真菌课件(萌芽培训).ppt

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四川省人民医院四川省人民医院乔宁乔宁真菌感染与实验室诊断进展真菌感染与实验室诊断进展真菌感染日趋增加真菌感染日趋增加患者年龄的增高患者年龄的增高患者年龄的增高患者年龄的增高广谱抗生素的应用广谱抗生素的应用广谱抗生素的应用广谱抗生素的应用更多、更复杂的医疗手段（如移植等）更多、更复杂的医疗手段（如移植等）更多、更复杂的医疗手段（如移植等）更多、更复杂的医疗手段（如移植等）高强度细胞毒性治疗的应用高强度细胞毒性治疗的应用高强度细胞毒性治疗的应用高强度细胞毒性治疗的应用免疫抑制剂的应用免疫抑制剂的应用免疫抑制剂的应用免疫抑制剂的应用其它病因死亡率相对降低其它病因死亡率相对降低其它病因死亡率相对降低其它病因死亡率相对降低真菌是院内感染常见微生物真菌是院内感染常见微生物占院内感染的占院内感染的占院内感染的占院内感染的-7.5%-7.5%血液感染的血液感染的血液感染的血液感染的-第四位第四位第四位第四位肿瘤病人发病率肿瘤病人发病率肿瘤病人发病率肿瘤病人发病率-为为为为8%8%严重创伤、烧伤病人严重创伤、烧伤病人严重创伤、烧伤病人严重创伤、烧伤病人-高达高达高达高达16%16%死亡率高死亡率高死亡率高死亡率高-达达达达55%70%55%70%真菌感染的流行病学概况真菌感染的流行病学概况真菌感染的第一个变化：

真菌感染的第一个变化：

深部真菌感染上升，深部真菌感染上升，其中曲霉菌感染明显上升；其中曲霉菌感染明显上升；近近20年真菌感染的第二个变化：

白色假丝酵年真菌感染的第二个变化：

白色假丝酵母菌比例减少，其他念珠菌的比例上升。

母菌比例减少，其他念珠菌的比例上升。

曲霉菌引起全身感染的病例已不罕见，死亡曲霉菌引起全身感染的病例已不罕见，死亡率增加。

率增加。

真菌感染的危险因素真菌感染的危险因素基础疾病基础疾病广谱抗生素使用广谱抗生素使用静脉插管及各种侵袭性操作静脉插管及各种侵袭性操作肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、放射肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、放射性或化学治疗后、器官移植后性或化学治疗后、器官移植后高龄（高龄（65岁）、婴幼儿岁）、婴幼儿住院时间长，尤其是入住住院时间长，尤其是入住ICU大于大于5天以天以上上真菌概述真菌概述浅部真菌浅部真菌深部真菌深部真菌双相型真菌双相型真菌真菌感染的分类真菌感染的分类根据真菌侵犯人体的部位分为根据真菌侵犯人体的部位分为四类四类：

浅表浅表真菌病真菌病皮肤皮肤真菌病真菌病皮下皮下组织真菌病组织真菌病系统系统性真菌病性真菌病浅部真菌病浅部真菌病深部真菌病深部真菌病临床常见的真菌病临床常见的真菌病浅表真菌病浅表真菌病花斑癣花斑癣掌黑癣掌黑癣毛结节菌病毛结节菌病皮肤真菌病皮肤真菌病皮肤癣菌病皮肤癣菌病手足、体股、头、甲手足、体股、头、甲皮肤念珠菌病皮肤念珠菌病皮下真菌病皮下真菌病孢子丝菌病孢子丝菌病着色芽生菌病着色芽生菌病暗色丝孢霉病暗色丝孢霉病足菌肿足菌肿系统性真菌病系统性真菌病念珠菌病念珠菌病曲霉病曲霉病隐球菌病隐球菌病接合菌病接合菌病双相真菌感染双相真菌感染浅部真菌病浅部真菌病限于皮肤最外层，甲板、毛发和粘膜的感染。

限于皮肤最外层，甲板、毛发和粘膜的感染。

主要的感染是皮肤癣菌病和浅表念珠菌病。

主要的感染是皮肤癣菌病和浅表念珠菌病。

大多轻微，容易诊断，对治疗反应良好。

大多轻微，容易诊断，对治疗反应良好。

手、足、甲癣手、足、甲癣最常见的真菌病最常见的真菌病各种头癣：

传染、危害健康各种头癣：

传染、危害健康皮下真菌病皮下真菌病往往经过外伤发病往往经过外伤发病孢子丝菌病孢子丝菌病孢子丝菌病孢子丝菌病着色芽生菌病着色芽生菌病着色芽生菌病着色芽生菌病系统性真菌病系统性真菌病常起源于肺，可以播散到全身许多器官常起源于肺，可以播散到全身许多器官,严重严重的可引的可引起死亡起死亡。

