微生物限度检验操作规程.docx

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微生物限度检验操作规程

微生物限度检验操作规程

执行日期

起草

审核

批准

部门

质量管理部

质量管理部

质量负责人

姓名

签名

日期

分发部门

质量管理部

微生物限度检验操作规程

目的：

建立微生物限度检验操作规程，以确保检验结果准确，可靠。

适用范围：

原辅材料、中药饮片

责任人：

质量管理部主任、检验员

内容：

细菌数检查操作规程……………………………………………02

霉菌和酵母菌数检查操作规程…………………………………07

大肠埃希菌检查操作规程………………………………………10

大肠菌群检查操作规程…………………………………………15

活螨检查标准操作规程…………………………………………18

细菌数检查操作规程

1概述

细菌数是指规定单位的非规定灭菌药品制剂中污染活细菌的数量。

是判定药品受到细菌污染程度的标志。

细菌数测定采用平板菌落计数法，是一种活菌计数法。

2设备及容器具

2.1设备

A恒温培养箱B微生物限度检查室C恒温水浴锅

D电冰箱E显微镜（生物显微镜）F匀浆仪

G高压蒸气消毒锅H干燥箱

2.2容器具试管架锥形瓶（250ml）吸管（1ml、5ml、10ml）

试管（18×180mm）培养皿（Ф90mm）量筒（100ml）放大镜（5-10倍）

3培养基及试剂

3.1营养琼脂

配制：

称本品32g，加1000ml纯化水，加热溶解，分装，高压灭菌121℃15分钟。

3.2pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液

配制：

称取本品16.09g，加纯化水1000ml，微温溶解，分装后于121℃高压灭菌15分钟

4检验程序

稀释

1ml

5操作步骤

5.1供试液制备

5.1.1固体制剂

用天平称取10克，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液100ml，用匀浆仪混匀，使成1：

10供试液。

5.1.2液体制剂

吸取10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，混匀,使成1:

10供试液。

5.2细菌测定

5.2.1已灭菌的营养琼脂培养基，置微波炉中融化，备用。

5.2.2计数培养基的适用性检查

细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

大肠埃希菌（Escherichiacoli）［CMCC（B）44102］

金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）［CMCC（B）26003］

枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）［CMCC（B）63501］

白色念珠菌（Candidaalbicans）［CMCC（F）98001］

黑曲霉（Aspergillusniger）［CMCC（F）98003］

菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，培养18~24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，培养24~48小时。

上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。

接种黑曲菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养5~7天，加入3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2~8℃，可在24小时内使用。

黑曲霉孢子悬浮液可保存在2~8℃，在验证过的贮存期内使用。

适用性检查取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50~100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30~35℃培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50~100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23~28℃培养72小时，计数；取白色念珠菌50~100cfu，注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23~28℃培养72小时，计数。

同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

结果判定若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。

计数方法的验证

当建立产品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。

若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。

验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。

对各试验菌的回收率应逐一进行验证。

菌种及菌液制备同计数培养基的适用性检查。

验证方法验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。

（1）实验组平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml和50~100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。

薄膜过滤法计数时，取规定量试验可能用的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50~100cfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。

（2）菌液组测定所加的试验菌数。

（3）供试品对照组取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。

（4）稀释剂对照组若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。

试验时，可用相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液含50~100cfu，按实验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。

结果判断在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌数回收率（稀释剂对照组的平均菌落占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%。

若实验组的菌数回收率（实验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌数回收率低于70%，应采用培养基稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法（常见干扰物的中和剂或灭活方法见表1）等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。

表1常见干扰物的中和剂或灭活方法

干扰物

可选用的中和剂或灭活方法

戊二醛

酚类、乙醇、吸附物

醛类

季铵类化合物（QACs）

对羟基苯甲酸酯

汞类制剂

双胍类化合物

碘酒、洗比泰类

卤化物

乙二胺四乙酸（RDTA）

磺胺类

β－内酰胺类抗生素

亚硫酸氢钠

稀释法

稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐

卵磷脂、聚山梨酯

亚硫酸氢钠、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐

卵磷脂

聚山梨酯

硫代硫酸盐

镁或钙离子

对氨基苯甲酸

β－内酰胺酶

若没有适宜的方法消除供试品的抑菌活性，那么验证试验中微生物回收的失败可看成是因供试品的抗菌活性引起的，同时表明该供试品不能被试验菌污染。

但是，供试品也可能仅对试验用菌株具有抑制作用，而对其他菌株没有抑制作用。

因此，根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响检查结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的供试液进行方法验证试验。

若验证试验符合要求，应以该稀释级供试液作为最低稀释级的供试液进行供试品检验。

计数方法验证时，采用上述方法若还存在一株或多株试验菌的回收率达不到要求，那么选择回收率最接近要求的方法和试验条件进行供试品的检验。

验证试验也可与供试品的细菌计数同时进行。

5.2.3稀释

取1ml吸管，吸取混匀的1:

10供试液1ml，沿壁注入装有9mlpH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液试管中，摇匀，使成1:

100供试液；取1ml1:

100供试液同法操作，使成1:

