荧光素钠注射液的制备及质量检查.docx
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荧光素钠注射液的制备及质量检查
吉林省高等教育自学考试吉林大学生物制药专业
本科毕业设计
设计题目：
荧光素钠注射液的制备及质量检查
设计作者:
准考证号：
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吉林大学生命科学学院
2012年3月24日
摘要
本文研究了荧光素钠注射液的制备及质量检查。
首先对荧光素钠进行提纯和检查，并对荧光素钠进行酸碱度，溶液的澄清度和颜色，氯化物，硫酸盐，锌盐，干燥失重等检查。
采用重量测定法测定含量。
对制备工艺中的活性炭用量筛选、pH值的选择、灭菌温度、处方制备工艺等进行考察。
后对荧光素钠注射液进行光照（4000lx），高温（60℃），低温（4℃）等影响因素实验并检测含量变化。
最后对荧光素钠注射液进行性状检查和鉴别，采用中国药典规定的重量法测定含量。
结果表明:
本制备工艺科学合理，产品质量好，注射液的pH值、可见异物均符合要求。
采用重量法测定荧光素钠的含量，其重复性试验、重现性试验、回收率试验均符合测试要求，说明用本法测定荧光素钠的含量准确度好。
测定样品荧光素钠的含量为标示含量的99.5％，符合为标示含量的90.0％～110.0％的范围，符合要求。
关键词：
荧光素钠；荧光素钠注射液；制备工艺；含量检查
一、前言·····································································································1
㈠试剂及仪器·······················································································2
1.原料与试剂··························································································2
2.仪器···································································································2
㈡实验方法与步骤···················································································2
1.荧光素钠提纯························································································2
2.荧光素钠原料检查·················································································3
a.性状·····································································································3
b.鉴别·····································································································4
c.检查·····································································································5
d.含量测定······························································································7
3.荧光素钠注射液的制备···········································································8
a.荧光素钠注射液的配制···········································································8
b.制备工艺流程图···················································································8
c.处方依据······························································································8
d.工艺筛选······························································································9
e.影响因素试验······················································································10
f.处方中各成分的作用·············································································11
4.制剂检测·····························································································11
