胶体金技术.docx
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胶体金技术
胶体金技术
问：
检测cle，金标记抗体扩大后，烘干后检测各项指标良好，但室温保存一天后，T线下降很多是由什么原
因造成的？
室内开除湿机，组装好的板子，在自封袋里加干燥剂。
我烘干用了一整天，30多个小时了，还有方法进行改进吗，这个抗体还能用来生产吗？
经检测还是金子出了问题，我就是先少量做，找出各个值，然后才扩大的。
我就是先3ml，再10ml。
T：
（涛哥）那可能是生产放大过程控制的问题。
重新试验，先小试，逐步放大。
这就不行了啊，这还算不上生产扩大呢，怀疑误操作，重复试验试试，3ml的、10ml的都做一下。
0是啊，有时标记完检测后，T线就下降（比预实验）
T:
标记完检测就下降，说明你标记本身就有问题呗。
你标记条件太脆弱，主要考虑你标记条件，重新优化下。
0如果我再调整pH值，抗体浓度，灵敏度就会达不到了
T：
通过其他途径提高灵敏度。
问：
请问为什么C线包被3mg/ml不出现条带，而2mg/ml的就有条带出现呢？
T：
正常，从蛋白固定基本原理出发，好好想想。
NC结合蛋白的能力是有限的，其结合位点是会饱和的，假
设其结合能力仅仅为2mg，你包被3mg，那边必然有相当一部分是结合不牢固或者压根就没固定住的，样本层析之后，金标蛋白结合了这些不牢固的蛋白，就会流走，不会显色。
检测线，也会有同样的情况，不过检测线包被过量的影响不止这么简单。
我主要指夹心法。
0一般调整膜上浓度时在湿法时调整还是干法时调整啊？
问：
标记好的胶体金有沉淀是什么原因？
T：
常见的原因：
标记条件不合适，封闭物质不纯，复溶液不合适都有可能，当然颗粒大了，也容易沉淀。
0你们主要用什么方法摸索最佳PH值？
1.用碳酸钾用量调整，搞一排，然后看变色和离心后现象，还有检测结果啊。
0这样岂不是需要很多抗体？
呵呵
2.标记又用不了多少抗体，又不是包膜。
0离心后现象，怎么样的是理想的？
3.就是没有预期想要的略微蓬松有红色的沉淀，比如贴壁、黑点、离不干净等，离心速度时间也要选好。
0是啊，之前就发现有点贴壁和黑点，我延长了离心时间也没用。
4.小号金子1ml离心几分钟就够了。
越大速度越低时间，这个速度和时间折中下自己调整。
问：
不知道那些强假阳性有什么办法可以抑制？
T：
你加阻断剂试过没？
0试过几种，没有效果，能阻断C线，对T线基本没阻断。
T：
照这么说的话既然是同一对抗体而且胶体金法临床假阳性率这么高，我觉得你这对抗体可能对某种因素太敏感了吧，ELISA是共价标记胶体金是物理标记是会有差异。
（涛）
0现在就是找不到原因，那强阳漏检呢？
其实也有试过好几个抗体配对，基本都是那样的结果
问：
请教一下各位大虾，多抗标记的时候要注意哪些细节呢？
T：
尽量别标记多抗，实在是想标记多抗，把标记PH提高点。
问：
划线时的湿度条件是NC膜制备的要点之一，湿度应控制在45%〜65%，有文献支持吗？
T：
文献呢是有滴，不过NC供应商也会给你建议滴，你自己也是可以探索滴，最终都是要以产业化需要为准。
1.主要膜吸收蛋白的时候要是湿度太低会比较疏水，不利于吸收，一般在40%以上，膜在点之前在这个环境
下放置一定时间平衡一下。
0点完的膜烘干后的湿度呢？
是不是要低一点。
2.湿度不低，你怎么烘干啊。
0呵呵，我的意思是已经烘干的板子拿出来切条时的湿度一般在多少啊。
