胶体金技术.docx

1、胶体金技术胶体金技术问： 检测 cle ，金标记抗体扩大后，烘干后检测各项指标良好，但室温保存一天后， T 线下降很多是由什么原因造成的？室内开除湿机，组装好的板子，在自封袋里加干燥剂。我烘干用了一整天， 30 多个小时了，还有 方法进行改进吗，这个抗体还能用来生产吗？经检测还是金子出了问题，我就是先少量做，找出各个值，然后 才扩大的。我就是先 3ml ，再 10ml 。T ：（涛哥） 那可能是生产放大过程控制的问题。重新试验，先小试，逐步放大。这就不行了啊，这还算不上生 产扩大呢，怀疑误操作，重复试验试试， 3ml 的、 10ml 的都做一下。0 是啊，有时标记完检测后， T 线就下降（比预

2、实验）T :标记完检测就下降，说明你标记本身就有问题呗。你标记条件太脆弱，主要考虑你标记条件，重新优化下。0 如果我再调整 pH 值，抗体浓度，灵敏度就会达不到了T： 通过其他途径提高灵敏度。问： 请问为什么 C 线包被 3mg/ml 不出现条带，而 2mg/ml 的就有条带出现呢？T： 正常，从蛋白固定基本原理出发，好好想想。 NC 结合蛋白的能力是有限的，其结合位点是会饱和的，假设其结合能力仅仅为 2mg ，你包被 3mg ，那边必然有相当一部分是结合不牢固或者压根就没固定住的，样本 层析之后，金标蛋白结合了这些不牢固的蛋白，就会流走，不会显色。检测线，也会有同样的情况，不过检测 线包被过

3、量的影响不止这么简单。我主要指夹心法。0 一般调整膜上浓度时在湿法时调整还是干法时调整啊？问： 标记好的胶体金有沉淀是什么原因？T： 常见的原因：标记条件不合适，封闭物质不纯，复溶液不合适都有可能，当然颗粒大了，也容易沉淀。0 你们主要用什么方法摸索最佳 PH 值？1.用碳酸钾用量调整，搞一排，然后看变色和离心后现象，还有检测结果啊。0 这样岂不是需要很多抗体？呵呵2.标记又用不了多少抗体，又不是包膜。0 离心后现象，怎么样的是理想的？3.就是没有预期想要的略微蓬松有红色的沉淀，比如贴壁、黑点、离不干净等，离心速度时间也要选好。0 是啊，之前就发现有点贴壁和黑点，我延长了离心时间也没用。4.小

4、号金子 1ml 离心几分钟就够了。越大速度越低时间，这个速度和时间折中下自己调整。问： 不知道那些强假阳性有什么办法可以抑制？T： 你加阻断剂试过没？0试过几种，没有效果，能阻断C线，对T线基本没阻断。T： 照这么说的话 既然是同一对抗体 而且胶体金法临床假阳性率这么高，我觉得你这对抗体可能对某种因素太 敏感了吧， ELISA 是共价标记 胶体金是物理标记 是会有差异。 （涛）0 现在就是找不到原因，那强阳漏检呢？其实也有试过好几个抗体配对，基本都是那样的结果问： 请教一下各位大虾，多抗标记的时候要注意哪些细节呢？T： 尽量别标记多抗，实在是想标记多抗，把标记 PH 提高点。问：划线时的湿度条

5、件是 NC膜制备的要点之一，湿度应控制在 45 %65%，有文献支持吗？T： 文献呢是有滴，不过 NC 供应商也会给你建议滴，你自己也是可以探索滴，最终都是要以产业化需要为准。1.主要膜吸收蛋白的时候要是湿度太低会比较疏水，不利于吸收，一般在 40% 以上，膜在点之前在这个环境下放置一定时间平衡一下。0 点完的膜烘干后的湿度呢？是不是要低一点。2.湿度不低，你怎么烘干啊。0 呵呵，我的意思是已经烘干的板子拿出来切条时的湿度一般在多少啊。没办法，我刚接触胶体金，现在公司 在申报，委托的公司（艾伟德）给的资料很乱，前后都不对应。问： 谁知道 MP 的 HCV BLOT 3.0 哪有卖？T ： 找丽

