生物制药习题讲解.docx

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生物制药习题讲解

第一章

一：

填空题

1、•1.我国药物的三大药源指的是、、。

2、•2.现代生物药物已形成四大类型，包括、、、。

•3.进行药物临床试验需遵循，完成期临床后可上市。

•4.请写出下列英文缩写的中文全称：

•IFN（Interferon）、

•IL（Interleukin）、

•CSF（ColonyStimulatingFactor）、

•EPO（Erythropoietin）、

•EGF（EpidermalGrowthFactor）、

•NGF（NerveGrowthFactor）、

•Ins（Insulin）、

•SOD、

•tPA、

•FDA、

•GMP。

二、选择题：

1、以下能用重组DNA技术生产的药物为（）

A、维生素B、生长素C、肝素D、链霉素

2、下面哪一种药物属于多糖类生物药物（）

A、洛伐他汀B、干扰素C、肝素D、细胞色素C

3、能用于防治血栓的酶类药物有（）

A、SODB、胰岛素C、L-天冬酰胺酶D、尿激酶

4、下列属于多肽激素类生物药物的是（）

A、ATPB、四氢叶酸C、透明质酸D、降钙素

5、蛋白质工程技术改造的速效胰岛素机理是（）

A.将猪胰岛素B30位改造为丙氨酸，使之和人胰岛素序列一致

B.将A21位替换成甘氨酸，B链末端增加两个精氨酸，使之在pH4溶液中可溶

C.将B29位赖氨酸用长链脂肪酸修饰，改变其皮下扩散和吸收速度

D.将人胰岛素B28位与B29位氨基酸互换，使之不易形成六聚体

三、名词解释

生物药物生物制品新药基因药物

四、问答题

1.生物药物有哪些特性？

2.简述新药（新生物药物）的研发过程？

1.生物药物主要的给药方式是。

2.目前生物药物给药方式研究的热点是和。

3.蛋白质和多肽类药物非注射途径包括、、、、、和。

第二章

1.CHO细胞

2.基因工程中原核表达常用的宿主有等；常用的真核表达系统有、等。

3.大肠杆菌表达系统的缺点是不能进行，因而像EPO等基因的表达需使用表达系统。

4.分泌表达是指将目的基因嵌合在基因下游进行表达，从而使目的基因分泌到细胞周质或培养基中。

5.《中国药典》规定热原检查采用法，检查采用鲎试剂法。

6.大肠杆菌表达基因工程产物的形式有、、和。

8.用大肠杆菌作宿主表达重组DNA药物，缺点是（）

A.蛋白质表达量低B.生长慢C.产物无糖基修饰D.难以获得工程菌

9.下面表达系统为原核表达系统的是（）

A.E.coliB.毕赤酵母C.昆虫细胞D.动物细胞

10.如果用大肠杆菌作为宿主细胞，蛋白表达部位为周质，下面哪种细胞破碎的方法最佳？

（）

A.匀浆法B.超声波法C.渗透压休克法D.冻融法

基因工程蛋白质工程

基因工程制药的基本过程？

什么是蛋白质工程？

利用蛋白质工程改造生物药物的目的？

第三章

1.世界上一个抗生素产品是，第二个抗生素是。

2•发酵工业的生产水平取决于三个要素：

、和。

3•冷冻干燥过程中常用的冷冻保护剂有和。

4•微生物发酵主要的三种方式、、。

5•微生物菌种的分离和纯化可以用的方法有和。

6•目前常用的诱变剂可分为、和三大类。

7•常用的菌种保藏方法有：

、、、、、等。

1•以下可用于菌种纯化的方法有（）

•A高温灭菌B平板划线C富集培养D诱变处理

2•菌种保藏的目的及方法？

固定化酶常采用的方法可分为、、和四大类。

为什么要对酶进行化学修饰？

抗体酶

1.细胞培养根据培养细胞的种类可分为和两种方式。

2•生产用的动物细胞类型有、、、、。

3•实验室中常加的双抗是和，以防细胞污染。

4•用于动物细胞培养主要有三种培养基：

培养基、培养基和培养基。

5•在动物细胞培养过程下列几种试剂的作用：

RPMI1640，Hanks液，NaHCO3，青霉素，胰蛋白酶。

6•从生产实际来看，动物细胞的大规模培养主要可分为培养、培养和培养。

7•用于生产的工程细胞必须建立两个细胞库，即和。

8•属于人源细胞系的是（）。

ACHO-K1BWI-38CBHK-21DVero

9•在动物细胞培养过程中，要用酶对取出的动物组织进行处理。

10•细胞株干扰素

11•利用动物细胞生产生物技术药物的优、缺点？

1.植物细胞培养常用的灭菌剂有、和。

2.•植物细胞培养的培养基的主要成分包括无机盐、碳源、有机氮源、、维生素等化学成分。

3.•植物细胞培养两步法中，第一步使用培养基，第二步培养基。

第八章抗体制药

1.对鼠源性单抗进行改造的目的：

降低鼠源性单克隆抗体分子的免疫原性、降低相对分子量，增加组织通透性。

2.单克隆抗体药物经历了鼠源性抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体的发展，抗体药物向低抗原性、高特异性方向发展。

3.在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，其目的不同，第一次是通过筛选获得   杂交瘤细胞   ，第二次是通过筛选获得 能产生所需抗体的杂交瘤细胞 。