常常通通过过吸吸入入致致病病菌菌孢孢子子而而获获得得，其其致致病病菌菌腐腐生生于于土土壤壤或或腐腐败败有有机机物物中中，或或作作为为植植物物致致病病菌。

菌。

病病原原体体可可分分为为两两组组：

真真正正的的致致病病菌菌和和条条件件致致病菌。

病菌。

系统性真菌病系统性真菌病危及生命危及生命系统性真菌病主要的致病真菌系统性真菌病主要的致病真菌荚膜组织胞浆菌荚膜组织胞浆菌粗球孢子菌粗球孢子菌皮炎芽生菌皮炎芽生菌巴西副球孢子菌巴西副球孢子菌临床常见的条件性真菌感染临床常见的条件性真菌感染念珠菌病念珠菌病:

最常见，血源感染的第最常见，血源感染的第4位。

位。

曲霉菌病曲霉菌病:

常见于干细胞移植、实体器官移常见于干细胞移植、实体器官移植、大剂量化疗患者。

植、大剂量化疗患者。

隐球菌病隐球菌病:

艾滋病人患病率为艾滋病人患病率为10-20%。

接合菌病（毛霉病）接合菌病（毛霉病）:

多见于重症糖尿病、烧多见于重症糖尿病、烧伤病及器官移植病人。

伤病及器官移植病人。

临床有增多趋势的条件致病性真菌临床有增多趋势的条件致病性真菌非白念念珠菌感染非白念念珠菌感染毛孢子菌感染毛孢子菌感染地霉感染地霉感染镰刀菌感染镰刀菌感染枝顶孢霉感染枝顶孢霉感染暗色真菌感染暗色真菌感染马尔尼菲青霉马尔尼菲青霉真菌感染的诊断方法真菌感染的诊断方法真菌镜检真菌镜检真菌培养真菌培养组织病理组织病理生理生化生理生化血清学方法血清学方法分子生物学分子生物学真菌镜检真菌镜检革兰染色革兰染色各种真菌均染成各种真菌均染成革兰阳性革兰阳性直接镜检直接镜检氢氧化钾（氢氧化钾（KOH）标本）标本墨汁标本墨汁标本隐球菌隐球菌其它染色其它染色（糖原染色、镀银染色、乳酸酚棉蓝染糖原染色、镀银染色、乳酸酚棉蓝染色等色等），组织病理学，组织病理学真菌直接镜检的操作真菌直接镜检的操作1.采集标本于载玻片上，滴加采集标本于载玻片上，滴加10%KOH一滴一滴2.覆上盖玻片并微加热，略加压制片后作镜检覆上盖玻片并微加热，略加压制片后作镜检3.查见真菌的有形成分（菌丝、孢子）即为阳查见真菌的有形成分（菌丝、孢子）即为阳性，反之，则为阴性性，反之，则为阴性真菌直接涂片的诊断价值真菌直接涂片的诊断价值最重要又基本的检测方法，一般医院都能开展，最重要又基本的检测方法，一般医院都能开展，能为临床提供及时的诊断依据。

能为临床提供及时的诊断依据。

发现真菌的有形成分如菌丝、假菌丝或较多的孢发现真菌的有形成分如菌丝、假菌丝或较多的孢子往往提示真菌感染。

子往往提示真菌感染。

根据菌丝、孢子的形态，部分可确定病原菌根据菌丝、孢子的形态，部分可确定病原菌隐球菌：

墨汁涂片中可见厚而透亮的荚膜隐球菌：

墨汁涂片中可见厚而透亮的荚膜念珠菌：

假菌丝及芽孢念珠菌：

假菌丝及芽孢马拉色菌：

粗短如香蕉状的菌丝和圆形的孢子马拉色菌：

粗短如香蕉状的菌丝和圆形的孢子毛霉菌：

粗大而不分隔的菌丝毛霉菌：

粗大而不分隔的菌丝念珠菌病念珠菌病-直接镜检直接镜检隐球菌病隐球菌病直接镜检直接镜检新新型型隐隐球球菌菌组织病理学组织病理学阿申蓝染色阿申蓝染色阿申蓝染色阿申蓝染色H&EPAS组织学特点组织学特点Immunochemistry皮肤隐球菌病的组织病理学皮肤隐球菌病的组织病理学菌丝菌丝孢子孢子曲霉病的曲霉病的组织病理学组织病理学Prof.RicharddCalderoneslecture-2006,Beijing曲霉病曲霉病曲霉头曲霉头双分支菌丝双分支菌丝曲霉病曲霉病直接镜检直接镜检双分支菌丝双分支菌丝曲霉头曲霉头接合菌（毛霉）病接合菌（毛霉）病直接镜检直接镜检粗大无分隔菌丝粗大无分隔菌丝真菌的培养真菌的培养培养特性：