6、珠吧，不过不一定卖给你，独家代理。问： 抗体灵敏度太高，有什么思路去降低灵敏度，从而达到规定的 cutoof 值呢？1.反标，偶联抗原去标记，把抗体点 T 线，同样的原料可以下降一个数量级的灵敏度。T： THE ONE 说的对，从不公平竞争到公平竞争，灵敏度会下降比较明显的。0 质控线没了？2.你不会用单独的质控系统的啊？ rabbit IgG 和羊抗兔的多抗。T： 楼上说的对。问： 请教一下， Fusion5 用来包被时，需要进行处理吗？T： 当然，是不可以直接使用的。 WHATMAN 有相关说明资料，丁香园上也有相应的文献翻译。0 用作金标垫行吗？成本高不高？T ： 当然高， Fusion

7、5 有专用用途。0 用在哪方面比较好？T： 多方面 ，比如同时用做样品垫和金垫，改善 CV ，比如某些高附加值数显产品，因其设计的需要。这个材 料有专用用途，用好了的话，效果是非常好的，小日本用的不错。4. Fusion 5 性能非常优越，不信自己要点样品比较下。问： 各位前辈，请问你们谁知道 HCV 的国家盘里面到底有哪些片段血清啊。T： 各个片段的都有 一般 NS3 片段的容易漏检 最好单独再加上 NS3 片段。问： 请教各位高手：免疫层析试纸中， PH 对信号强弱，反应特异性的影响是怎样的关系？T ： 不可一概而论啊，最好哪个产品举个实例。问： 有问题请教，试纸条想大批量生产成产品，其中

8、标记胶体金的单克隆抗体怎么大批生产呀？都是打小鼠吗？T ： 可以外购啊。0 但是我们做的抗体外面没有卖，我们已经做出来杂交瘤细胞株了，如果每次都打小鼠去腹水的话 这其中批次的差别是不是有啊？T： 只要细胞株一切正常的话，单位浓度下的单抗活性，批次间差异不大。每次纯化，纯度多少会有点差异， 批间差肯定是有的，不过正常来讲，不会对生产产生太大影响。0 那我再标记的时候条件是不是还得重新摸索啊？T:不用，其实你的单抗生产岀来，肯定会做质检的。0 就纯化好了之后，浓度测出来，然后就按摸索好的浓度标记就好了吗？T: 满足质检要求，成品生产工艺，就不用变。你得先质检，万一细胞株有问题呢。0 我们是大学里，

9、好像没有做质检的啊。T: 连质检都没有还搞什么产业化啊，想搞产业化就正儿八经来，要么跟生产企业合作，搞委托加工。就算没 有正儿八经的质检，起码一批单抗生产岀来要小试下吧，要不然直接批量生产，万一有问题损失岂不是很大。0 一般委托加工他们可以给大量生产腹水吗，我们提供杂交瘤细胞株。T: 干嘛不在高校做完这部分呢，花的是国家的钱，用的是免费劳动力。把单抗做好，然后委托企业做成品， 岂不是更好。0 您的意思就是我们自己大量生产岀腹水，然后委托企业吗？T: 干脆把纯化也做了呗，提供纯化好的单抗给企业。企业会对入厂的原材料进行检验的。0 那如果我们纯化好了之后，那么多，企业一检查原材料不行，我们也白做了

10、呀。T: 不行，那肯定是白做了啊。1.关键是你抗体制备的工艺要过关，每次制备的批间差异大的话，说明单抗制备工艺不成熟，需要优化。问: 新手请教个问题，验证的 ELISA 抗体对可以直接用于胶体金研发吗？只要通过调整浓度配比即可？还是 需要重新寻找、检测抗体对？T: 这个不好说， ELISA 能用的，胶体金不一定能用，先做做试试吧，不行再换。0 这个周期长吗？T: 看实验技能，如果准备工作做好的话，一天以内。0 抗体对反应， ELISA 和胶体金，除了载体不一样，还有很多差别吗？我开始觉得可以直接拿过来用呢。T :差别很多很多很多很多，位阻 亚型纯度都是区别。大部分都可以的。0 正常情况下，产品

11、研发周期要多久？1.顺利的俩月足够，不顺利的两年都不够。T: 举个例子:比如说一个常规项目，原料成熟；质控品容易获得；标准无国标无行标，自己定标准；那么一 整套工艺调试流程走下来，再做点性能评估试验，三个月吧。不考虑稳定性测试。如果是个科研课题的话，两 个月足够了。0 我现在就是有个 ELISA 的盒子，有现成的抗体对，想用胶体金的方法实现检测，看看这种可能性。T: 可能性很大。2.酶免能用的原料， 80% 在胶体金项目上会失败。T: 九天这个说的有点绝对了吧。3.不算绝对，这个比例已经比较乐观了。大部分问题就岀现在，活性不够上，酶免可以通过加大浓度提升活性， 可是胶体金实验的活性提升范围很小