4.“生物导弹”是指（　A）

A.单克隆抗体                           B.杂交瘤细胞     

C.能产生特定抗体的B淋巴细胞　 D.在单抗上连接抗癌药物

5.关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是 （　D）

A.可以制成诊断盒，用于疾病的诊断   

B.可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗

C.可以利用基因工程技术生产         

D.可以在生物体内生产，不能在体外生产

6.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （D　）

A.B淋巴细胞    B.T淋巴细胞    

C.骨髓瘤细胞   D.杂交瘤细胞

7.人-鼠嵌合抗体

人-鼠嵌合抗体是将鼠源单抗的可变区与人抗体的恒定区融合而得到的抗体。

特点：

保持鼠源性单克隆抗体的抗原结合的特异性；与鼠单抗相比，对人的免疫原性大大降低，利于在人体内应用，所以目前已制备出上百种抗各种抗原（包括肿瘤相关抗原）的嵌合抗体。

8.与单克隆抗体相比，基因工程抗体有何优点？

1.通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应；

2.基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，进入病灶的核心部位；

3.根据治疗的需要，制备新型抗体；

4.可以采用原核细胞、真核细胞和植物等多种表达方式，大量表达抗体分子，大大降低生产成本。

9.抗血清制备过程中为何用胃酶消化？

10.噬菌体抗体库技术的特点？

1.模拟天然全套抗体库

（1）抗体文库可以达到1011库容，能包含B细胞全部克隆。

（2）建库的外源基因来自人外周血、骨髓或脾脏的淋巴细胞提取的mRNA反转录形成的cDNA扩增，这是人体多克隆细胞的总mRNA。

（3）使用的通用引物采自多个人体，具有人的种属普遍性。

（4）VH和VL随机重组增加抗体的多样性。

2.避开了人工免疫和杂交瘤技术

由于抗体库的大容量和极高的筛选效率，使得可以调出任意抗体基因，用基因工程方法制备抗体，因而能免除使用人工免疫动物和细胞融合技术。

3.可获得高亲和力的人源化抗体

在噬菌体抗体库中，VH和VL基因的随机重组模拟了体内抗体亲和力成熟过程，所用抗体基因又都是来自人体，因此产生的抗体必然都是高亲和力的。

11.多抗、单抗及基因工程抗体的比较

1.多克隆抗体：

由多个B细胞克隆产生的，针对多种抗原决定簇的混合抗体。

•获得的主要途径：

动物免疫血清；恢复期或预防接种人群。

•优点：

作用全面—中和抗原、免疫调理、CDC、ADCC等作用；来源广泛、制备容易。

•缺点：

特异性不高、易发生超敏反应—应用受限

2.单克隆抗体：

由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体。

•特点：

理化性质、分子结构、遗传标志、生物学特性等完全相同的均一性抗体

•优点：

结构均一、纯度高、特异性强、效价高、血清交叉反应少/无，制备成本低。