a.性状·································································································11
b.鉴别·································································································11
c.检查·································································································12
d.含量测定···························································································13
㈢结果与讨论·························································································14
1.荧光素钠静脉注射液的PH值··································································14
2.注射液中微粒及细菌·············································································15
㈢参考文献·····························································································16
㈣致谢································································································17
前言
荧光素钠注射液用于供诊断眼角膜损伤、溃疡和异物，眼底血管造影和循环时间测定。
也用于术中显示胆囊和胆管，以及结核性脑膜炎的辅助诊断等。
主要用于：
1.循环时间测定（前臂静脉注射，成人常用量5ml（10%）；小儿常用量，按体重0.05ml/kg（10%），全量在1秒内快速推入。
）；2.眼底血管造影（静脉注射，成人常用量5ml（10%），或按体重15～30mg/kg计算，全量在4秒左右推注完毕，注射后8秒开始在蓝色光波激发下用荧光眼底照相机连续摄影，开始每秒1张，连续10秒，以后在30分钟内适当间隔摄片，也可用眼底镜直接观察。
）；3.术中显示胆囊和胆管（手术前4小时静脉注射5ml（10%）。
）；4.脑脊液渗透率试验（诊断结核性脑膜炎。
肌内注射，成人推荐用量5～10ml（10%）；儿童推荐用量按体重0.3ml/kg（10%），注射后2小时腰椎穿刺抽取脑脊液，与浓度为0.00001%、0.00002%、0.00003%、0.00005%、0.00006%、0.0001%、0.0002%和0.0005%的标准系列比色管比色。
）；另外还用于眼科检查角膜损伤、溃疡或异物（作2%滴眼液以微细滴管滴眼）。
其中眼角膜损伤和血管造影诊断及血液循环时间的测定[1，2],显影清晰度和持续时间是造影的重要质量指标。
药理学研究显示：
本品为诊断用药，是一种染料，对正常角膜等上皮不能染色，但能对损伤的角膜上皮染成绿色，从而可显示出角膜损伤、溃疡等病变。
本品流经小血管时，能在紫外线或蓝色光激发下透过菲薄的血管壁和粘膜呈现绿色荧光，从而显示小血管行经和形态等，据此可供眼底血管造影和循环时间测定。
荧光素钠静脉注射液是由间-苯二酚和邻-苯二甲酸酐合成为荧光素粗制品，经提纯成为精品后用氢氧化钠、注射水配制而成的。
本品过敏反应包括：
荨麻疹、呼吸困难、哮喘发作、呼吸停止、血压下降、休克、心脏停搏、心肌梗塞、肺水肿和脑梗塞等。
常见反应有恶心、呕吐、眩晕，多在注射后30秒钟内发生。
反应发生率和严重程度与注射剂浓度和注入量有关。
一次静脉注入量>5ml（5%），常可出现恶心和呕吐症状[3]。
本品血管造影时总的反应发生率约0.6%，严重反应约0.4%。
静脉注射后皮肤和尿液暂时染色，视物有黄色或粉红色感觉。
本实验研究了荧光素钠注射液的制备工艺及含量的检测，检测结果符合要求，说明方法可行。
荧光素钠注射液的制备及质量检查
㈠试剂及仪器
1.原料与试剂
氯化铵（分析纯国药集团化学试剂有限公司）；氢氧化钠（分析纯国药集团化学试剂有限公司）；活性炭（药用国药集团化学试剂有限公司）；盐酸（分析纯沈阳市新化试剂厂）；甲醇（分析纯沈阳市新化试剂厂）；乙醇（分析纯沈阳市新化试剂厂）；氯仿（分析纯沈阳市新化试剂厂）；重铬酸钾（分析纯沈阳新化试剂厂）；浓硫酸（分析纯沈阳市新化试剂厂）；硝酸（分析纯沈阳市新化试剂厂）；磷酸（分析纯沈阳市新化试剂厂）；荧光素钠注射液（自制,规格0.6g：
3mL）；磷酸二氢钠（分析纯国药集团化学试剂有限公司）；氯化钠（分析纯国药集团化学试剂有限公司）；丁醇（分析纯沈阳市新化试剂厂）；异丁醇（分析纯沈阳市新化试剂厂）；试验样品（批号：
yp01，yp02，yp03）：
均为自制。
对照品：
系由原料药重结晶制得，纯度为99.6%，含量为99.7%（重量法）。
市售样品：
荧光素钠注射液20瓶（广州明兴制药有限公司生产，批号：
031102，0.6g/3ml），合并后蒸出大部分水，剩余物冷却后抽滤，用少量水洗涤，120℃真空干燥，得市售样品。
2.仪器
UV9200型紫外一可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）;
