欧蒙过敏原总IgE说明书.docx
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欧蒙过敏原总IgE说明书
总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
［产品名称］［通用名称］总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）
［英文名称］TotalIgEELISA
［包装规格］
订货号
靶抗原
基质
规格
EV3840-9601E
人IgE
包被抗体的微孔板
9601（96）
［预期用途］用于体外定量检测人血清或血浆中总IgE。
适应症：
过敏性疾病、蠕虫病、湿疹性或非湿疹性皮炎、IgE骨髓瘤等。
临床意义：
1）过敏反应和特应性疾病的诊断：
除了皮肤和激发实验、检测特异性IgE夕卜，变态反应
性疾病的诊断还包括检测总IgE水平。
但是，过敏反应并不总伴有总IgE水平的升高（成人＞100IU/ml）。
相反，低水平的IgE（成人＜25IU/ml）也不能排除患有特应性过敏反应。
通过长期脱敏治疗和远离过敏原，总IgE滴度通常会下降。
通过测定总IgE水平可以区分过敏性哮喘和内源性哮喘，过敏性鼻炎和血管舒缩性鼻
炎以及婴儿特应性皮炎和脂溢性皮炎。
在特应性皮炎患者中可见极高浓度的IgE（数千
IU/ml）。
其他过敏性（和高IgE水平）的疾病包括急性复发性或慢性荨麻疹、复发性Quincke水肿（血管神经性水肿）、胃肠道不耐受和不明原因的疹病。
检测总IgE也可用于鉴别诊
断肺部嗜酸性粒细胞浸润、变态反应性曲霉病、外源性变态反应性肺泡炎（农夫肺和养鸽者肺）和Churg-StrauB综合征。
2）其他疾病中的IgE:
高IgE水平的非变态反应性疾病包括多种形式的蠕虫病，如弓蛔虫病、蛔虫病、血吸虫病、钩虫病、利什曼原虫病、毛线虫病。
然而，在绦虫病和晓虫病中未见有IgE水平升高。
对于大多数病例，经有效治疗后，IgE水平可降至正常值范围
内。
在下列疾病中可检测出高浓度的IgE:
湿疹性或非湿疹性皮炎；
IgE骨髓瘤；
急性系统性红斑狼疮（SLE；
移植物抗宿主反应；
T细胞缺陷（Wiskott-Aldrich综合征）；
2度或3度烧伤；
耳鼻喉肿瘤；
肝病（尤其与酒精滥用有关）；
AIDS晚期阶段（CD4T细胞明显下降）。
在下列疾病中可有IgE缺陷：
X-染色体相关低丙种球蛋白血症;
严重的联合免疫缺陷（SCID）;
毛细管扩张性运动失调;
肺纤维化疾病；
［检验原理］试剂盒中每个微孔板条有8个可拆分的包被有抗人IgE多克隆抗体的微孔。
第一次温育时，稀释后的样本在微孔中反应。
如果样本阳性，特异性IgE与抗体结合。
为了检测结合的IgE，加入能发生颜色反应的酶标抗人IgE抗体（酶结合物）进行第二次温育。
然后加入酶底物，发生颜色反应。
通过标准品1-4绘制的标准曲线来确定IgE浓度。
［主要组成成分］
成分
颜色
规格
标识
1•微孔板：
包被有抗原的微孔12条，每条有8个可
拆分的微孔，直接使用
—
128
STRIPS
2.标准品1：
500IU/ml（IgE，人），直接使用
红色，
颜色随抗体浓度的降低而变浅
1
CAL1
3.标准品2：
100IU/ml（IgE，人），直接使用
1
cal2
4.标准品3：
10IU/ml（IgE，人），直接使用
1
cal3
5.标准品4:
0IU/ml（IgE，人），直接使用