•缺点：

鼠源性，对人具有较强的免疫原性。

3.基因工程抗体：

采用基因工程方法制备的抗体。

•特点：

既保持单克隆抗体的均一性，特异性强的优点，又能克服鼠源性的不足。

•优点：

人源化或全人源抗体均一性强，可工业化生产。

•缺点：

亲和力弱，效价不高。

第九章生化制药工艺技术基础

•如果想要从生物材料中提取辅酶Q10，应该选取下面哪一种动物脏器（D）

A胰脏B肝脏C小肠D心脏

•由于目的蛋白质和杂蛋白分子量差别较大，拟根据分子量大小分离纯化并获得目的蛋白质，可采用（C）

ASDS凝胶电泳B盐析法C凝胶过滤D吸附层析

•分离纯化早期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用（A）

A分离量大分辨率低的方法B分离量小分辨率低的方法

C分离量小分辨率高的方法D各种方法都试验一下，根据试验结果确定

第十章生化药物制造工艺

•氨基酸药物分为个别氨基酸制剂和复方氨基酸制剂两类。

•目前构成天然蛋白质的20种氨基酸的生产方法有蛋白质水解法、发酵法、酶转化法、化学合成法。

•酶转化法与直接发酵法生产氨基酸的反应本质相同，均属酶转化反应。

但两者相比，酶转化法所需设备及工艺简单，产物浓度高，转化率及生产效率高，生产周期短，副产物少，酶的利用率也高。

•目前国内外生产氨基酸输液组方中含5％山梨醇或木糖醇，作用是以补充能量、促进氨基酸的吸收和利用；半胱氨酸作为稳定剂。

•氨基酸有哪些生产方法？

各有什么主要特点？

•答：

氨基酸的生产方法有四种：

蛋白质水解法，发酵法，酶转化法，化学合成法。

•

（1）蛋白质水解法：

以毛发、血粉及废蚕丝等蛋白质为原料，通过酸、碱或酶水解成多种氨基酸混合物，经分离纯化获得各种药用氨基酸的方法称为水解法。

水解法生产氨基酸的主要过程为水解、分离和结晶精制三个步骤。

本法优点是原料来源丰富，投产比较容易。

缺点是产量低，成本高。

目前用水解法生产的氨基酸有L-胱氨酸、L-半胱氨酸、L-亮氨酸、L-酪氨酸等。

•

（2）发酵法：

发酵法是指以糖为碳源、以氨或尿素为氮源，通过微生物的发酵繁殖直接生产氨基酸；或是利用菌体的酶系，加入前体物质合成氨基酸的方法。

微生物利用碳源、氮源及盐类几乎可合成所有氨基酸。

目前绝大部分氨基酸皆可通过发酵法生产，优点是直接生产L-型氨基酸；其缺点是产物浓度低，设备投资大，工艺管理要求严格，生产周期长，成本高。

•（3）酶转化法：

酶转化法亦称为酶工程技术，实际上是在特定酶的作用下使某些化合物转化成相应氨基酸的技术。

基本过程是以化学合成的、生物合成的或天然存在的氨基酸前体为原料，将含特定酶的微生物、植物或动物细胞进行固定化处理，通过酶促反应制备氨基酸。

酶工程法与直接发酵法生产氨基酸的反应本质相同，皆属酶转化反应，但前者为单酶或多酶的高密度转化，而后者为多酶低密度转化。

酶工程技术工艺简单，产物浓度高，转化率及生产效率较高，副产物少，固定化酶或细胞可进行连续操作，节省能源和劳务，并可长期反复使用。

•（4）化学合成法：

以α-卤代羧酸、醛类、甘氨酸衍生物、异氰酸盐、乙酰氨基丙二酸二乙酯、卤代烃、α-酮酸及某些氨基酸为原料，经氨解、水解、缩合、取代及氢化还原等化学反应合成α-氨基酸的方法称为化学合成法。

