柱色谱分离染料实验报告.docx
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柱色谱分离染料实验报告
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柱色谱分离染料实验报告
篇一：
柱色谱实验报告
柱色谱分离实验报告篇二：
色谱实验报告色谱实验报告项目一：
气相色谱流出曲线的研究一：
实验目的
1、2、3、
掌握气相色谱仪的基本结构及工作原理理解色谱流出曲线中各参数的表示方法掌握气
相色谱中定性、定量分析方法
二、实验原理
气相色谱的固定相是涂布在载体表面的固定液，试样气体由载气携带进入色谱柱，与固
定液接触时，气相中各组分便溶解在固定液中。
随着载气的不断通入，被溶解的组分又从固
定液中挥发出来，挥发出的组分随载气向前移动时又再次被固定液溶解。
由于各组分在固定
液中的溶解能力不同，随着载气的流动，各组分在两相间经过反复的溶解-挥发过程，经过一
段时间，最终实现彼此分离。
色谱图是指被测组分从进样开始，经色谱柱分离到组分全部流过检测器后，所产生的响
应信号随时间分布的图像。
色谱图上有一组色谱峰，每每个峰代表试样中的一个组分。
色谱
流出曲线是以组分流出色谱柱的时间或载气流出的体积为横坐标，以检测器对各组分的电信
号响应值为纵坐标的一条曲线。
三、仪器与试剂1、仪器气相色谱仪2、试剂乙醇、正丁
醇
四、实验步骤1、调试气相色谱仪2、分别进行进样
3、进乙醇和正丁醇的混合物样品，分别记录保留时间五、实验记录
1、色谱条件:
50m柱经：
320μm固定液：
聚乙二醇载气：
氮气检测器类型：
fid检测器温度：
150℃柱温：
95℃气化室温度：
165℃气体流量：
载气30ml／min2、色谱图参
数六：
实验结果分析
从实验结果所占百分比可以看出该实验出峰效果较明显，乙醇先出峰，正丁醇后出峰。
在做实验时我们应注意一些问题，比如说乙醇和正丁醇要按一定的比例来混合，柱温要设置
合理，最低要高于正丁醇的沸点，也不能过高，否则会使组分不易分开；过低封效果会不明显。
另外进样时要
快、准、稳，避免出现拖尾现象。
项目二：
白酒中甲醇含量的测定
一、实验目的1、2、
掌握用外标法进行色谱定量分析的方法。
了解氢火焰离子检测器的性能和操作方法。
二、实验原理
气相色谱法是一种分离效果好，分离速度快，灵敏度高，操作简单，应用范围广的分析
方法，它是以气体为流动相，当气体携带着欲分离的混合物流经色谱柱中的固定相时，由于
混合物中各组分的性质不同，它们与固定相的作用力大小不同，所以组分在流动相与固定相
之间的分配系数不同，经过多次反复分配之后，各组分在固定相中滞留的时间不同，与固定
相作用力小的先流出色谱柱，与固定相作用力大的后流出色谱柱，从而实现分离。
外标法是在一定的操作条件下，用纯组分或已知浓度的标准溶液配制一系列不同含量的
标准溶液，准确进样，根据色谱图中组分的峰面积（或峰高）对组分含量作标准曲线。
在相
同操作条件下，依据样品说的峰面积（或峰高），从标准曲线上查出其相应含量。
白酒中甲
醇含量的测定，以氢火焰离子化检测器利用醇类物质在氢火焰中的化学电离进行检测，根据
甲醇的色谱峰高与标准曲线比较进行定量。
三、仪器与试剂1、仪器
气相色谱仪，10μl微量注射器1支2、试剂
甲醇（色谱醇），60%乙醇水溶液（不含甲醇）。
四、实验步骤1、色谱柱的准备
将内径为4mm、长为2m的玻璃或不锈钢色谱柱洗净，烘干。
采用gdx—102（60~80目）
作为固定相制备色谱柱。
2、色谱操作条件：
检测器fid；气化室温度200℃；检测室温度150℃；采用程序升温，
初始柱温为60℃，保持时间为1min，此后每1min升高20℃直至升至100℃。
3、甲醇标准
溶液的配制
以60%乙醇水溶液为溶剂，配制浓度分别为0.1%、0.3%、0.5%、0.7%的甲醇高标准溶液。
4、甲醇含量的色谱测定
用微量注射器分别吸取10μl各甲醇标准溶液及试样溶液注入色谱仪，获得色谱图，以
保留时间作为对照定性，确定甲醇色谱峰。
五：
仪器的关机与清洗六数据处理及计算结果
1、
根据试样溶液色谱图中甲醇的峰面积（或峰高），查出试样溶液中甲醇的含量（μg/100ml）。
篇三：
实验_柱色谱实验10柱色谱分离实验报告--亚甲基蓝与荧光黄的分离一实验目的
?
