2.2.2(公开课)动物细胞融合与单克隆抗体.ppt
《2.2.2(公开课)动物细胞融合与单克隆抗体.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2.2.2(公开课)动物细胞融合与单克隆抗体.ppt（26页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
金晓媛2016.3.302002年年12月月30日，日，两场筹备了两场筹备了10年的年的“太太空婚礼空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞植物细胞“新人新人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细胞叶肉细胞原原生质体生质体，动物细胞动物细胞“新人新人”是小鼠是小鼠B淋巴细胞淋巴细胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞，两批新人同时在，两批新人同时在“产房产房”电融合电融合仪内孕育新生命。
仪内孕育新生命。
“太空婚礼太空婚礼”这两场这两场“太空婚礼太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技实质是哪两项细胞工程技术术植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术1010分钟分钟各小组讨论完成探究案和选各小组讨论完成探究案和选择题，小组代表稍后汇报答案。
择题，小组代表稍后汇报答案。
各小组按下表要求将答案写在黑板上各小组按下表要求将答案写在黑板上探究一探究一1鲜静组前黑板鲜静组前黑板一一2孟庆鑫组前孟庆鑫组前黑板黑板探究二探究二1王思渝组前王思渝组前黑板黑板二二2杨文静组后杨文静组后黑板黑板二二3蒲晏局组后黑板蒲晏局组后黑板选择题选择题司彭慷组后黑板司彭慷组后黑板杨璐宁组，姚莹组，田家豪组准备做点评杨璐宁组，姚莹组，田家豪组准备做点评单抗制备过程分哪几步？
单抗制备过程分哪几步？
请用箭头把以下代表单克隆抗请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。
顺体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。
顺序是？
序是？
探究探究【1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心离心B.灭活的病毒灭活的病毒C.电刺激电刺激D.振动振动【2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增殖能无限增殖C.可形成新个体可形成新个体D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁【3】动物细胞融合的作用中最重要的是（动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体C.培育新物种培育新物种D.生产杂种细胞生产杂种细胞BBA【44】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.A.经过免疫的经过免疫的BB淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的TT淋巴淋巴细胞细胞B.B.不经过免疫的不经过免疫的TT淋巴细胞淋巴细胞D.D.不经过免疫的不经过免疫的BB淋淋巴细胞巴细胞【55】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）A.A.BB淋巴细胞淋巴细胞BBTT淋巴细胞淋巴细胞CC骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞DD杂交瘤细胞杂交瘤细胞AD【6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中实验步骤中错误错误的是（的是（）AA将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的BB淋巴淋巴细胞细胞BB用纤维素酶处理用纤维素酶处理BB淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞CC用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的BB淋巴淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合DD筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体B
（1）
（1）
（2）（3）（4）（5）植物体细胞杂交过程示意图一、动物细胞融合一、动物细胞融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、PEGPEG、电激等、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞形成完整的杂交细胞诱导的手段？
诱导的手段？
融合后细胞的类型？
融合后细胞的类型？
ABAB杂种细胞遗传物质杂种细胞遗传物质有什么特点？
有什么特点？
三种三种AAAA、ABAB、BBBB（AA、BB）含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质动物细胞融合过程动物细胞融合过程原理？
原理？
1.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程为什么灭活的为什么灭活的病毒能作诱导剂病毒能作诱导剂？
灭活丧灭活丧失感染性失感染性保留融合活性保留融合活性比较项比较项目目细胞融合细胞融合的原理的原理细胞融合的细胞融合的方法方法诱导手段诱导手段用途用途植物体植物体细胞杂细胞杂交交细胞膜的细胞膜的流动性流动性纤维素酶、纤维素酶、果胶酶果胶酶去除去除细胞壁后诱细胞壁后诱导原生质体导原生质体融合融合离心、电刺离心、电刺激、振动、激、振动、聚乙二醇聚乙二醇克服远源克服远源杂交不亲杂交不亲和，获得和，获得杂种植株杂种植株动物细动物细胞融合胞融合细胞膜的细胞膜的流动性流动性用用胰蛋白酶胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散后诱导细胞后诱导细胞融合融合除应用植物除应用植物细胞杂交手细胞杂交手段外，段外，还有还有灭活病毒灭活病毒获得杂种获得杂种细胞、细胞、制备制备单克隆抗单克隆抗体体比较动、植物细胞杂交技术比较动、植物细胞杂交技术动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用突破有性杂交方法的局限，使远突破有性杂交方法的局限，使远突破有性杂交方法的局限，使远突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能缘杂交成为可能缘杂交成为可能缘杂交成为可能最主要用途：
制造单克隆抗体最主要用途：
制造单克隆抗体最主要用途：
制造单克隆抗体最主要用途：
制造单克隆抗体强调：
强调：
效应效应B淋巴细胞是淋巴细胞是能够产生抗体的能够产生抗体的B淋巴细淋巴细胞，下文将其简称为胞，下文将其简称为B淋淋巴细胞巴细胞抗体：