没办法，我刚接触胶体金，现在公司在申报，委托的公司（艾伟德）给的资料很乱，前后都不对应。
问：
谁知道MP的HCVBLOT3.0哪有卖？
T：
找丽珠吧，不过不一定卖给你，独家代理。
问：
抗体灵敏度太高，有什么思路去降低灵敏度，从而达到规定的cutoof值呢？
1.反标，偶联抗原去标记，把抗体点T线，同样的原料可以下降一个数量级的灵敏度。
T：
THEONE说的对，从不公平竞争到公平竞争，灵敏度会下降比较明显的。
0质控线没了？
2.你不会用单独的质控系统的啊？
rabbitIgG和羊抗兔的多抗。
T：
楼上说的对。
问：
请教一下，Fusion5用来包被时，需要进行处理吗？
T：
当然，是不可以直接使用的。
WHATMAN有相关说明资料，丁香园上也有相应的文献翻译。
0用作金标垫行吗？
成本高不高？
T：
当然高，Fusion5有专用用途。
0用在哪方面比较好？
T：
多方面，比如同时用做样品垫和金垫，改善CV，比如某些高附加值数显产品，因其设计的需要。
这个材料有专用用途，用好了的话，效果是非常好的，小日本用的不错。
4.Fusion5性能非常优越，不信自己要点样品比较下。
问：
各位前辈，请问你们谁知道HCV的国家盘里面到底有哪些片段血清啊。
T：
各个片段的都有一般NS3片段的容易漏检最好单独再加上NS3片段。
问：
请教各位高手：
免疫层析试纸中，PH对信号强弱，反应特异性的影响是怎样的关系？
T：
不可一概而论啊，最好哪个产品举个实例。
问：
有问题请教，试纸条想大批量生产成产品，其中标记胶体金的单克隆抗体怎么大批生产呀？
都是打小鼠吗？
T：
可以外购啊。
0但是我们做的抗体外面没有卖，我们已经做出来杂交瘤细胞株了，如果每次都打小鼠去腹水的话这其中批次
的差别是不是有啊？
T：
只要细胞株一切正常的话，单位浓度下的单抗活性，批次间差异不大。
每次纯化，纯度多少会有点差异，批间差肯定是有的，不过正常来讲，不会对生产产生太大影响。
0那我再标记的时候条件是不是还得重新摸索啊？
T:
不用，其实你的单抗生产岀来，肯定会做质检的。
0就纯化好了之后，浓度测出来，然后就按摸索好的浓度标记就好了吗？
T:
满足质检要求，成品生产工艺，就不用变。
你得先质检，万一细胞株有问题呢。
0我们是大学里，好像没有做质检的啊。
T:
连质检都没有还搞什么产业化啊，想搞产业化就正儿八经来，要么跟生产企业合作，搞委托加工。
就算没有正儿八经的质检，起码一批单抗生产岀来要小试下吧，要不然直接批量生产，万一有问题损失岂不是很大。
0一般委托加工他们可以给大量生产腹水吗，我们提供杂交瘤细胞株。
T:
干嘛不在高校做完这部分呢，花的是国家的钱，用的是免费劳动力。
把单抗做好，然后委托企业做成品，岂不是更好。
0您的意思就是我们自己大量生产岀腹水，然后委托企业吗？
T:
干脆把纯化也做了呗，提供纯化好的单抗给企业。
企业会对入厂的原材料进行检验的。
0那如果我们纯化好了之后，那么多，企业一检查原材料不行，我们也白做了呀。
T:
不行，那肯定是白做了啊。
1.关键是你抗体制备的工艺要过关，每次制备的批间差异大的话，说明单抗制备工艺不成熟，需要优化。
问:
新手请教个问题，验证的ELISA抗体对可以直接用于胶体金研发吗？
只要通过调整浓度配比即可？
还是需要重新寻找、检测抗体对？
T:
这个不好说，ELISA能用的，胶体金不一定能用，先做做试试吧，不行再换。
0这个周期长吗？
T:
看实验技能，如果准备工作做好的话，一天以内。