1
cal4
6.阳性对照1：
（高浓度IgE，人），直接使用
深蓝
1
POSCONTRO
7.阳性对照2：
（低浓度IgE，人），直接使用
浅蓝
1
POSCONTRO
8.酶结合物：
过氧化物酶标记的抗人IgE（小
鼠），直接使用
紫色
112ml
CONJUGAL
9.样本缓冲液：
直接使用
橙色
1100ml
SAMPLEBUFF
10.清洗缓冲液：
10倍浓缩
无色
1100ml
WASHBUFFERX
11.色原/底物液：
TMB/HC2，直接使用
无色
112ml
SUBSTRAT
12.终止液：
0.5M硫酸，直接使用
无色
112ml
STOPSOLUTIO
13.产品说明书
1份
14.质控表
1张
LOT产品批号储存温度
VD体外检测未开圭寸可稳疋至
1.不同批号试剂盒内的酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液可互换。
2.定标：
采用国际参考品NIBSC75/502（NationalInstituteforBiologicalStandardsand
Control,Hertfordshire,England）定标，采用国际单位（IU）。
NIBSC75/502血清中抗体浓度
为5000IU/ml。
［储存条件及有效期］2-8°C保存，不要冰冻。
未开封前，试剂盒中各成分在有效期前均稳定有
效。
1.包被有抗原的微孔板：
自第一次开封后，抗原包被的微孔板在干燥的2-8?
C的环境中保存4个
月。
2.清洗缓冲液：
稀释后的缓冲液于2-8?
C最多可稳定4周。
［样本要求］
样本：
人血清或EDTA肝素、柠檬酸盐抗凝的血浆。
稳定性：
待测患者样本于2-8?
C可储存14天，稀释后的样本需在同一个工作日检测。
样本稀释：
患者样本用样本缓冲液1:
10稀释。
例如，可取100^1血清用900卩1样本缓冲液稀
释并使用混匀器混匀（加样枪不适合于混匀）。
注意：
标准品和对照品已经稀释，直接使用，勿需再稀释！
［检验方法］
试剂的准备和稳定性
注意：
所有试剂在使用前均应在室温（18-25?
C）平衡约30分钟。
试剂首次开封后，在无污染的
情况下，于2-8?
C保存，可稳定至所标示的有效期。
-抗原包被的微孔：
直接使用。
在外包装密封线咬合部的上端剪开保护袋，为防止板条受
潮，只有当微孔板平衡到室温后才可打开包装。
剩余板孔应立即放回保护袋并封好（保留干
燥剂）。
从第一次打开保护袋起，抗原包被的微孔可在干燥的2-8?
C的环境中保存4个月。
-标准品和对照血清：
直接使用，使用前应充分混匀。
-酶结合物：
直接使用，使用前应充分混匀。
-样本缓冲液：
直接使用。
-清洗缓冲液：
10倍浓缩。
如果浓缩清洗缓冲液中出现结晶，稀释前应加热到37?
C并充分混
匀溶解。
用干净吸管从瓶中吸取需要量的浓缩清洗缓冲液用蒸馏水1:
10稀释（1份浓缩清洗
缓冲液加9份蒸馏水）。
如：
需清洗一条微孔板条，则可取5ml浓缩清洗缓冲液用45ml蒸馏
水稀释。
稀释后的缓冲液如处理得当放置于2-8?
C可稳定4周。
-色原/底物液：
直接使用。
因内容物对光敏感，使用后应立即盖好瓶盖。
色原/底物液应为无
澄清，如果变蓝则不要使用
终止液：
直接使用
操作流程
（部分）手工操作
样本温育：
（第一步）
清洗：
按加样方案向相应微孔分别加100卩1标准品、阳性对照、阴性对照或稀释后
的样本，室温（18-25?