JA-1003型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）;
电热鼓风干燥箱（上海博迅实业有限医疗设备厂）;
雷磁pHS-3C型精密pH计
SC-4000A型澄明度检测仪（上海黄海药检仪器有限公司）
2实验方法与步骤
1.荧光素钠提纯
取荧光素粗制品，用适量的氢氧化钠加热溶解，然后加人l%活性炭（按溶液体积计算），搅拌15分钟，过滤。
滤液加酸得荧光素沉淀，静置3小时，抽滤。
沉淀用注射用水洗涤。
然后把沉淀再用碱溶解、过滤、加酸沉淀、洗涤，如此反复3次，得到荧光素钠精品，最后把精品烘干、备用。
2.荧光素钠原料检查
a、性状
（1）外观、臭、味：
本品为橙红色粉末；无臭，几乎无味。
（2）引湿性：
取适量，敞口置于25℃±1℃恒温干燥器（氯化铵饱和溶液）内，放置24小时，结果见表2-1。
表2-1荧光素钠引湿性试验结果
批号yp01yp02yp03市售样品
吸湿增重%13.813.012.814.2
由试验结果可知，本品具有引湿性。
（3）溶解度：
照中国药典2005年版二部凡例溶解度项下的有关规定试验，荧光素钠对照品在常见溶剂中溶解度[4]见表2-2。
表2-2溶解度试验结果
溶剂
对照品量（mg）
对照品量/溶剂量（g/ml）
溶解情况
水
100
1:
9
易溶
甲醇
100
1:
9
易溶
乙醇
100
1:
90
略溶
氯仿
100
1:
10000
几乎不溶
0.1mol/LNaOH
100
1:
0.9
极易溶解
由试验结果可见，本品在水、甲醇中易溶，在乙醇略溶，在氯仿中几乎不溶，在0.1mol/LNaOH中极易溶解。
经过三批样品试验，溶解度均符合规定。
（4）吸收系数：
①仪器的校正和检定：
对所用UV9200型紫外一可见分光光度计在测定前进行全面检定，吸收度的准确度按中国药典2005年版二部附录IVA项下，用重铬酸钾的硫酸溶液检定，结果见表2-3。
仪器实测的吸收系数与规定值的相对偏差小于±1％，符合规定。
表2-3仪器吸收度校正结果
波长/nm
235（最小）
257（最大）
313（最小）
350（最大）
规定E1%1cm
124.5
144.0
48.62
106.6
吸收度
0.763
0.881
0.297
0.651
E1%1cm
124.6
143.8
48.49
106.3
相对偏差（%）
0.08
0.21
0.27
0.28
②紫外图谱的测定：
取荧光素钠对照品适量，用甲醇为溶剂，制成每1ml含8μg的溶液，照分光光度法（中国药典2005年版二部附录ⅣA），在200～400nm波长范围内扫描，，结果表明本品在321nm±1nm，277.5nm±1nm，234nm±1nm处有吸收峰。
③方法与结果：
供试溶液的制备：
精密称取对照品25mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。
精密量取贮备液2ml（溶液1，A=0.3～0.4）和4ml（溶液2，A=0.6～0.8），置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
吸收系数的测定：
温度为18℃～20℃，用1cm石英吸收池，在234nm波长处分别测定吸收度，计算吸收系数，吸收系数测定结果见表2-4，2-5。
表2-4吸收系数的测定数据
吸收度（A）
试样I
试样II
溶液1
5.07μg/ml
溶液2
10.04μg/ml
溶液3
4.99μg/ml
溶液4
9.98μg/ml
0.361
0.724
0.357
0.716
表2-5吸收系数的测定结果
吸收系数（E1%1cm）
试样I
试样II
溶液1
溶液2
溶液3
溶液4
712.0
714.0
715.4
717.4
X±SD
714.7±16.27
测得吸收系数（E1%1cm）为714.7（RSD=2.08%），经对三批样品测定，吸收系数分别为：
yp01，714.2；yp02，715.1；yp03，714.5。
b、鉴别
化学鉴别法：
（1）本品的水溶液显强烈的荧光，用大量的水稀释后仍极明显；但加酸使成酸性后，荧光即消失；再加碱使成碱性，荧光又显出。
结果：
三批样品均成正反应。
（2）本品炽灼灰化后显钠盐的鉴别反应。
结果：
三批样品均成正反应。
c、检查
（1）酸碱度：
①仪器与试剂：
雷磁PHS-3C型精密PH计
②测定方法：
取三批样品与对照品各约1.0g，加水溶解并稀释至50ml，依法测定（中国药典2005年版二部附录VIH）pH值应为7.0～9.0。
③结果：
结果见表2-6。
表2-6荧光素钠pH值测定结果
批号
yp01
yp02
yp03
市售样品
PH值
7.91
7.95
8.03
8.06
（2）溶液的澄清度和颜色：
取三批供试品与对照品各1.0g，加水50ml使溶解，观察溶液的颜色与澄清度。
结果见表2-7
表2-7荧光素钠澄清度和颜色检查结果
批号
yp01
yp02
yp03
市售样品
澄清度
澄清
澄清
澄清
澄清
颜色
橙黄色并有
黄绿色荧光
橙黄色并有
黄绿色荧光
橙黄色并有
黄绿色荧光
橙黄色并有
黄绿色荧光
结论：
本品三批原料药与对照品的水溶液均澄清，颜色为橙黄色并有黄绿色荧光。
（3）氯化物：
①供试溶液：
取本品0.10g，加水50ml使溶解，分取溶液10ml，加水25ml和稀硝酸10ml，过滤；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。
②测试操作方法：
取上述供试溶液，按（中国药典2005年版二部附录ⅧA）氯化物检查法操作，和标准氯化钠溶液7.0ml制成的对照溶液进行比较，不得更浓（0.35%）。
③结果：
结果见表2-8。
表2-8荧光素钠原料药氯化物检查