0抗体对反应，ELISA和胶体金，除了载体不一样，还有很多差别吗？
我开始觉得可以直接拿过来用呢。
T:
差别很多很多很多很多，位阻亚型纯度••…都是区别。
大部分都可以的。
0正常情况下，产品研发周期要多久？
1.顺利的俩月足够，不顺利的两年都不够。
T:
举个例子:
比如说一个常规项目，原料成熟；质控品容易获得；标准无国标无行标，自己定标准；那么一整套工艺调试流程走下来，再做点性能评估试验，三个月吧。
不考虑稳定性测试。
如果是个科研课题的话，两个月足够了。
0我现在就是有个ELISA的盒子，有现成的抗体对，想用胶体金的方法实现检测，看看这种可能性。
T:
可能性很大。
2.酶免能用的原料，80%在胶体金项目上会失败。
T:
九天这个说的有点绝对了吧。
3.不算绝对，这个比例已经比较乐观了。
大部分问题就岀现在，活性不够上，酶免可以通过加大浓度提升活性，可是胶体金实验的活性提升范围很小。
而且，涉及到前带问题，更是不好解决。
T:
我这80%都能成功。
问:
我最近做胶体金，用标记好的金标抗体检测抗原，不识别，好着急啊。
1.不要喷到垫上，直接用标记好的抗体进行爬样，看看有无显色。
0我标记的抗体，然后把抗原用枪点在了膜上，之后又加的金标抗体，发现没反应。
我是自己制备的抗体，而且实验条件相对于公司来说比较不正规，一个人摸索。
我只是想拿包被的抗原检测一下标记的抗体怎么样，看
有没有标记上。
按理说，抗原应该能和标记后的抗体结合上，可是我标记后的抗体不结合。
2.包被了抗原，干燥完全了吗？
没干燥，抗原就没固定在膜上，结合了也冲掉了啊。
0我加金标抗体后发现点过抗原的地方明显显白色，而周围的抹上会留下胶体金的红色痕迹。
这应该能说明并
不是抗原被冲走的缘故吧。
大家被标记的蛋白是怎么处理的？
3.亲水性不好，处理液改一下，多加点亲水的物质啊。
抗体是老鼠还是兔子产的。
0老鼠。
4.最佳PH定过了？
0定了，最佳蛋白标记浓度也实验过。
标记完后胶体金的颜色有些变化，变紫了点，这种现象正常吗？
T:
颜色稍微有些加深是正常的，抗原抗体在免疫层析条件下，没有特异性反应，想找到原因是个大工程，特别是你现在的情况。
你的抗原是重组的吧？
分子量有多大，纯度多少，保存液是什么，浓度多大。
是包涵体
抗原吗。
0抗原是购买的，具体信息不是特别清楚，但是我用抗原包板子后做酶联免疫反应，是阳性的，这说明我的抗体是可以和抗原结合的。
保存液是PBS—1%BSA溶液。
T:
这就是问题所在，ELISA做着效果好，胶体金不一定能用。
你的单抗是怎么制备的，是用这个抗原免疫的
吗。
既然很多信息都不知道，给你提供一个思路，你标记抗原，然后包被抗体吧。
当然这两种方法都不太科
学，不过对于高校来讲，就做个实验而已，也就够用了。
0免疫抗原和检测抗原都是一种，用抗原免疫小鼠，培养的杂交瘤细胞，收集细胞培养上清，然后纯化的上清。
保存液是PBS—1%BSA溶液，有问题吗。
5.如果你直接拿这个划膜的话，肯定是不行的。
T:
有问题。
不知道你为什么选择这个保存液，也许是供应商提供的。
反正不管怎样，你标记抗原，包被抗体,效果可能会好点。
II0不是，是自己用的，你的保存液用的什么啊。
T:
直接用0.01MPB7.4稀释下就可以了。
0你这个金完全死了。
T:
没完全死，你看吸水垫,
2.样本稍微稀释下？
T:
稀释不能从根本上解决问题，这些金子其实没有死，不是释放问题。
0释放的很快，但是不知道为什么在膜上停留了，有没有什么物质能够改善这种情况?