1000供试液。

5.2.4吸样

（1）分取混匀的1:

10供试液各2ml，注入2个平皿中，每个平皿1ml，加盖，注明名称、稀释倍数、日期。

（2）分取混匀的1:

100供试液各2ml，注入2个平皿中，每个平皿1ml，加盖，注明名称、稀释倍数、日期。

（3）分取混匀的1:

1000供试液各2ml，注入2个平皿中，每个平皿1ml，加盖，注明名称、稀释倍数、日期。

（4）分取pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液各2ml，注入2个平皿中（阴性对照），每个平皿1ml，加盖，注明名称、日期。

5.2.5注皿（平皿法）

根据菌数报告规则取相应稀释剂的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15~20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基混匀，凝固，倒置培养。

每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

将上述平板倒置30-35℃培养箱中，培养3天，在24h、2天初步点计，以3天计数为准。

阴性对照试验取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。

每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。

培养和计数除另有规定外，细菌培养3天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。

点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。

若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

一般营养琼脂培养基用于于细菌计数；在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌菌落数。

然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果。

菌数报告规则细菌、宜选取平均菌落数小于300cfu作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。

以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1ml或10cm2供试品中所含的菌数。

若各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

1.6薄膜过滤法

采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45μm,直径一般为50nm，若采用其他直径得滤膜，冲洗量应进行相应的调整。

选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。

滤器及滤膜使用前应采用是一的方法灭菌。

使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。

水溶性供试液过滤前应先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。

油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。

为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。

供试液经滤膜过滤后，若需要冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。

总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。

取相当于每张滤膜含1g、1ml或10cm2供试品的供试液，加之适量稀释剂中，混匀，过滤。

若供试品每1g、1ml或10cm2所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液1ml进行实验。

用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”。

冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基平板上培养。

至少制备一张滤膜。

阴性对照实验取试验用的稀释液1ml照上述滤膜过滤法操作，作为阴性对照。

阴性对照不得有菌生长。

培养和计数培养条件和计数方法同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不超过100cfu。

菌数报告规则以相当于1g、1ml或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1报告菌数（每张滤膜过滤1g、1ml或10cm2供试品）或＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

7结果判定

报告的细菌数和标准规定的数值相比，大于则不符合规定，反之符合规定。

霉菌和酵母菌数检查操作规程

1概述

霉菌数和酵母菌数是指规定单位非规定灭菌药品制剂中污染的霉菌和酵母菌的活菌数量。

霉菌测定时采用平板菌落计数法，是一种活菌计数法。

2设备及容器具器材

2.1设备

A霉菌培养箱B微生物限度检查室C恒温水浴锅D电冰箱

E显微镜（生物显微镜）F干燥箱J高压蒸气消毒锅

H匀浆仪

2.2容器具试管架锥形瓶（250ml）吸管（1ml、10ml）

试管（18×180mm）培养皿（φ90mm）量筒（100ml）放大镜（5-10倍）

3培养基及试剂

玫瑰红钠琼脂培养基

称本品30.5g，加1000ml纯化水，加热溶解，分装，高压灭菌121度15分钟。

PH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液

配制：

称取本品16.09g，加纯化水1000ml，微温溶解，分装后于121℃高压灭菌15分钟

4检验程序

稀释稀释稀释

1ml1ml1ml1ml

5操作步骤

5.1供试液制备。

5.1.1固体制剂

用天平称取10克，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液100ml，用适宜的方法，混匀，使成1：

10供试液。

5.1.2液体制剂

吸取10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，混匀,使成1:

10供试液。

5.2霉菌、酵母菌测定

5.2.1取玫瑰红钠琼脂培养基琼脂培养基，置微波炉中融化，备用。

5.2.2计数培养基的适用性检查、计数方法的验证同细菌。

5.2.3稀释

取1ml吸管，吸取混匀的1:

10供试液1ml，沿壁注入装有9mlpH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液试管中，摇匀，使成1:

100供试液；取1ml1:

100供试液同法操作，使成1:

1000供

试液。

5.2.4吸样

（1）分取混匀的1:

10供试液各2ml，注入2个平皿中，每个平皿1ml，加盖，注明名称、稀释倍数、日期。

（2）分取混匀的1:

100供试液各2ml，注入2个平皿中，每个平皿1ml，加盖，注明名称、稀释倍数、日期。

（3）分取混匀的1:

1000供试液各2ml，注入2个平皿中，每个平皿1ml，加盖，注明名称、稀释倍数、日期。

（4）分取PH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液各2ml，注入2个平皿中（阴性对照），每个平皿1ml，加盖，注明名称、日期。

5.2.5注皿（平皿法）

将溶化好的玫瑰红钠琼脂培养基分别注入上述平皿中，每皿15～20ml，每注完一个皿，加盖，立即转动平皿，使药液与其混合均匀，待凝固。

将上述平板倒置23-28℃培养箱中，培养5天，在24h、2天、3天、4天初步点计，以5天计数为准。

阴性对照试验取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。

每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。

培养和计数除另有规定外，霉菌、酵母菌培养5天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。

菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。

点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。

若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

一般玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。

在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基长有细菌菌落数，然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果。

