科研项目申请书模板.docx
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科研项目申请书模板
申请年度：
项目编号：
深圳市城管局科研项目
申请书
项目名称（限20个汉字）：
月
季
种
质
资
源
I
S
S
R
及
S
R
A
P
标
记
分
析
月季种质资源ISSR及SRAP标记分析及种质创新研究
承担单位（盖章）：
深
圳
市
人
民
公
园
起止时间：
2011年1月至2013年12月
申报时间：
2010年9月
申请经费：
30万元
深圳市城市管理科学研究所制
一、项目组成员情况
项目
名称
月季种质资源ISSR及SRAP标记分析
及种质创新研究
计划完成时间
2013年12月
项目合作单位
中国科学研究院仙湖植物园
合作
方式
1.合作
2.协作
项目
负责人
性别
学历
职务/
职称
项目组其他成员
姓名
性别
年龄
职务/
职称
学历
在项目中
承担的任务
所在单位
二、项目研究内容
1.摘要
月季素有“花中皇后”之美称，深受世界各国人民喜爱，且被评为中国十大名花之一。
此外，月季还是我国50多个城市的市花和部分国家的国花，在世界各地都有十分广泛的栽植应用。
但在南方尤其是深圳地区栽培，由于受高温高湿影响，病虫害（白粉病、黑斑病、红蜘蛛等）严重。
因此，培育适宜深圳地区抗逆性强的优良现代月季新品种，是提高月季生产水平的关键。
本研究拟在已收集大量月季种质资源的基础上，通过ISSR及SRAP分子标记，对月季种质资源进行遗传多样性分析，明确其亲缘关系以及与抗逆性相关的标记特征。
根据标记特征选配月季亲本进行人工杂交，并对杂交后代通过分子标记特征进行早期筛选、鉴定，为优良抗性月季新品种的培育提供基础。
2.立题依据
月季是蔷薇科蔷薇属（RosaL.）的一个重要类群，在世界范围内分布广泛，栽培历史悠久，也是我国的四大切花之一，月季具有很高的观赏价值和经济价值，市场需求量极大。
但目前国内市场上流通的月季尤其是切花月季多是从荷兰、美国、英国、法国、日本等国引进，而国内自育具有自主知识产权的品种相对较少。
因此，培育新型优良月季新品种，可以促进我国月季生产水平的提高。
月季在南方栽培过程中易受高温高湿环境影响病虫害极为严重，因此选育抗逆性强的优良现代月季品种显得极为迫切，同时结合花色、花香等方面的需求，使其从单一性状的提高转变到综合性状的改善，可以更好地满足市场需求。
月季原产中国，我国的月季种质资源非常丰富。
据统计，原产我国的蔷薇有100种左右，而目前开发的只有7种，大量的月季种质资源尚未得到合理利用。
现已查明，我国的野生蔷薇中一些种的抗寒性、抗旱性、抗病性（黑斑病、白粉病）极强，如我国原产的刺蔷薇（R.aeieularzs）、疏花蔷薇（R.lazes）、弯刺蔷薇（R.beggeriana）、长白蔷薇（R.koreana）等耐寒种质，小蘖叶蔷薇（R.berberifolia）、弯刺蔷薇、西北蔷薇（R.davidii）等耐旱种质，尾萼蔷薇（R.caudta）等耐荫种质，利用这些优异资源我国古代劳动人民已培育出许多在抗逆性、四季开花性和观赏性等方面表现优良并独具特色的月季品种（黄善武等，1989；马燕等，1990）。
但迄今为止，仍有较多蔷薇属种质资源未在国内外合理开发应用，用于培育现代月季的蔷薇原种仅有10~15个（Devriesetal，1996；Gudin，2001），只占蔷薇原种总数的1/10（马燕等，1990），仍有大量的基因资源未能很好地开发利用，如将这些各具特色的遗传资源应用于现代月季的育种，必将在培育月季新品种方面产生新的突破。
我国栽培蔷薇的历史悠久，古代的劳动人民在无意或有意识中选择出了许多优良的品种，目前有记载的就有数百种（张本，1998），它们没有参与现代月季品种群的形成。
这些古老品种大多具有抗性强、健花性等特点，应该尽快将这些优良的基因引入到现代月季中来。
由于月季种类繁多，来源广泛，加之广泛的种内杂交，其种质资源复杂多样，使分类和鉴定工作难度加大。
目前，月季种质资源评价多集中在形态特征、核型和生理生化特征方面，这些指标的评价又容易受到环境因素和发育阶段的影响，很难满足月季分类鉴定、产权保护和新品种培育工作的需要。
而建立在分子水平的种质资源评价相对较少，且多集中在RAPD、RFLP及AFLP等标记技术，如Torres等（1992）应用RAPD标记鉴定部分月季品种，把供试的5个月季品种区别开；Iwata等（2000）采用RAPD技术分析了大马士革蔷薇群（Damaskroses）的起源；王国良等（2001）应用RAPD分子标记技术对17个组别的45个切花月季芽变品种进行过鉴别研究；Debener等（1999）证明了RAPD标记在月季遗传连锁图谱建立和亲本分析中具有重要作用；RajapakseS等（1992）报道了RFLP在月季中的应用。