一般合成法包括卤代酸水解法、氰胺水解法、乙酰氨基丙二酸二乙酯法、异氰酸酯（盐）合成法及醛缩合法等；产物皆为DL-型氨基酸混合物。

不对称合成法包括直接合成、α-酮酸反应及不对称催化加氢等方法；产物为L-型氨基酸。

优点：

可采用多种原料和多种工艺路线，以石油化工产品为原料时，成本较低，生产规模大，适合工业化生产。

缺点：

生产工艺复杂。

•

•简述氨基酸输液的定义，氨基酸输液的组方原理和原则，常用的氨基酸输液有哪几种类型？

（1）定义：

多种结晶L-氨基酸依特定比例混合制成的静脉内输注液称为氨基酸输液。

（氨基酸输液可直接注入进食不足者的血液中，促进蛋白质、酶及肽类激素的合成，提高血浆蛋白浓度与组织蛋白含量，维持氮平衡，调节肌体正常代谢。

）

•

（2）组方原理和原则：

种优良的氨基酸输液注入人体后，各种氨基酸能得到最有效地利用，其组成平衡，使临床症状得到改善，体重增加而无代谢并发症，血浆游离的氨基酸谱无显著变化。

（目前国内外生产氨基酸输液组方中必须含八种必需氨基酸和两种半必需氨基酸，所有氨基酸均为L-型；另外，组方中尚需含5％山梨醇或木糖醇，以补充能量、促进氨基酸的吸收和利用；同时加半胱氨酸作为稳定剂，由此方能构成优良的氨基酸输液。

）

•（3）类型：

•目前临床使用的胰岛素来源有动物胰脏来源、半合成胰岛素、重组DNA技术生产胰岛素。

•下列属于多肽药物的是（A）

•A降钙素B干扰素 C白蛋白 DIgG

•下列药物分类不属于蛋白质药物的是（C）

•A白细胞介素B肿瘤坏死因子C甲状腺多肽激素D胰岛素

•酶促半合成人胰岛素

经胰蛋白酶的转酰胺作用，将猪胰岛素转化为人胰岛素B30。

再用离子交换层析纯化，可得到高纯度人胰岛素。

•酸醇提取法制备胰岛素的生产工艺要点？

离体后，蛋白水解酶类能分解胰岛素使之失活。

因此，要立即深冻，先在-30℃以下急冻后转入-20℃保存备用。

如用液氮或干冰速冻，效果更好。

在胰脏中，胰尾部分胰岛素含量较高，如单独使用可提高收率10%。

结晶胰岛素需进一步纯化。

具有抗肿瘤作用的酶（C）

•A溶菌酶B胰蛋白酶 

•C 天冬酰胺酶D细胞色素C

用猪心提取细胞色素C的工艺要点？

细胞色素C存在于自然界中一切生物细胞里，其含量与组织的活动强度成正比。

以哺乳动物的心肌、鸟类的胸肌和昆虫的翼肌含量最多，肝、肾次之，皮肤和肺中最少。

以下为实验报告补充，仅供参考：

尽量除去猪心非心肌组织，脂肪、血管、韧带和积血。

提取、中和步骤要注意调pH。

吸附、洗脱步骤应严格掌握流速。

盐析时，加入固体硫酸铵，要边加边搅拌，不要一次快速加入。

逐滴加入三氯乙酸溶液，搅匀，加完后，尽快离心。

透析袋使用前要检漏。

•下列属于多糖药物的是（C）

•A干扰素B胰岛素C肝素D胆固醇

•大部分黏多糖与蛋白质结合于细胞中，因此需用酶解法或碱解法使糖-蛋白质间的结合键断裂，促使多糖释放。

•提取法制备辅酶Q10的要点？

•辅酶Q10又称为泛醌Q10，为黄色或淡橙黄色、无臭、无味结晶性粉末，易溶于氯仿、苯、四氯化碳，溶于丙酮、乙醚、石油醚；微溶于乙醇，不溶于水和甲醇。

熔点49℃。

•

以下为实验报告补充，仅供参考：

在醇碱皂化时，由于乙醇存在，长时间的皂化，讲导致CoQ10环上甲氧基与乙醇中的乙氧基换位，生成单或双氧基衍生物，因此为了避免这些杂质的产生，皂化限制在30min内，皂化后，迅速冷却。