3.我奇怪了，细菌多大啊，能轻易通过NC膜？
NC膜都可以的。
T:
为什么首先想到的是加什么物质呢？
细菌不用裂解也可以通过，常规的
0我在测另一个菌株时，没遇到过这个问题，难道是菌的原因吗？
4.如果胶体金和细菌形成了复合体的话，可能就过不去了，可以这样理解么？
T:
说对了一半。
5.我之前也遇过这种情况，但是加了个东西，就没有了。
6.你用的是玻纤做金垫吗？
浸金还是喷金？
贴胶了吗？
加点万能剂。
0聚酯膜。
涂的金，什么万能剂？
T:
老牛，这个真心没有用哈。
这个的根本原因，在于你选择的抗体，针对的抗原表位是多价的，也就是说这个菌体表面含有很多相同的该抗原决定簇，进而抗原抗体反应的时候，相互交联，形成了空间网状结构，导致复合物体积很大。
当然这个过程中，也会有一部分复合物不是很大，所以能通过NC孔径，至于怎么解决这个问题，方法呢不止一个，这个留
着自己思考吧。
其实呢，免疫类的书籍，关于这块一般都有介绍，只不过大家一般不会留意。
其实很多实验过程中看似很复杂、难以理解的现象，都可以用抗原抗体反应最基础的知识去解释。
只不过，貌似大部分人，都不太关注这些基础的东西，往往是眼高手低，或者理解仅限于事物的表象。
7.类似于凝集试验。
问：
做胶体金的同盟，对37C稳定性和常温稳定性是什么看法？
目前我做岀来，两种环境的稳定性差异较大。
跟踪下去，不知道常温的是不是总有一天能成为37度的情况呢？
T:
你还是说具体点好，实验方案，实验过程，实验结果，结果分析。
0确实一两句说不清楚，你觉得那个稳定性理论成立吗，37度1天等于25度1星期？
T:
当然不成立。
也不知道你的37度做岀来是啥情况。
0会一直变阳。
T:
什么方法的产品啊？
夹心还是竞争？
0竞争。
T:
就是显色越来越弱了？
0也不是。
T:
你37度跟踪了多少天观察周期多长。
问：
请教一下，我有个蛋白，想富集，能用胶体金的方法吗，富集后想跑蛋白电泳看看。
1.胶体金不能富集吧。
0胶体金不能像磁珠一样富集蛋白吗。
2.用超滤管可以。
T:
超滤是可以的，用胶体金不一定能行，胶体金对标记条件要求还是挺苛刻的。
问:
请问如果烘NC膜如果不用风机行不行，只是控制温度？
T:
可以。
0只用温度烘干不会对膜有影响？
2.没啥影响，我做的是没啥影响。
0那胶体金呢？
问:
老板让我做胶体金试纸条，现在我有大概80mL多抗血清，要是后期做胶体金标记用正辛酸-硫酸铵沉淀
纯化抗体可以么？
还是得用蛋白A/G亲和纯化？
T:
正辛酸-硫酸铵沉淀纯化可以的。
0不会影响标记效果么？
T:
透析彻底，不会影响。
0用PBS4度过夜可以么？
T:
换液三次。
0我实验室透析袋截留分子量是7000的可以么？
T:
嗯，可以，透析后，高速离心去掉沉淀，测下蛋白浓度，然后标记，没问题的。
0看纯化效果跑SDS可以么？
T:
可以。
0我的的抗体是兔子，大概条带多大？
T:
这个不清楚，你是做还原性还是非还原性？
0什么叫还原性？
T:
非还原性SDS-PAGE，跑出来大概160KD左右，不过肯定很多杂带。
0要用还原性的么？
T:
不知道，我也不知道你具体要做什么用。
0就是做胶体金试纸条啊。
T:
你做胶体金试纸条，跑胶干嘛。
0看看抗体纯化的效果怎么样。
T:
为什么要看纯化效果呢，你知道了纯化效果之后，有啥意义呢？
比如，你得到了100%纯度的兔抗体，但
是都不是针对目标抗原的，有啥用呢。
0要是纯化效果不好，不是会影响标记。
T:
刚不是跟你说了吗，肯定很多杂带，纯度不会太高，但是可以做胶体金标记。
1.你觉得标记下方便呢，还是跑下胶方便？
T:
嗯，就是这个道理，你直接标记下，试试就OK了。
一步到位，有说服力，间接佐证，往往是有漏洞的。
问：
抗体pbs透析还是pb透析有影响么？
1.常用PB。
0那如果用pbs偷透析了怎么处理才能除盐呢，除了超滤。
T：
透析后蛋白浓度多少？
0蛋白浓度也就2g/l。
T:
问题不大。
0在学校时很久以前使用pbs透析纯化的抗体，后来就改成pb了。
2.我都没透析过，买来直接用。