12、。而且，涉及到前带问题，更是不好解决。T: 我这 80% 都能成功。问: 我最近做胶体金，用标记好的金标抗体检测抗原，不识别，好着急啊。1.不要喷到垫上，直接用标记好的抗体进行爬样，看看有无显色。0 我标记的抗体，然后把抗原用枪点在了膜上，之后又加的金标抗体，发现没反应。我是自己制备的抗体，而 且实验条件相对于公司来说比较不正规，一个人摸索。我只是想拿包被的抗原检测一下标记的抗体怎么样，看有没有标记上。按理说，抗原应该能和标记后的抗体结合上，可是我标记后的抗体不结合。2.包被了抗原，干燥完全了吗？没干燥，抗原就没固定在膜上，结合了也冲掉了啊。0我加金标抗体后发现点过抗原的地方明显显白色，而周围

13、的抹上会留下胶体金的红色痕迹 。这应该能说明并不是抗原被冲走的缘故吧。大家被标记的蛋白是怎么处理的？3.亲水性不好，处理液改一下，多加点亲水的物质啊。抗体是老鼠还是兔子产的。0老鼠。4.最佳PH定过了？0定了，最佳蛋白标记浓度也实验过。标记完后胶体金的颜色有些变化，变紫了点，这种现象正常吗？T :颜色稍微有些加深是正常的，抗原抗体在免疫层析条件下，没有特异性反应，想找到原因是个大工程，特 别是你现在的情况。你的抗原是重组的吧 ？分子量有多大，纯度多少，保存液是什么，浓度多大。是包涵体抗原吗。0抗原是购买的，具体信息不是特别清楚，但是我用抗原包板子后做酶联免疫反应，是阳性的，这说明我的抗 体是可

14、以和抗原结合的。保存液是 PBS 1%BSA溶液。T :这就是问题所在， ELISA做着效果好，胶体金不一定能用。你的单抗是怎么制备的，是用这个抗原免疫的吗。既然很多信息都不知道，给你提供一个思路，你标记抗原，然后包被抗体吧 。当然这两种方法都不太科学，不过对于高校来讲，就做个实验而已，也就够用了。0免疫抗原和检测抗原都是一种，用抗原免疫小鼠，培养的杂交瘤细胞，收集细胞培养上清，然后纯化的上清。 保存液是 PBS 1%BSA 溶液，有问题吗。5.如果你直接拿这个划膜的话，肯定是不行的。T :有问题。不知道你为什么选择这个保存液，也许是供应商提供的。反正不管怎样，你标记抗原，包被抗体, 效果可能

15、会好点。 II 0不是，是自己用的，你的保存液用的什么啊。T :直接用0.01M PB 7.4 稀释下就可以了。0你这个金完全死了。T :没完全死，你看吸水垫,2.样本稍微稀释下？T :稀释不能从根本上解决问题，这些金子其实没有死，不是释放问题。0释放的很快，但是不知道为什么在膜上停留了，有没有什么物质能够改善这种情况?3.我奇怪了，细菌多大啊，能轻易通过 NC膜？NC膜都可以的。T :为什么首先想到的是加什么物质呢？细菌不用裂解也可以通过，常规的0我在测另一个菌株时，没遇到过这个问题，难道是菌的原因吗？4.如果胶体金和细菌形成了复合体的话，可能就过不去了，可以这样理解么？T :说对了一半。5

16、.我之前也遇过这种情况，但是加了个东西，就没有了。6.你用的是玻纤做金垫吗？浸金还是喷金？贴胶了吗？加点万能剂。0聚酯膜。涂的金，什么万能剂？T:老牛，这个真心没有用哈。这个的根本原因，在于你选择的抗体，针对的抗原表位是多价的，也就是说这个菌体表面含有很多相同的该抗 原决定簇，进而抗原抗体反应的时候，相互交联，形成了空间网状结构，导致复合物体积很大。当然这个过程 中，也会有一部分复合物不是很大，所以能通过 NC孔径，至于怎么解决这个问题，方法呢不止一个，这个留着自己思考吧。其实呢，免疫类的书籍，关于这块一般都有介绍，只不过大家一般不会留意。其实很多实验过 程中看似很复杂、难以理解的现象，都可以