批号
yp01
yp02
yp03
市售样品
氯化物
＜0.35%
＜0.35%
＜0.35%
＜0.35%
（4）硫酸盐：
①供试溶液：
取上述氯化物项下剩余的溶液25ml，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，过滤，加稀盐酸2ml，摇匀，即得供试品溶液。
②测试操作方法：
取上述供试溶液，按（中国药典2005年版二部附录ⅧB）硫酸盐检查法操作，和标准硫酸钾溶液2.5ml制成的对照溶液进行比较，不得更浓（0.50%）。
③结果：
结果见表2-9。
表2-9荧光素钠原料药硫酸盐检查结果
批号
结果
yp01
＜0.50%
yp02
＜0.50%
yp03
＜0.50%
市售样品
＜0.50%
（5）锌盐：
①测试操作方法：
取本品约0.10g，加氯化钠饱和水溶液10ml溶解后，加稀盐酸2ml，摇匀，滤过，滤液中加亚铁氰化钾试液1ml，不得发生浑浊。
②结果：
结果见表2-10。
表2-10荧光素钠原料药锌盐检查
批号
yp01
yp02
yp03
市售样品
锌盐
未见浑浊
未见浑浊
未见浑浊
未见浑浊
（6）干燥失重：
①仪器：
电热鼓风干燥箱
②测定方法：
取本品，照干燥失重测定法（中国药典2005年版二部附录ⅧL）操作，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过7.0%。
③结果：
结果见表2-11。
表2-11干燥失重检查结果
批号
yp01
yp02
yp03
市售样品
干燥失重
1.29%
1.37%
1.34%
1.18%
结论：
三批样品及对照品干燥失重均小于7.0%。
d、含量测定
荧光素钠原料的含量测定照荧光素钠含量测定法（中国药典2005年版二部附录P448），采用重量法。
（1）测定法：
取本品约0.5g，精密称定，加水20ml溶解后，加稀盐酸5ml使荧光素析出，用丁醇-氯仿（1:
1）提取4次，每次20ml，合并提取液，用水10ml洗涤，洗液再用异丁醇-氯仿（1:
1）5ml振摇提取，合并提取液，置105℃恒重的容器中，在水浴上通风蒸发至干，残渣用乙醇10ml溶解后，再置水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重，精密称定，残渣重量与1.132相乘，即得供试量中含有C20H10Na2O5的重量。
（2）重复性试验：
再取本品，精密称定，照含量测定方法测定含量。
共测6份。
结果见表2-12。
表2-12重复性试验结果
序号
1
2
3
4
5
6
含量（%）
99.1
99.5
99.8
99.2
99.1
99.0
含量平均值（%）
99.3
RSD%
0.31
（3）样品测定：
照测定法，对三批样品进行测定，测定结果见表2-13。
表2-13三批样品含量测定
批号
yp01
yp02
yp03
含量（%）
99.4
99.6
99.5
3、荧光素钠注射液的制备
a、荧光素钠注射液的配制
（1）称取处方量的荧光素钠，加入注射用水近全量，搅拌，加热使完全溶解；
（2）滴加0.1mol/L氢氧化钠溶液适量，调节pH至8.2～8.4，加入注射用水至全量；
（3）加入0.1%的药用活性炭，80℃保温搅拌20min，趁热脱炭；
（4）测定半成品含量，符合要求后药液经0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装至5ml安瓿中；
（5）密封，于100℃流通蒸气灭菌40min；
（6）灯检，印字。
b、制备工艺流程图[6]
加注射用水0.1mol/LNaOH调节pH
至8.2～8.4
加0.1%药用活性炭测含量，经0.45μm
保温20分钟，搅拌，微孔滤膜滤过
趁热脱炭
灌装，密封灯检，印字
c、处方依据
1）规格依据：
根据荧光素钠注射液（中国药典2005年版二部）规格项下规定，确定其规格为3ml：
0.6g。
2）pH：
根据荧光素钠注射液质量标准（中国药典2005年版二部）pH值的要求（8.0～9.8）以及一般注射剂对pH值的要求，确定本品在溶液配制时的pH值控制在8.2～8.4。
d、工艺筛选
（1）活性炭用量筛选
配制注射液过程中加入活性炭可以吸附药液的杂质和热原。
考察加入0.05%，0.1%和0.15%的针用活性炭后，溶液中荧光素钠含量的变化情况。
表3-1活性炭用量的选择
活性炭用量（%）
加入活性炭前
含量（%）
加入活性炭后
含量（%）
0.05
99.8
99.3
0.1
99.8
98.9
0.15
99.8
98.7
从试验中可见活性炭吸附有效成分含量，从试验结果并参照注射液的制备工艺，确定加活性炭的量为0.1%，为保证终产品热原检查合格，用0.1%的活性炭对制剂中间溶液进行处理，可以达到去除热原的目的，并在制备过程中应测定中间体含量并应调到规定的浓度即可。
（2）pH值的选择
分别配制pH5、pH6、pH7、pH8、pH9的荧光素钠注射液，分别在4℃时放置荧光素钠注射液10天，取样观察其溶液的颜色及澄明度。
取样观察pH5、6的荧光素钠注射液有沉淀析出，pH7、pH8、pH9的荧光素钠注射液中溶液澄明。
表3-2pH值选择考察结果
pH
5
6
7
8
9
澄明度
有沉淀析出
有沉淀析出
澄明
澄明
澄明
颜色
橙黄色
橙黄色
棕色
棕色
棕色
从以上结果可以看出荧光素钠注射液在pH7～9之间较稳定。
（3）灭菌温度
取按上述制备工艺制备的荧光素钠注射液，分别于灭菌温度115℃，灭菌时间30min；灭菌温度121℃，灭菌时间20min；灭菌温度126℃，灭菌时间15min后，放置,检查，结果表明，选择115℃灭菌30min比较适合。
表3
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