0以前实验室都是兔血清，肯定得透析的说。
T:
群里很多科研院校的，他们做科研原料都是自产自用，做产业化的原料，大部分都可以直接使用。
问：
……（没聊天记录）527wl的，多大的我不知道。
T:
信号弱，是不好直接分析的，有对比没，之前强，还是怎么着？
0以前也不是很强。
T：
就是说，更弱了呗，你变化啥条件了没？
0如果用比色卡的，高中低三个梯度来说的话，中等显色即使提高OD值也没效果。
T：
可能蛋白效价下降了呢。
0只能达到低显色。
T：
就是说，原来中等强度，现在低强度呗。
0原来也是低强度。
T：
就是说，你想提高强度，但是增加金标记物的量，不管用呗。
0加样浓度我也增加了，膜浓度也是。
T：
你说具体点呗，什么项目这么扯，不是说提高浓度，效果就一定会好的，有个最合适的量。
0HIVII型的抗原。
T：
你这个测的是啥？
免疫抗血清吧。
0是的。
T：
一般测免疫抗血清，显色都挺好的，自说自话嘛。
用抗原做免疫原，然后再用抗原来测抗血清。
免疫原是同一个抗原吗？
0原蛋白的日期都是2012年02月的，真怀疑是不是已经失活了。
T：
有可能额，HIV抗原，有很强的包涵体倾向，失活也不算个事。
你换个新批次的试试呗，跟供应商沟通下，再要个新批次的小样试试，要点免费的样品呗。
0sdspage蛋白电泳，我要怎么看蛋白条带是我要的呢。
T：
抗原的分子量，供应商没在说明书写明？
0是的，坑爹啊，没注明的话，看有没有降解的小条带？
T：
额，我大概知道你用的谁家的了，别跑胶了看不出来，跑了之后，你可能会很伤心。
问：
样品垫与结合垫想只用一个垫子，有没有适合的材料推荐一下，就是将胶体金喷在样品垫上。
1.用两种吧。
2.据说whatman有四合一的垫子。
吸水纸，nc膜，金垫，样垫，全用一张垫子就行。
不过好像使用起来有限制，具体就不清楚是什么限制了。
3.你找俞翠萍：
QQ：
2355410614，让他给你个玻纤套装试下。
whatman的东西，一般用不起啊。
T：
WHATMAN那个是五合一，还算上滤血膜，FUSION5，这个材料不能直接使用，有限制，主要是蛋白的包被，需要特殊的固化方法。
问：
casein为啥我做的梯度为啥显示像抛物线一样。
T:
抛物线的话，就对了。
0为啥不是越来越抑制信号，浓度大了发生什么了。
T：
你要从酪蛋白抑制信号的机理去理解。
0第一类物质就是蛋白质，如常用的牛血清（BSA）、酪蛋白（Casein）、鱼胶冻，都可以特异性吸附杂蛋白
（非特异性蛋白），减少杂蛋白非特异性结合。
T：
想想看，为什么同样是作为封闭蛋白，在相同使用浓度下，酪蛋白抑制信号的作用要远远强于BSA；为什
么，酪蛋白不容易溶解于水，酪蛋白钠盐，相对容易溶解；为什么，在水中加入酪蛋白的时候，酪蛋白粉末在液面扩散非常快。
0我去搜搜看呢。
T：
你搜不到的，自己想想先，从最基本的理化性质去考虑。
0蛋白结构不一样吧，三级结构不一样。
酪蛋白极性更大，非极性。
T：
为毛酪蛋白在碱性条件下容易溶解呢；为毛在已经溶解的酪蛋白溶液中加入盐酸，酪蛋白会析出呢；为毛能迅速膨胀，而且分子不结合呢。
我提示下哈，因为酪蛋白的等电点灰常低，在酸性范围，在碱性条件下，带有很强的负电。
在中性条件下，也带负电。
0干酪素是等电点为pH4.8的两性蛋白质。
T：
在水中加入酪蛋白的时候，最先溶解的那部分，因为都带负电，会相互排斥，所以会看到酪蛋白在液面很快分散开。
其抑制信号的强作用力，也主要是因为其强负电荷。
那么为毛这种负电荷，会抑制信号呢。
0和金结合了吧？
破坏了金结构？
T：
为毛会跟金结合呢，恰恰相反啊。
金是负电荷，酪蛋白也是负电荷啊，点到即止哈，自己多想想，自己想
出来，会非常兴奋的，进而，会解释很多现象，进而你会对酪蛋白的灵活运用，颇有心得。
0对哦，我理解错了。
它是特异性吸附杂蛋白的，通过强负电荷？
量多了会产生神马效果。
难道把真正的不是杂的蛋白也给吸附了？
T：
你要这么想哈，抗原抗体的特异性反应，是靠什么作用力呢，非特异性反应，一般是怎么产生的呢。