C）温育30分钟。
手工：
倒掉微孔板内液体，用稀释后的清洗缓冲液洗3次，每次300卩l。
自动：
用稀释后的清洗缓冲液清洗3次，每次450yL程序设定：
如TECAb洗板机可设为“OveflowModus”）。
每次清洗时缓冲液在微孔中至少保留30-60秒，然后再倒掉。
清洗后（包括
手工或自动）应将微孔板倒置在吸水纸上拍打，以去除残存的清洗液。
注意：
清洗后遗留在微孔中的残液（＞10卩l）可干扰底物反应而导致吸光度
值偏低。
清洗不充分（如清洗少于3次、清洗液太少或清洗时间太短）可能导致吸光度值偏高。
酶结合物温育:
（第二步）
清洗：
底物温育：
滴加100yl酶结合物至每一微孔，室温（18-25?
C）温育30分钟。
倒掉微孔板内液体，如上述步骤清洗。
滴加100yl色原/底物液至每一微孔，室温（18-25?
C）避光温育15分钟
（第三步）
终止反应:
以与加色原/底物液相同的速度和顺序滴加100卩1终止液至每一微孔
比色：
450nm比色，参考波长620-650nm,加完终止液后30分钟之内比色，比色前轻轻振动微孔板以使液体扩散均匀。
采用全自动分析仪完成实验
使用分析仪可实现样本稀释和实验操作的全自动化。
欧蒙公司授权的相关软件中的温育条件
可能和ELISA试剂盒说明书中的条件有轻微偏离。
不过，欧蒙AnalyzerI，AnalyzerI-2P或
Dynex公司DSX的实验条件与欧蒙ELISA产品组合的有效性已经得到验证，可索取验证文件。
也可以使用其他品牌开放式的全自动分析仪，但是组合的有效性需要用户自行确认。
加样方案
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
A
C1
P3
P11
P19
B
C2
P4
P12
P20
C
C3
P5
P13
P21
D
C4
P6
P14
P22
E
Pos1
P7
P15
P23
F
Pos2
P8
P16
P24
G
P1
P9
P17
H
P2
P10
P18
标准品（C1到C4）、阳性对照1和2（pos1和pos2）和患者样本各在一孔中温育。
每份样本复孔检测可提高实验的可靠性。
每一微孔可从板条上取下，这样可根据样本的数量选择试剂的用量，减少了试剂浪费。
阳性和阴性对照为实验可靠性的内部对照，每次实验都必须做。
［参考范围］非过敏人群中IgE浓度正常范围上限为100IU/ml（Thomas1992）。
用本检测系统检测250份献血者血清，结果几乎呈正态分布，与文献报道一致（Klink等，1990）。
［检测结果的解释］
定量检测：
分别以4份标准血清的浓度和吸光度为横、纵坐标点对点作标准曲线（线性/线性）,
根据此标准曲线求出样本中IgE的浓度。
下图仅为一典型标准曲线的示例，请不要用它来计算样
本中抗体的浓度。
如果采用自动方法判断结果，我们推荐使用三次函数插入法（cubicspline
interpolation）以获得与实际曲线最接近的结果（判断软件：
TECANEASYBaseMICROTEK:
Microwin）。
如果使用其他软件，三次函数插入法可能会产生问题。
在这种情况下，可使用
2
IgE[IU/ml]
Akima插入法（TECANeasyWINfitting）或二次多项式。
如果采用点对点线性推断法，则必须考虑到：
当IgE浓度大于100IU/ml时，测量值可能会产生微小的偏差下图仅为一典型标准曲线的示例，请不要用它来计算患者样本中抗体的浓度。
如果患者样本的吸光度超出了标准品1（500IU/ml），可报告为“〉500IU/ml”。
建议将
样本1:
40稀释后重新测定，从标准曲线计算出的数据再乘以4即为样本中抗体的浓度。
IgE在妊娠第11周开始形成，其浓度随着年龄的增加而持续升高，在6-14周岁时达到最高
值，随后开始随着年龄的增加而下降。
IgE浓度因个体、是否患过敏性疾病而变化很大，且受多种因素（年龄、性别、遗传背景、种族、吸烟）的影响。
下表是文献报导的IgE正常值范围，仅
作为参考。
每个国家、每个实验室应建立自己的不同年龄组的IgE正常范围。
年龄