能够与抗原发生特抗体：
能够与抗原发生特异性结合的异性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。
能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细浆细胞（即效应胞（即效应B细胞）。
细胞）。
BBBB淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞效应效应效应效应BBBB淋巴淋巴淋巴淋巴细胞细胞细胞细胞记忆记忆记忆记忆BBBB淋巴淋巴淋巴淋巴细胞细胞细胞细胞分化分化分化分化抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：
该法制备抗体的缺点：
产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度体的特异性差、灵敏度低。
低。
单克隆抗体！
单克隆抗体！
读下面一读下面一段资料，段资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念人人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的BB细胞细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个BB细胞只细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。
要想获得大量的分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。
要想获得大量的单一抗体，必须用单个单一抗体，必须用单个BB细胞进行无性繁殖，即克隆。
细胞进行无性繁殖，即克隆。
单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单克隆单克隆抗体：
单个抗体：
单个BB细胞克隆产生的细胞克隆产生的化学性化学性质单一、特异性强质单一、特异性强的抗体的抗体一个一个BB淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：
设计方案：
动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验2.诱导其融合的方法有哪些？
诱导其融合的方法有哪些？
3.融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种细胞?
4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点交瘤细胞有何优点?
原因？
原因？
1.注射特定抗原的目的注射特定抗原的目的?
5.为何要进行克隆化培养和为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选专一抗体检测，多次筛选?
6.大量增殖杂交瘤细胞和获大量增殖杂交瘤细胞和获得单抗的方法得单抗的方法?
产生相应的产生相应的产生相应的产生相应的BB淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞选择培养基选择培养基选择培养基选择培养基既能在体外无限增殖，也能产生特定既能在体外无限增殖，也能产生特定既能在体外无限增殖，也能产生特定既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗体的抗体的抗体的抗体具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质培养液中或小鼠培养液中或小鼠培养液中或小鼠培养液中或小鼠腹腔中培养腹腔中培养腹腔中培养腹腔中培养从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取BBBB、BB瘤瘤、瘤瘤瘤瘤（BB、瘤）、瘤）（一选）（一选）选选择性培养基择性培养基：
只有只有杂交瘤杂交瘤细胞细胞才能存才能存活活获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的BB细胞细胞（二选）：
选（二选）：
选能产生所需能产生所需专专一抗体的杂交一抗体的杂交瘤细胞瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：
杂交瘤细胞特点：
既能产生特异性既能产生特异性抗体，又能大量抗体，又能大量增殖。
增殖。
2.3单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：
单克隆抗体最主要的优点：
特异性强，灵敏特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
度高，并能大量制备。
“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆抗体药物单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成癌药物，形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。
准确杀伤癌变细胞。
两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三三个个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势7
（1）7
（1）若若AA细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则BB细胞是取自小细胞是取自小鼠体内的鼠体内的细胞，细胞，从小鼠体内提取分离该细胞从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射之前，应给小鼠注射_类物质。
类物质。
（2）d过程过程是一个是一个_过程，该过程的进过程，该过程的进行常用行常用_或或_的诱导。
的诱导。
（3）（3）假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成种种类型的类型的CC细胞，因此需用细胞，因此需用_培养基筛选出培养基筛选出DD细胞细胞用于培养，用于培养，DD细胞的名称是细胞的名称是，其特点是，其特点是_。
效应效应B抗原抗原细胞融合细胞融合聚乙二醇聚乙二醇灭活的病毒灭活的病毒选择性选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体既能无限增殖又能产生特异性抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞（4）（4）在培养时通过在培养时通过_分裂方式大量繁殖。
分裂方式大量繁殖。
DD细细胞体外培养需要注意的条件是（要求答胞体外培养需要注意的条件是（要求答55项）项）_。
（55）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是与常规抗体相比，其特点是_。
特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高有丝有丝有丝有丝无菌、无毒的环境；充足的营
升级会员 