石油醚较易挥发，萃取过程要注意放气。

制备过程要注意闭光。

洗脱过程中需严格控制流速。

制备过程中，注意采集样品，以备检测。

第十一章微生物药物制造工艺

•青霉素属于β-内酰胺类抗生素，它的性质很不稳定，用溶剂萃取法分离时，整个提炼过程应在低温、快速、严格控制pH值进行。

•链霉素是氨基糖苷类抗生素；红霉素大环内酯类抗生素。

•克拉维酸是微生物产生的（B）

•A.HMG-CoA还原酶抑制剂B.β-内酰胺酶抑制剂

•C.氨基糖苷类抗生素D.大环内酯类抗生素

•环孢菌素A是微生物产生的（B）

•A.HMG-CoA还原酶抑制剂B.免疫抑制剂

•C.氨基糖苷类抗生素D.大环内酯类抗生素

•目前分离的10000多种抗生素，超过一半产自（B）

•A真菌B放线菌C细菌D病毒

•属于生物次级代谢产物的药物是（  B ）

A维生素B抗生素C核苷酸D氨基酸。

•名词解释：

抗生素：

是微生物在其生命活动过程中所产生的（或由其他方法获得的），能在低微浓度下有选择地抑制或影响它种生物功能的有机物质。

•

•青霉素为弱酸性抗生素，在水溶液中稳定性较差，且其稳定性随温度上升而下降，请写出将该抗生素从发酵液中分离制备的方法，写出选择依据、主要工艺（使用两次PPB各有什么目的）及操作要点。

（1）制备方法：

用溶剂萃取法分离时，整个提炼过程应在低温、快速、严格控制pH值下进行

（2）选择依据：

是一大类天然或半合成的抗生素组。

所有的青霉素类都具有6-氨基青霉烷酸核心环结构，但侧链结构各不相同。

作用于繁殖期细菌细胞壁的合成，毒性低、杀菌活力高、选择性强、抗菌谱广、体内分布好，临床应用广泛。

（3）主要工艺及操作要点：

1）发酵液预处理和过滤

•放罐后，首先要冷却

•目前采用鼓式过滤及板框过滤，加助滤剂。

酸化时pH应控制得高些（pH4～5），作为助滤剂的发酵液体积一般不超过该发酵液体积的1/3，再加些絮凝剂如十五烷基溴化吡啶（PPB）等，进行二次过滤。

•随着高效高速萃取离心机的出现，如德国Westfalia公司出品的倾析器，可省去过滤工序，比用板框过滤除去菌丝后再提取的收率高出2～3%。

2）影响青霉素提取的主要因素

青霉素提取效果除了已选定适当的有机溶媒，破乳化剂和离心分离设备外，还与下列主要因素有关：

•pH值：

一般从滤液萃取到醋酸丁酯时，pH选择2.0～2.5，而从丁酯反萃取到水相时，pH选择6.8～7.2之间。

•温度：

要求提取在低温（10℃以下）条件下进行较为有利。

在设备上要考虑用冷盐水进行冷却，以降低温度，特别是酸化岗位，温度要求更低些。

•时间：

酸化时速度应快些。

碱化时速度可放慢些，因青霉素在中性条件下半衰期要长些，破坏要缓和些，故以能分离得清为原则。

•萃取方式和浓缩比：

目前生产上采用二级逆流萃取方式。

浓缩比的选择也很重要，因为丁酯的用量与收率和质量都有关系。

丁酯用量为滤液体积的25～30%时，色素相对含量低，浓缩比为1.5～2.5倍。