保存较长时间。
目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配置：
7.3g碘化铋钾、10ml冰醋酸加水60ml。
取lml样品的稀酸溶液，加1滴～2滴试剂，产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。
作为薄层色谱显色剂，取混和液1ml、醋酸2ml、水10ml混和即得。
喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应。
2、碘化汞钾
为生物碱通用沉淀试剂。
1.36g氯化汞和5g碘化钾各溶于20ml水中，将氯化汞溶液慢慢加入碘化钾溶液，混合后，加水至100ml。
取lml样品的稀酸溶液，加1～2滴试剂，产生类白色沉淀为阳性反应。
3、硅钨酸试剂
为生物碱通用沉淀试剂。
1g硅钨酸溶于20ml水中，加10％盐酸使成pH2左右。
取1ml样品的稀酸溶液，加入1～2滴试剂，产生白色至褐色沉淀为阳性反应。
4、碘化铂钾（碘铂酸）试剂
为生物碱通用沉淀试剂。
10％六氯铂酸3ml和97ml水混合，加6％碘化钾溶液100ml，混合均匀（临用前配制）。
取1ml样品稀酸溶液，加l～2滴试剂，不同生物碱显不同颜色沉淀。
5、碘-碘化钾试剂
为生物碱沉淀剂。
1g碘及10g碘化钾溶于50ml水中，加2ml醋酸，再用水稀释至100ml。
取1ml样品稀酸溶液，加入试剂1～2滴，产生棕色或褐色沉淀为正反应。
6、苦味酸试剂
为生物碱通用沉淀试剂。
苦味酸1g溶于100ml水中。
取1ml样品中性溶液，加入试剂1～2滴，产生黄色晶形沉淀。
7、鞣酸试剂
为生物碱通用沉淀试剂。
鞣酸1g用1ml乙醇溶解后，加水至10ml。
取lml样品稀酸溶液，加入试剂1～2滴产生白色至棕黄色沉淀。
8、硫酸铈-硫酸试剂
检查生物碱及含碘化合物。
0.1g硫酸铈悬浮于4ml水中，加三氯醋酸1g，加热至沸，放冷，逐滴加入硫酸直到浑浊消失为止。
喷洒试剂后，110℃加热数分钟，呈色（不同生物碱显不同的颜色）。
9、钒酸钠-硫酸试剂
检查生物碱。
1g钒酸钠溶于100ml硫酸中。
喷洒试剂后，不同生物碱产生不同颜色，如莨菪碱显红色，马钱子碱显血红色，士的宁显蓝紫色，奎宁显淡橙色，吗啡显棕色等。
10、雷氏铵盐试剂
检查水溶性生物碱。
2％硫氰化铬铵溶液（临用时配制）。
取1ml样品的弱酸性水溶液（pH5～6），加入1～2滴试剂，产生暗红色沉淀为阳性反应。
11、Ehrlich试剂
检查吡咯、吲哚类生物碱。
1g对二甲氨基苯甲醛溶于25ml36％盐酸和75ml甲醇混合溶液中。
取1ml样品的稀酸溶液，加人数滴试剂，加热，显紫红或青紫色为阳性反应。
五、鞣质类鉴定试剂
1、氯化钠-明胶试剂
检查鞣质。
1g明胶溶于50ml水中（60℃水浴中加热），加入10g氯化钠，使完全溶解后，用水稀释到100ml。
取1m1样品的60℃水浸液，加入1～2滴试剂，产生白色浑浊或沉淀
2、对甲苯磺酸试剂。
检查鞣质、甾体、黄酮类。
20％对甲苯磺酸氯仿溶液。
薄层色谱上喷洒试剂后，100℃加热5min显出不同颜色的斑点。
3、新鲜石灰水试剂
检查鞣质。
取1ml样品的热水提取溶液，加新鲜石灰水上清溶液数滴，产生青灰色沉淀为可水解鞣质，产生棕或棕红色沉淀为缩合鞣质。
六、氨基酸、多肽、蛋白质鉴定试剂
1、茚三酮试剂
检查2-氨基酸及含有2-氨基酸的肽类、氨基糖和蛋白质。
0.2g茚三酮溶于l00ml正丁醇中，加冰醋酸3ml。
或者，0.2g茚三酮溶于l00ml乙醇或丙酮中。
取1ml样品的冷水浸液，加入2～3滴试剂，沸水浴上加热5min放冷，显蓝色或蓝紫色。
2、吲哚醌试剂
检查氨基酸、多肽。
吲哚醌1g溶于100ml丙酮中，加入10ml醋酸。
作薄层色谱显色剂，喷洒试剂后，100～110℃加热l0min，显蓝、红、桃红或棕色斑点。
3、1，2-萘醌-4-磺酸钠试剂
检查氨基酸。
0.02gl，2-萘醌-4-磺酸钠溶于l00ml5％碳酸钠溶液中，新鲜配制。
喷洒试剂后，室温晾干，不同氨基酸出现不同的颜色。
4、双缩脲试剂
检查多肽、蛋白质。
七、有机酸鉴定试剂
1、溴酚蓝试剂
检查有机酸。
0.1％溴酚蓝的乙醇溶液。
作薄层色谱显色剂，喷洒后，蓝色背景上呈黄色斑点。
如不明显，可再喷氨水，然后暴露在盐酸气体中，则为黄色背景上呈蓝色斑点。
2、芳香胺-还原糖试剂
检查有机酸。
5g苯胺和5g木糖溶于100ml50％乙醇中。
作薄层色谱显色剂，喷洒试剂后，
125～130℃加热至出现棕色斑点。
3、吖啶试剂
检查有机酸。
0.005％的吖啶乙醇溶液。
喷洒试剂后，于紫外光灯下观察，显黄色荧光。
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