17、用抗原抗体反应最基础的知识去解释。只不过，貌似大部分人，都 不太关注这些基础的东西，往往是眼高手低，或者理解仅限于事物的表象。7.类似于凝集试验。问：做胶体金的同盟，对 37 C稳定性和常温稳定性是什么看法？目前我做岀来，两种环境的稳定性差异较大。 跟踪下去，不知道常温的是不是总有一天能成为 37度的情况呢？T :你还是说具体点好，实验方案，实验过程，实验结果，结果分析。0确实一两句说不清楚，你觉得那个稳定性理论成立吗， 37度1天等于25度1星期？T :当然不成立。也不知道你的 37度做岀来是啥情况。0会一直变阳。T :什么方法的产品啊？夹心还是竞争？0竞争。T :就是显色越来越弱了？0也不

18、是。T:你37度跟踪了多少天 观察周期多长。问： 请教一下，我有个蛋白，想富集，能用胶体金的方法吗，富集后想跑蛋白电泳看看。1. 胶体金不能富集吧。0 胶体金不能像磁珠一样富集蛋白吗。2.用超滤管可以。T: 超滤是可以的，用胶体金不一定能行，胶体金对标记条件要求还是挺苛刻的。问: 请问如果烘 NC 膜如果不用风机行不行，只是控制温度？T: 可以。0 只用温度烘干不会对膜有影响？2.没啥影响，我做的是没啥影响。0 那胶体金呢？问: 老板让我做胶体金试纸条，现在我有大概 80mL 多抗血清，要是后期做胶体金标记用正辛酸 -硫酸铵沉淀纯化抗体可以么？还是得用蛋白 A/G 亲和纯化？T: 正辛酸 -硫

19、酸铵沉淀纯化可以的。0 不会影响标记效果么？T: 透析彻底，不会影响。0 用 PBS 4 度过夜可以么？T: 换液三次。0 我实验室透析袋截留分子量是 7000 的可以么？T: 嗯，可以，透析后，高速离心去掉沉淀，测下蛋白浓度，然后标记，没问题的。0 看纯化效果跑 SDS 可以么？T: 可以。0 我的的抗体是兔子，大概条带多大？T: 这个不清楚，你是做还原性还是非还原性？0 什么叫还原性？T: 非还原性 SDS-PAGE ，跑出来大概 160KD 左右，不过肯定很多杂带。0 要用还原性的么？T: 不知道，我也不知道你具体要做什么用。0 就是做胶体金试纸条啊。T: 你做胶体金试纸条，跑胶干嘛。0

20、 看看抗体纯化的效果怎么样。T: 为什么要看纯化效果呢，你知道了纯化效果之后，有啥意义呢？比如，你得到了 100% 纯度的兔抗体，但是都不是针对目标抗原的，有啥用呢。0 要是纯化效果不好，不是会影响标记。T: 刚不是跟你说了吗，肯定很多杂带，纯度不会太高，但是可以做胶体金标记。1. 你觉得标记下方便呢，还是跑下胶方便？T: 嗯，就是这个道理，你直接标记下，试试就 OK 了。一步到位，有说服力，间接佐证，往往是有漏洞的。问： 抗体 pbs 透析还是 pb 透析有影响么？1. 常用 PB 。0 那如果用 pbs 偷透析了怎么处理才能除盐呢，除了超滤。T： 透析后 蛋白浓度多少？0 蛋白浓度也就 2

21、g/l 。T:问题不大。0 在学校时很久以前使用 pbs 透析纯化的抗体，后来就改成 pb 了。2. 我都没透析过，买来直接用。0 以前实验室都是兔血清，肯定得透析的说。T: 群里很多科研院校的，他们做科研原料都是自产自用，做产业化的原料，大部分都可以直接使用。问：（没聊天记录） 527wl的，多大的我不知道。T: 信号弱，是不好直接分析的，有对比没，之前强，还是怎么着？0 以前也不是很强。T： 就是说，更弱了呗，你变化啥条件了没？0 如果用比色卡的，高中低三个梯度来说的话，中等显色即使提高 OD 值也没效果。T： 可能蛋白效价下降了呢。0 只能达到低显色。T： 就是说，原来中等强度，现在低强