近年来新发展的ISSR、SRAP标记技术结合了RAPD和SSR的优点，具有模板需要量少，多态性丰富，结果记录方便，实验成本低，操作简单，实验稳定性较高等优点。
在许多植物的种质资源评价和重要性状遗传分析中得到广泛应用。
ISSR和SRAP作为两种新型的分子标记技术已成功用于柑橘、黄瓜、莲、万寿菊等园艺植物的遗传多样性分析和亲缘关系研究中（Yangetal.，2006；李锡香，2002；瞿桢，2008；张西西，2008），赵倩（2008）利用ISSR标记技术对62个月季品种的遗传背景分析，通过扩增谱带将供试品种完全区分开来；Li等（2003）在大白菜中发现了一个与雄性不育基因有关的SRAP标记，在油菜中筛选到一个与Rf连锁的SRAP标记。
而SRAP分子标记技术在月季遗传多样性研究中的应用至今尚未见报道。
因此，对现有月季种质资源采用ISSR和SRAP进行遗传多样性和亲缘关系研究，对特定抗性性状通过两种标记技术进行分析，为杂交亲本选配提供准确的依据，杂交后代的鉴定也可以通过抗性标记迅速筛选具优良特征的杂交后代株系，缩短育种周期。
因此，本研究拟对本园已收集的月季种质资源采用ISSR和SRAP分子标记技术进行遗传多样性分析，明确抗逆性状相关标记特征，并在此基础上选配亲本配置杂交组合，杂交后代进一步通过标记特征进行早期鉴定和筛选，为适宜深圳地区栽培的具有自主知识产权的现代月季优良新品种的培育提供基础。
参考文献：
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中国林业出版社，2001．
2.黄善武，葛红．弯刺蔷薇在月季抗寒育种上的研究利用初报[J]．园艺学报，1989，16（3）：
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3.李锡香.黄瓜种质遗传多样性的形态和分子评价及亲缘关系研究[D].北京：
中国农业科学院，2002.
4.马燕，陈俊愉．我国西北的蔷薇属种质资源[J]．中国园林，1990，6
（1）：
50-51．
5.瞿桢，魏英辉，李大威等.莲品种资源的SRAP遗传多样性分析[J].氨基酸和生物资源，2008，30（3）：
21-25.
6.王国良，上田善弘，巫水钦．切花月季芽变品种的分子标记与鉴别研究[J]．江苏林业科技，2001，28
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上海科学技术出版社，1998．
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华中农业大学，2008.
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past，present，prospects[J]．ActaHort，1996，424：
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12.GudinSerge．RoseBreedingTechnologies[J]．ActaHort，2001，547：
23-26．
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14.LiG，GaoM，YangB，QuirosCF.GeneforgenealignmentbetweentheBrassicaandArobidopsisgenomesbydirecttranscriptomemapping[J].TheorApplGenet，2003，107:
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16.TorresAM，MillanT，CuberoJ．IdentifyingrosecultivarsusingrandomamplifiedpolymorphicDNAmarkers[J]．HortScience，1992，28（4）：
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17.YangWH，GloverBJ，RaoGY，YangJ.MolecularevidenceformultiplepolyploidizationandlineagerecombinationintheChrysanthemumindicumpolyploidycomplex（Asteraceae）.Newphytologist，2006，179:
1-12.