含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵母菌数，合并计数。

菌数报告规则细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu、霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。

以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1ml或10cm2供试品中所含的菌数。

若各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

6薄膜过滤法

采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45”μm,直径一般为50nm，若采用其他直径得滤膜，冲洗量应进行相应的调整。

选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。

滤器及滤膜使用前应采用是一的方法灭菌。

使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。

水溶性供试液过滤前应先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。

油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。

为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。

供试液经滤膜过滤后，若需要冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。

总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。

取相当于每张滤膜含1g、1ml或10cm2供试品的供试液，加之适量稀释剂中，混匀，过滤。

若供试品每1g、1ml或10cm2所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液1ml进行实验。

用PH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”。

冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。

每种培养基至少制备一张滤膜。

阴性对照实验取试验用的稀释液1ml照上述滤膜过滤法操作，作为阴性对照。

阴性对照不得有菌生长。

培养和计数培养条件和计数方法同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不超过100cfu。

菌数报告规则以相当于1g、1ml或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1报告菌数（每张滤膜过滤1g、1ml或10cm2供试品）或＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

7结果判定

报告霉菌数与标准规定的数值相比，大于则不符合规定，小于等于符合规定。

大肠埃希菌检查操作规程

1概述

大肠埃希菌为粪便污染指示菌，是非规定灭菌口服液药品的常规必检项目。

2设备及器材

A恒温培养箱B微生物限度检查室。

C电冰箱D恒温水浴锅

E显微镜F干燥箱G高压蒸气消毒锅

H天平试管架锥形瓶（250ml）

吸管（1ml、10ml）试管（18×180mm）培养皿（Φ90mm）

量筒（100ml）酒精灯接种针匀浆仪

接种环载玻片（1mm）盖玻片（0.17mm）放大镜（5-10倍）

3培养基及试剂

3.1营养肉汤培养基

制法：

称本品18g，加1升纯化水，加热溶解，分装，高压灭菌121℃15分钟。

3.2胆盐乳糖（BL）培养基。

制法：

称本品35.8g，加1升纯化水，加热溶解，分装，高压灭菌121℃15分钟。

3.7曙红亚甲蓝（EMB）琼脂。

制法：

称本品42g，加1升纯化水，加热溶解，分装，高压灭菌121℃15分钟。

4检验程序

5操作步骤

5.1供试液制备

5.1.1固体制剂

用天平称取10克，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，用适宜的方法，混匀，使成1：

10供试液。

5.1.2液体制剂

吸取10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，混匀,使成1:

10供试液。

5.1.3　取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2）

5.2大肠埃希菌测定

控制菌检查用培养基的适用性检查

控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。

菌种对试验菌种的要求同计数培养基的适用性检查。

大肠埃希菌（Escherichiacoli）［CMCC（B）44102］

金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）［CMCC（B）26003］

乙型副伤寒沙门菌（SalmonelllaparatyphiB）［CMCC（B）50094］

菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，生胞梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，培养24~48小时。

用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10~100cfu的菌悬液。

菌悬液在室温下放置应在2个小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。

适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。

各培养基的检测项目及所用菌株见表2。

液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的试验菌（表2）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。

与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。

固体培养基促生长能力检查取试验菌各0.1ml（含菌数50～100cfu）分别被检培养基对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。

涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。

被检培养基上与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征等应一致。

培养基抑制能力检查接种不小于100cfu的试验菌（表2）于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最长时间下培养，试验菌应不得生长。

固体培养基指示能力检查取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）（表2）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。

被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应等应与对照培养基一致。

液体培养基指示能力检查分别接种不大于100cfu的试验菌（表2）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。

与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。

控制菌检查方法的验证

当建立产品的微生物限度检查法时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的控制菌检查。

若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检查方法应重新验证。

验证时，依各品种项下微生物限度标准中规定检查的控制菌选择相应验证的菌株，验证大肠菌群检查法时，采用大肠埃希菌作为验证菌株。

验证试验按供试液的制备和控制菌检查法的规定及下列要求进行。

菌种及菌液制备同控制菌检查用培养基的适用性检查

验证方法取规定量供试液及10～100cfu试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。

当采用薄膜过滤法时，取规定量供试液，过滤，冲洗，试验菌应加在最后一次冲洗液中，过滤后，注入增菌培养基或取出滤膜加入增菌培养基中。

表2控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力检查

控制菌检查

培养基

特性

试验菌株

大肠埃希菌

胆盐乳糖培养基

4－甲基伞形酮葡糖苷酸培养基

曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基

促生长能力

抑制能力

促生长能力+指示能力

促生长能力+指示能力

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

大肠埃希菌

大肠埃希菌

大肠菌群

乳糖胆盐发酵培养基

乳糖发酵培养基

曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基

促生长能力

抑制能力

促生长能力+指示能力

促生长能力+指示能力

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

大肠埃希菌

大肠埃希菌

沙门菌

营养肉汤培养基

四硫磺酸钠亮绿培养基

胆盐硫乳琼脂培养基或沙门、志贺菌属琼脂培养基

曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基

三糖铁琼脂培养基