22、度呗。0 原来也是低强度。T： 就是说，你想提高强度，但是增加金标记物的量，不管用呗。0 加样浓度我也增加了，膜浓度也是。T： 你说具体点呗，什么项目这么扯，不是说提高浓度，效果就一定会好的，有个最合适的量。0 HIV II 型的抗原。T： 你这个测的是啥？免疫抗血清吧。0 是的。T： 一般测免疫抗血清，显色都挺好的，自说自话嘛。用抗原做免疫原，然后再用抗原来测抗血清。免疫原是 同一个抗原吗？0 原蛋白的日期都是 2012 年 02 月的，真怀疑是不是已经失活了。T： 有可能额， HIV 抗原，有很强的包涵体倾向，失活也不算个事。你换个新批次的试试呗，跟供应商沟通下， 再要个新批次的小样试试，

23、要点免费的样品呗。0 sdspage 蛋白电泳，我要怎么看蛋白条带是我要的呢。T： 抗原的分子量，供应商没在说明书写明？0 是的，坑爹啊，没注明的话，看有没有降解的小条带？T： 额，我大概知道你用的谁家的了，别跑胶了 看不出来，跑了之后，你可能会很伤心。问： 样品垫与结合垫想只用一个垫子，有没有适合的材料推荐一下，就是将胶体金喷在样品垫上。1. 用两种吧。2. 据说 whatman 有四合一的垫子。吸水纸， nc 膜，金垫，样垫，全用一张垫子就行。不过好像使用起来有限 制，具体就不清楚是什么限制了。3. 你找俞翠萍： QQ ： 2355410614 ，让他给你个玻纤套装试下。 whatman

24、的东西，一般用不起啊。T：WHATMAN 那个是五合一，还算上滤血膜， FUSION 5 ，这个材料不能直接使用，有限制，主要是蛋白的 包被，需要特殊的固化方法。问： casein 为啥我做的梯度为啥显示像抛物线一样。T :抛物线的话，就对了。0 为啥不是越来越抑制信号，浓度大了发生什么了。T： 你要从酪蛋白抑制信号的机理去理解。0 第一类物质就是蛋白质，如常用的牛血清（ BSA ）、酪蛋白 （Casein ）、鱼胶冻，都可以特异性吸附杂蛋白（非特异性蛋白） ，减少杂蛋白非特异性结合。T： 想想看，为什么同样是作为封闭蛋白，在相同使用浓度下，酪蛋白抑制信号的作用要远远强于 BSA ；为什么，酪

25、蛋白不容易溶解于水，酪蛋白钠盐，相对容易溶解；为什么，在水中加入酪蛋白的时候，酪蛋白粉末在 液面扩散非常快。0 我去搜搜看呢。T： 你搜不到的，自己想想先，从最基本的理化性质去考虑。0 蛋白结构不一样吧，三级结构不一样。酪蛋白极性更大，非极性。T： 为毛酪蛋白在碱性条件下容易溶解呢；为毛在已经溶解的酪蛋白溶液中加入盐酸，酪蛋白会析出呢；为毛 能迅速膨胀，而且分子不结合呢。我提示下哈，因为酪蛋白的等电点灰常低，在酸性范围，在碱性条件下，带 有很强的负电。在中性条件下，也带负电。0 干酪素是等电点为 pH4.8 的两性蛋白质。T： 在水中加入酪蛋白的时候，最先溶解的那部分，因为都带负电，会相互排斥

26、，所以会看到酪蛋白在液面很 快分散开。其抑制信号的强作用力，也主要是因为其强负电荷。那么为毛这种负电荷，会抑制信号呢。0 和金结合了吧？破坏了金结构？T： 为毛会跟金结合呢，恰恰相反啊。金是负电荷，酪蛋白也是负电荷啊 ，点到即止哈，自己多想想，自己想出来，会非常兴奋的，进而，会解释很多现象，进而你会对酪蛋白的灵活运用，颇有心得。0 对哦，我理解错了。它是特异性吸附杂蛋白的，通过强负电荷？量多了会产生神马效果。难道把真正的不是 杂的蛋白也给吸附了？T： 你要这么想哈，抗原抗体的特异性反应，是靠什么作用力呢，非特异性反应，一般是怎么产生的呢。0 空间结构的互补性。T： 别想的太深奥了，用最简单的思