正常值上限
新生儿
IU/ml
1-6月
IU/ml
7-12月
ml
1-5岁
60IU/ml
6-9岁
155IU/ml
10-15岁
199IU/ml
16岁以上
100IU/ml
［产品性能指标］
定标：
采用国际参考品NIBSC75/502（NationalInstituteforBiologicalStandardsand
Control,Hertfordshire,England）定标，采用国际单位（IU）。
NIBSC75/502血清中抗体浓度
为5000IU/ml。
每一组实验，标准血清的吸光度以及阳性对照和阴性对照血清的国际单位必须处在相应批号试剂的参考范围内，试剂盒内质控表中标示参考值。
如果对照血清的实验结果超出了靶值范围，则结果不准确，必须重做。
所用酶的活性与温度有关，如果不用恒温器，吸光度值会不同。
底物温育时室内温度（+18°C
至+25°C）越高，吸光度值越高。
温育时间不同会引起同样的差异。
但因标准品会受到同样的影响，这种差异在计算结果时会在很大程度上得到补偿。
线性范围：
通过检测系列稀释的高抗体浓度血清来研究该试剂的线性范围。
本检测系统的线性范
围为34-449IU/ml。
检出限：
最低检出限的定义为所能检出的IgE抗体的最小滴度。
本检测系统的最低检出限为
IU/ml
重复性：
通过检测3份不同抗体浓度的血清计算批内和批间的变异系数（CV以确定该试剂的重复性。
批内检测的CV基于20次检测的结果，而批间检测的CV则基于不同6天、每天4次检测的结果。
批内重复性，n=20
血清
均值（IU/ml）
CV（%
1
50
2
150
3
469
批间重复性，n=4X6
血清
均值（IU/ml）
CV（%
1
47
2
156
3
349
交叉反应：
检测系统（夹心法）的设计和所用抗体的高特异性确保了整个反应体系的高特异性。
干扰：
血红蛋白浓度为10mg/ml的溶血、甘油三脂浓度为20mg/ml的脂血、胆红素浓度为
mg/ml的黄疸对检测结果没有干扰。
特异性和灵敏度：
分别用欧蒙IgE-ELISA检测系统和PharmaciaCAP系统检测63份血清样本＜欧蒙检测系统的特异性和灵敏度为100%［注意事项］
警示：
（1）本检测试剂仅用于体外诊断。
（2）标准品和对照品的HBsAg抗HCVHIV-1和HIV-2抗体均为阴性。
但是，试剂盒中
所有组分都应被视作潜在传染源小心处理。
其中部分试剂含有毒性的叠氮钠，应避免接触皮肤。
废物处理：
患者标本、标准品、对照品和温育过的微孔板条必须作为潜在传染源处理，试剂盒中所有试剂的处理必须遵循官方规定。
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seborrhoeiedermatitisandatopicdermatits—totalandspecificIgElevels.BritishJournalofDermatology;108:
639-645（1982）
［生产企业］
生产企业名称：
欧蒙医学实验诊断股份公司
Manufacture'sname:
EUROIMMUNMedizinischeLabordiagnostikaAG
地址：
德国，吕贝克，D-23560,Seekamp31
Address:
D-23560,Lubeck,Seekamp31,Germany
电话（Tel）:
0451-5855-0传真（Fax）网址：
售后服务单位名称：
欧蒙医学诊断（中国）有限公司
100101
地址：
北京市朝阳区北辰东路8号院1号楼1908-1910室邮政编码:
电话：
010传真：
010
E-Mail网址：
［医疗器械注册证书编号］国食药监械（进）字2013第3402216号
［产品标准编号］YZB/GER1895-2013
［说明书批准及修改日期］
版本号：
EV_3840E_A_CN_C05
批准日期：
2013年6月8日
修改日期：
2014年7月2日
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