培养特性：

营养要求不高，在营养要求不高，在沙沙保保（SabouraudSabouraud）培养基上，）培养基上，PH4PH466生长良好，需氧生长良好，需氧。

浅部真菌浅部真菌：

22222828，生长缓慢，大多于，生长缓慢，大多于1122周出周出现典型菌落。

现典型菌落。

深部感染真菌深部感染真菌：

3737长的最好，生长较快，长的最好，生长较快，3344天天即长出菌落。

即长出菌落。

真菌各种培养法真菌各种培养法常用真菌培养基及用途常用真菌培养基及用途培培养养基基用用途途沙保培养基沙保培养基真菌的常规培养真菌的常规培养放线菌酮氯霉素琼脂放线菌酮氯霉素琼脂同上同上玉米粉聚山梨酯玉米粉聚山梨酯80琼脂琼脂观察白假丝酵母菌的厚膜观察白假丝酵母菌的厚膜孢子孢子马铃薯葡萄糖琼脂马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）观察真菌菌落色素，用于观察真菌菌落色素，用于鉴别真菌鉴别真菌尿素琼脂尿素琼脂用生化反应鉴别真菌用生化反应鉴别真菌（红色癣菌和石膏样癣菌）（红色癣菌和石膏样癣菌）心脑浸液葡萄糖血琼脂心脑浸液葡萄糖血琼脂深部真菌培养（二相性真深部真菌培养（二相性真菌）菌）真菌的鉴定真菌的鉴定方法方法：

生化反应生化反应:

用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。

球菌等。

芽管形成芽管形成厚膜孢子生成厚膜孢子生成免疫学及分子生物学试验免疫学及分子生物学试验镜检镜检:

丝状真菌丝状真菌常见病原真菌常见病原真菌酵母及酵母样真菌酵母及酵母样真菌__念珠菌念珠菌__隐球菌隐球菌__毛孢子菌毛孢子菌__马拉色菌等马拉色菌等霉菌霉菌（丝状真菌丝状真菌）__皮肤癣菌皮肤癣菌__曲霉菌曲霉菌__毛霉菌毛霉菌__镰刀菌等镰刀菌等双相真菌双相真菌念珠菌念珠菌-实验室检查实验室检查直直接接镜镜检检：

可可见见卵卵园园形形发发芽芽孢孢子子及及菌菌丝丝，如如查查到到大大量量假菌丝，说明念珠菌处于致病状态。

假菌丝，说明念珠菌处于致病状态。

染染色色：

革革兰兰染染色色，菌菌丝丝、芽芽孢孢呈呈蓝蓝色色，着着色色不不均均匀匀。

过过碘碘酸酸染染色色，菌菌丝丝、芽芽孢孢染染成成红红色色。

用用1:

10001:

1000吖吖啶啶橙橙染染色，在荧光显微镜下，菌体呈现荧光。

色，在荧光显微镜下，菌体呈现荧光。

培培养养：

最最常常用用的的培培养养基基是是沙沙保保氏氏培培基基，当当菌菌落落生生长长后后再再移移种种至至米米粉粉吐吐温温8080培培基基或或其其它它鉴鉴定定培培养养基基中中，以以便便进进一步鉴定菌种。

一步鉴定菌种。

芽管试验（芽管试验（Germ-tubetest）原理原理：

白念珠菌在有营：

白念珠菌在有营养的液体环境中养的液体环境中3535培养，可从酵母细胞培养，可从酵母细胞生出芽管。

生出芽管。

结结果果：

白白念念珠珠菌菌可可在在2h2h内内生生成成芽芽管管，热热带带念念珠珠菌菌和和其其他他念念珠珠菌菌则则否。

否。

厚膜孢子形成试验厚膜孢子形成试验（Dalmoplatetest）念珠菌显色培养基念珠菌显色培养基CHROMagarCandidaAPIAUX酵母鉴定系统酵母鉴定系统ID32CID32C酵母鉴定系统酵母鉴定系统隐球菌隐球菌（Cryptococcus）土土壤壤、鸟鸟粪粪、尤尤其其是是鸽鸽粪粪中中大大量量存存在在，它它是是机机会会致致病菌。

病菌。

本本属属的的共共同同特特征征为为细细胞胞呈呈圆圆形形或或卵卵圆圆形形，偶偶有有伸伸长长形或多样形，呈多边芽殖。

形或多样形，呈多边芽殖。

大部分菌株有荚膜。

大部分菌株有荚膜。

通过呼吸道进入体内通过呼吸道进入体内健康人具有免疫能力健康人具有免疫能力易感因素易感因素AIDSAIDS、糖尿病、淋巴瘤、肿瘤、糖尿病、淋巴瘤、肿瘤、SLESLE、器官移植器官移植隐球菌病隐球菌病cryptococcosiscryptococcosis实验室检查实验室检查-病原学检查病原学检查直直接接镜镜检检:

墨墨汁汁染染色色，新新生生隐隐球球菌菌呈呈圆圆形形的的双双层层厚厚壁壁孢孢子子,外外有有一一层层宽宽阔阔荚荚膜膜,边边缘缘清清楚楚完完整整,菌菌体体内内可可见出芽（菌体计数：

判断预后及疗效的指标）见出芽（菌体计数：

判断预后及疗效的指标）培培养养：

培培养养基基内内可可加加氯氯霉霉素素,但但不不可可加加放放线线菌菌酮酮,因因后者抑制本菌生长。

后者抑制本菌生长。

生理生化测定：

采用自动微生物系统和生理生化测定：

采用自动微生物系统和APIAPI鉴定鉴定组织病理学检查及免疫组化组织病理学检查及免疫组化直接镜检直接镜检脑脊液直接墨汁