0空间结构的互补性。
T：
别想的太深奥了，用最简单的思维去理解。
0我的Casein都用到0.3%了，据说会影响稳定性。
T：
关键你用在哪儿了？
样品垫上？
酪蛋白一般不会影响产品的稳定性，合理的使用，会增强产品的稳定性。
0照这个意思在重悬液里加点酪蛋白，标记的金探针会更加稳定？
T：
我们来看这么一个现象哈，将金标记物复溶之后制作金垫，其中一种复溶液中加入少量酪蛋白，一种不加，然后干燥金垫，然后会发现，加入酪蛋白的，干燥后特别红；不加酪蛋白的，干燥后颜色要暗。
通过各种现
象，去理解酪蛋白抑制信号的作用机理。
0请大神点拨下我说的对不对，作为封闭的酪蛋白，由于存在负电荷，在金探针和样本结合的时候起了排斥作用，从而削弱了信号，这个理解对么？
T：
嗯，大概就是这个意思，所以，同样作为封闭蛋白，酪蛋白封闭信号的作用要远远强于BSA。
0跟吸取杂蛋白没有关系吗。
T:
先不要考虑杂蛋白的事情，绝大部分的非特异性反应，是直接发生在标记蛋白和包被蛋白之间的，而非特异性反应，相当一部分，是电荷吸附造成的。
一种强电荷介质的引入，会对这种作用产生明显的干扰，就比
如我们加SDS，对信号也会有很明显的影响一样。
0从电荷角度来看的话，是不是可以理解为SDS和酪蛋白的作用类似？
T:
就比如，我们在对临床样本检测的时候，如果工艺不是很成熟，遇到新鲜抗凝样本，特别是肝素钠抗凝样本的时候，对信号会有明显干扰一样。
因为肝素钠就是靠其强负电荷来抗凝的，如果不对样品垫进行处理，直接检测新鲜的肝素钠抗凝的样本，会导致显色很弱，甚至不显色，甚至连C线都不显色。
0可以直接在金标垫加大缓冲液浓度啊，这样不行吗。
T:
这是牵一发而动全身的事情。
在金标垫上，与金标记物直接接触的成分，要考虑几点：
1首先要保证金标记物长期的稳定性；
2便于金标记物释放彻底；
3对检测信号发挥一定的积极作用。
往往是解决了一个问题，进而引起更多的问题。
所以，对于胶体金产品，各组分的预处理和设计，就显得特别重要。
其实我们做的大部分工作，都是解决矛盾。
0抗RBC和全血滤膜哪个好使？
T:
抗RBC和滤血膜，谈不上谁更好一些，这两个本身没有太大的对比性，因为其应用领域是有针对性的。
T:
一本是分子生物学，一本是临床免疫学，一本是蛋白质组学，貌似叫这几个名字，刚入行的时候看过。
还
有当初丁香园翻译的那些IVD杂志，也挺不错的。
问：
昨天做的复合物，4度放置一夜，沉淀。
显然是有问题的。
但昨天做标记条件没有问题，会不会是bsa的
原因（昨天第一次加bsa而不是peg）。
1.
为啥不两都用啊？
bsa可用进口的，peg2W用国产也可以。
注意过程再试一下，这个是没标上的节奏。
结和后再分开，我认为你是标记后有标记物不稳定，再分开了。
另可能杂质可能较多，不干净。
2.有可能是BSA的问题，换好点的BSA。
3.你BSA多了吧。
01%
4.我都是4%的10%BSA，0.4%的PEG。
5.每个系统不一样，项目不一样，用的浓度也会不一样的。
T:
重新标记一个分成两份一份加BSA一份不加然后过夜明天结果就岀来了，结果岀来之后原因就找到了。
另外不建议用EP管直接作为标记反应容器，建议用西林瓶。
少量标记用西林瓶，大量标记用锥形瓶、烧杯。
尽量选择玻璃器皿，浸泡铬酸，洗净，晾干，备用。
如果用的是上海西宝的BSA，那么是BSA的问题的可能性比较大。
买点透明西林瓶，这个东西不贵，1-10ml标记，各种方便实用。
0昨晚做的就没事，都没敢做多，总共就1mg，我估计是标记条件的问题。
6.颗粒好小哦。
0吸收峰528。
7.为嘛我觉得颜色淡。
没我的深。
0管子小，放在烧杯里看就深了。
我在离心了。
如果正常，再放大试一试。
8.放大了ph不对了啊。
0等比例放大啊……
9.那ph就不对了，不能放大，我觉得ph会有变化的。
问：
问大家一个问题，在确定胶体金与标记蛋白浓度的时候，调好ph之后，如果放的时间为几个小时，无论
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