27、维去理解。0 我的 Casein 都用到 0.3% 了，据说会影响稳定性。T： 关键你用在哪儿了？样品垫上？酪蛋白一般不会影响产品的稳定性，合理的使用，会增强产品的稳定性。0 照这个意思在重悬液里加点酪蛋白，标记的金探针会更加稳定？T： 我们来看这么一个现象哈，将金标记物复溶之后制作金垫，其中一种复溶液中加入少量酪蛋白，一种不加， 然后干燥金垫，然后会发现，加入酪蛋白的，干燥后特别红；不加酪蛋白的，干燥后颜色要暗。 通过各种现象，去理解酪蛋白抑制信号的作用机理。0 请大神点拨下我说的对不对，作为封闭的酪蛋白，由于存在负电荷，在金探针和样本结合的时候起了排斥作 用，从而削弱了信号，这个理解对么？

28、T： 嗯，大概就是这个意思，所以，同样作为封闭蛋白，酪蛋白封闭信号的作用要远远强于 BSA 。0跟吸取杂蛋白没有关系吗。T :先不要考虑杂蛋白的事情，绝大部分的非特异性反应，是直接发生在标记蛋白和包被蛋白之间的，而非特 异性反应，相当一部分，是电荷吸附造成的 。一种强电荷介质的引入，会对这种作用产生明显的干扰，就比如我们加SDS，对信号也会有很明显的影响一样。0从电荷角度来看的话，是不是可以理解为 SDS和酪蛋白的作用类似？T :就比如，我们在对临床样本检测的时候，如果工艺不是很成熟，遇到新鲜抗凝样本，特别是肝素钠抗凝样 本的时候，对信号会有明显干扰一样。因为肝素钠就是靠其强负电荷来抗凝的，如

29、果不对样品垫进行处理，直 接检测新鲜的肝素钠抗凝的样本，会导致显色很弱，甚至不显色，甚至连 C线都不显色。0可以直接在金标垫加大缓冲液浓度啊，这样不行吗。T :这是牵一发而动全身的事情。在金标垫上，与金标记物直接接触的成分，要考虑几点：1首先要保证金标记物长期的稳定性；2便于金标记物释放彻底；3对检测信号发挥一定的积极作用。往往是解决了一个问题，进而引起更多的问题。所以，对于胶体金产品，各组分的预处理和设计，就显得特别 重要。其实我们做的大部分工作，都是解决矛盾。0抗RBC和全血滤膜哪个好使？T :抗RBC和滤血膜，谈不上谁更好一些 ，这两个本身没有太大的对比性，因为其应用领域是有针对性的。T

30、 : 一本是分子生物学，一本是临床免疫学，一本是蛋白质组学，貌似叫这几个名字，刚入行的时候看过 。还有当初丁香园翻译的那些 IVD杂志，也挺不错的。问：昨天做的复合物，4度放置一夜，沉淀。显然是有问题的。但昨天做标记条件没有问题，会不会是 bsa的原因（昨天第一次加 bsa而不是peg ）。1.为啥不两都用啊？ bsa可用进口的，peg2W 用国产也可以。注意过程再试一下，这个是没标上的节奏。结 和后再分开，我认为你是标记后有标记物不稳定，再分开了。另可能杂质可能较多，不干净。2.有可能是 BSA的问题，换好点的 BSA。3.你BSA多了吧。0 1%4.我都是 4% 的 10%BSA，0.4%

31、 的 PEG。5.每个系统不一样，项目不一样，用的浓度也会不一样的。T :重新标记一个分成两份一份加BSA 一份不加然后过夜明天结果就岀来了，结果岀来之后 原因就找到 了。另外 不建议用EP管直接作为标记反应容器 ，建议用西林瓶。少量标记用西林瓶，大量标记用锥形瓶、烧杯。 尽量选择玻璃器皿，浸泡铬酸，洗净，晾干，备用。如果用的是上海西宝的 BSA，那么是BSA的问题的可能性比较大。 买点透明西林瓶，这个东西不贵， 1-10ml标记，各种方便实用。0昨晚做的就没事，都没敢做多，总共就 1mg，我估计是标记条件的问题。6.颗粒好小哦。0吸收峰528。7.为嘛我觉得颜色淡。没我的深。0管子小，放在烧杯里看就深了。我在离心了。如果正常，再放大试一试。8.放大了 ph不对了啊。0等比例放大啊9.那ph就不对了，不能放大，我觉得ph会有变化的。问：问大家一个问题，在确定胶体金与标记蛋白浓度的时候，调好 ph之后，如果放的时间为几个小时，无论加多少