3.研究内容
3.1对已收集的月季种质资源进行形态特征和生理特征的评价和分析。
包括对不同种和品种86份月季种质材料的株高、叶形、叶色、株型和开花特征等表型特征进行分析，以及对抗热性、抗病性等特定抗逆性的研究。
3.2应用ISSR、SRAP对已收集蔷薇属种质资源的遗传多样性及亲缘关系评价。
3.2.1进行引物的设计和筛选；
3.2.2ISSR和SRAP反应体系及条件建立；
3.2.3月季种质资源遗传多样性和亲缘关系分析，以及抗逆性状标记特征分析；
3.3根据标记结果选配亲本进行杂交组合
3.3.1根据抗逆性状标记特征选配杂交亲本；
3.3.2进行不同组合亲本套袋杂交；
3.3.3杂交果实养护及座果情况调查；
3.3.4杂种种子采收、贮藏和播种。
3.4对杂交后代应用ISSR和SRAP标记进行优良株系的早期筛选和鉴定
杂交后代群体种子播种，以幼苗为材料，根据抗逆性状标记特征在后代群体中筛选抗逆株系。
技术路线：
图1：
月季种质资源ISSR和SRAP标记及种质创新技术路线
4.技术关键
1.ISSR、SRAP反应条件及体系的建立，引物的设计，筛选。
2.月季种质资源典型抗逆性材料的特征标记，另对抗热、抗病等重要性状的相关性分析。
5.特色与创新
1.对已收集的86份原产我国的优异月季种质资源进行系统评价，为进一步合理利用优异月季种质资源提供依据。
2.采用ISSR和SRAP两种新型分子标记技术对月季种质资源遗传多样性和亲缘关系进行研究，并对抗性相关性状标记特征进行分析，可以为月季杂交亲本的选配及杂交后代的鉴定提供准确依据。
6.预期成果
1.通过ISSR和SRAP分子标记对已收集的月季种质资源进行遗传多样性和亲缘关系评价，并确定优异抗逆性状材料的标记特征。
2.根据分子标记特征配置月季亲本杂交组合多个，并通过标记特征进行杂交后代的早期鉴定和筛选，获得一定数量的优良杂交后代株系。
3.建立稳定的月季ISSR和SRAP标记技术，发表相关研究论文1-2篇。
7.进度安排
2011.1-6在现有工作基础上，对已收集的月季种质资源进行形态特征和抗逆生理评价。
2011.7-12ISSR和SRAP引物的设计、筛选，反应条件的建立等，对月季种质资源进行分子标记分析。
2012.1-12根据分子标记结果选配月季亲本并配置杂交组合，套袋杂交。
2013.1-10杂交后代种子播种，对萌发的幼苗利用ISSR和SRAP标记技术根据标记特征进行早期鉴定，筛选优良株系
2013.11-12试验结果整理、分析；课题归纳，总结。
三、项目经费预算表
经费总额（大写）：
三十万元
（小写）：
30.0万元
年度计划：
2011年15.0万元
2012年10.0万元
2013年5.0万元
预算支出科目
金额
支出根据及理由
1.科研业务费
①测试费
②温室租赁及能源动力费
③差旅费/会议费
④出版物/文献/信息传播费
⑤成果鉴定费
2.实验材料费
①引种费用
②生化及分子生物学试剂费
3.劳务费
4.协作费
5.管理费
10.0
4.0
2.0
2.0
1.0
1.0
12.0
2.0
10.0
2.0
5.0
1.0
抗热、抗病等特定性状指标测定
温室大棚租用，实验室能耗等
月季育种会议交流等研讨会
论文发表版面费等
申报月季新品种所需的鉴定费
进一步收集月季育种资源
化学药品及ISSR和SRAP分子标记所用到的试剂盒等的购买
人工杂交工作临时用工费
协作单位的试验费
课题管理费
四、审批意见
所
在
单
位
意
见
负责人（签章）：
年月日
科
研
管
理
部
门
意
见
1、建议立项2、待定3、不宜立项
建议立项原因
不宜立项原因
负责人（签章）：
年月日
局
领
导
审
批
意
见
局领导（签章）：
年月日
升级会员 