学习并掌握色谱法的原理及其应用。
?
学习并掌握柱色谱的实验操作技能。
二实验原理
色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。
色谱
法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其
它亲和作用性能的差异，混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而
将各组分分开。
色谱分离法的分类
（按操作条件的不同）色谱分离法的分类
（按组分在固定相中的作用原理不同）色谱法的应用
色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几个方面：
（1）分离混合物
（2）精致提纯化合物
（3）利用比移值（rf）鉴定化合物
（4）跟踪反应进程
柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类。
前者常用氧化铝或硅胶为吸附剂。
后者以硅
胶，硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收大量的液体为固定相。
当加入的洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流
动，继续洗脱时，吸附能力弱的组分随溶剂首先流出。
在连续洗脱过程中，不同组分或不同
色带就能分别收集，从而达到分离纯化的目的。
1吸附剂
常用的吸附剂：
氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭或纤维素粉。
选择吸附剂的首
要条件：
不与被分离物或展开剂发生化学反应。
吸附能力与以下几点有关：
（1）吸附剂颗粒大小
（2）吸附剂含水量
柱色谱
2溶剂
通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。
先将带分离的样品溶
于尽量少的非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依次洗脱。
常用洗脱剂的极性：
石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜
丙酮＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸三实验步骤及注意事项
（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花，注意松紧要适度。
然后在棉花
上铺一层粗硅胶或石英砂。
（2）将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内加适量70%乙醇溶液，打开活塞，赶走气泡。
（3）再向柱中倒入适量70%乙醇溶液，打开活塞，控制滴速为1滴／秒，用小锥型瓶承
接，同时通过漏斗慢慢装入5gal2o3，使其逐渐沉入底部。
【在装吸附剂的过程中，应用质软的物体如试管夹、吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附
剂装填紧密，排除气泡。
最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面。
】
（4）加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直径大小合适的小滤纸。
（5）当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二通活塞，立即用移液管加入1ml亚甲基蓝和
荧光黄的乙醇混合液，尽量免待分离混合液粘附在柱的内壁上。
（6）打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，向柱内加入70%
乙醇，打开二通活塞进行洗脱。
（7）用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。
【洗脱时切勿使溶剂流干！
】
（8）当蓝色溶液收集完后，等柱内的70%乙醇溶液恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，
加入适量2%氨水作为洗脱剂。
打开二通活塞收集黄绿色的荧光黄溶液，直到其完全被洗出。
（9）用量筒分别量取所分离出来的亚甲基蓝和荧光黄溶液的体积后，倒入指定的回收瓶
中。
（10）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从活塞口向管内挤压空
气，将吸附剂从柱顶挤压出。
使用过的吸附剂倒入垃圾桶里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽。
四操作注意事项
特别注意：
有机溶剂对身体特有害别是心肺；肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行！
！
！
柱色谱是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望对
大家能有所帮助。
1、柱子可以分为：
加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集
的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是
时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使
用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱
子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气
（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从
尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类
似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给
鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太
快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
2、关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上
样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试
想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶
剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采
用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么
了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一
般在1：
5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
如果所需组
分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅
胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大
柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
3、关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品可以湿柱，也可以干柱。
不
过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产
品分解，毕竟要分离的是敏感的东东，小心不为过。
这个我分离的次数很少，一般都是通过
紫外灯查看的。
4、关于湿法、干法上样湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，
不然溶剂就成了淋洗剂了。
有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会
出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果
不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性
差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如dmf,dmso等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱
尾），这时就必须用干法上柱了。
样品和硅胶的量有一种说法是1：
1，我觉得是越少越好，
但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。
溶剂
的选择。
当然是最便宜，最安全，最环保的了。
所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。
文献中有
写用正己烷的，太贵了。
二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，
所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。
甲醇，据说能溶解部分
的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。
其
他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。
由于某些原因，用到的淋洗剂多是大
包装的（便宜嘛），我们这里是用2.5l的塑料桶装的。
另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，
一方面环保，另一方面也能节省部分经费，当然比较忙的时候我是不回收的，太费事了。
这
里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的
不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大
了。
在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一
起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了。
5、关于操作问题
5.1装柱。
柱子下面的活塞可以采用四氟节门的。
干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子
装实就行。
装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品
就会从一侧斜着下来）。
书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太
大的影响，一加压气泡就全下来了。
当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。
但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！
用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再
加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。
加入
淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了），再加压，
这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。
5.3淋洗剂的选择。
感觉上要使所需点在rf在0.3左右的比较好。
不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱
子就用那种极性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多
次爬板的状态，可以通过公式的比较：
0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次
方或四次方大。
另外，一般你的物质酸性的话淋洗剂里面要加入几滴乙酸，碱性的话通常使
用氨水或是三乙胺等弱碱。
5.4样品的收集。
用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。
所以如果样品与硅胶的吸附比
较强的话，就不容易流出。
这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。
这时可以采用
氧化铝作固定相。
5.5最后的处理。
柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送
分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，
必要时进行重结晶。
另外，再过柱的时候，有时会出现气泡，一是和使用的溶剂有关，如果是易挥发的溶剂，
如乙醚、二氯甲烷等，在室温稍高的情况下，很容易出现这种现象，因此，在室温高的时候，
可以选择沸点较高，挥发相对小的溶剂。
还有，使用混合溶剂时，使用的两种溶剂的沸点应
该相差不大，如：
乙酸乙酯和石油醚（60~90）,而乙醚却要选择30－60的石油醚。
二是：
不论
是用带砂板的还是塞棉花的，在装柱之前，都要将空气用加压的方法将空气排干，这样就可
避免柱中有空气！
最后过柱子需要耐心，不要着急。
篇四：
柱色谱分离实验报告==柱色谱分离实验报告篇五：
柱色谱和薄层色谱----预习报告预习报告
一、实验名称:
薄层色谱和柱色谱
二、实验目的：
1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用
2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。
3、掌握如何正确的配置展开剂
三、实验原理：
色谱法的基本原理，是利用混合物各组分在固定相和流动相中分配平衡常数的差异。
简单地说就是，当流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或溶解性能的不同，使吸附力较弱或溶解度较小的组分在固定相中移动的速度较快，在多次反复平衡过程中导致各组分在固定相中形成了分离的“色带”，从而得到分离。
四、主要试剂规格及用量
1%偶氮苯的甲苯溶液，1%苏丹ⅲ的甲苯溶液，1%的羧甲基纤维素钠（cmc）水溶液，硅胶g，立即比为9:
1的甲苯-乙酸乙酯。
五、实验装置图（见实验记录本）
篇二：
实验3柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因
实验三、柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因
自我实践实验：
旋光度的测定
一、目的
1．了解柱色谱和薄层色谱的原理
2．练习柱色谱和薄层色谱的操作
二、原理（略，见实验指导。
p72-74,p53-60）
三、实验仪器
色谱柱，50ml烧杯（二只），10ml量筒，短颈漏斗，长颈滴管（二支），铁架台，烧瓶夹，
双联球，高效薄层板（每组二块），层析缸，毛细管，镊子，紫外分析仪。
四、药品
石英砂，氧化铝，95%乙醇，无水乙醇，混合染料（甲基橙、亚甲基蓝），0.2mol/L盐酸，
咖啡因，阿斯匹林。
1,2-二氯乙烷/乙酸（12:
1）展开剂。
五、实验操作步骤
（一）甲基橙和亚甲基蓝两种染料的分离
1.装柱
加少量石英砂覆盖加约6克氧化铝固定色谱柱用双联球压实打开活塞2.加样
加6滴混合染料打开活塞加少量乙醇淋洗（重复2-3次）
（用长滴管）（短滴管约1管）
3.洗脱
用乙醇洗脱
（约10mL）
加少量0.2mol/L盐酸用0.2mol/L盐酸洗脱待蓝色带完全洗脱后淋洗（重复2-3次）（短滴管约1管）（约25mL）
小烧杯接收，直到红色物质全部洗出，速度慢用双联球压出。
（速度慢可用双联球压出）直到蓝色物质全部洗出小烧杯接收。
4.注意事项：
（1）柱要装的均匀，石英砂少量即可（约2-3毫米厚度）
（2）缓慢加样，尽量不要碰在柱壁上。
（3）洗脱时，洗脱剂加入速度要慢，每次加入的量不要太多
（二）薄层色谱
1.点样距薄板一端约0.5cm处，用毛细管在一块薄层板上等距离分别点上乙酰水杨酸标样、咖啡因标样和阿加片提取液（乙酰水杨酸与咖啡因的混合样液）。
如图所示
2.展开在层析缸中加入约5ml展开溶剂（1,2-二氯乙烷/乙酸（12:
1））后，将薄板放入层析缸中，展开剂液面不得超过点样线。
当溶剂前缘距薄板顶端0.5cm时，取出薄板，作好标记，放在空气中自然晾干。
3.检出在紫外分析仪上，观察荧光的斑点，并描出斑点的位置，计算各样品的Rf值。
例：
4.注意事项：
（1）用毛细管吸取少量的样品（2-3毫米液高），在薄板上轻轻接触点样。
（2）取放薄板时，用镊子轻轻夹取。
薄板放入层析缸时，不要让展开剂液面超过点样线。
自我实践实验：
旋光度的测定
一、目的
1．了解旋光仪的基本原理，掌握旋光仪的使用方法。
2．学习比旋光度的计算方法及观察葡萄糖的变旋光现象。
二、原理（略，见实验指导。
p75-81）
三、实验仪器
wxg—4型旋光仪。
20cm长的测量管。
四、药品
5％葡萄糖溶液。
五、实验操作步骤
（一）零点的测定
1．接通电源，开启开关，待钠光灯稳定后（约5分钟），即可开始测量。
2．取2dm长的测定管，装满蒸馏水，使液面凸出管口，将小玻片沿管口边缘平推
盖好，不能带入气泡，然后垫上橡皮圈，旋上螺帽，放入旋光仪的管槽中，盖
好盖子。
校正接目镜的焦距，使视野中清晰。
旋转手轮（:
柱色谱分离染料实验报告），调整检偏镜刻度盘，
使视场中三分视场的明暗程度一致，读取刻度盘上所示的刻度，反复操作三次，
取其平均值作为零点。
（二）读数方法
刻度盘分为360等分，并有固定游标分为20等分。
读数时先看游标的零点
落在刻度盘上的位置，记下整数值，再看他的刻度线与刻度盘上的刻度划线相
重合的点，记下数据为小数以后的数据。
当偏振镜旋转的方向为顺时针时，被
测物为右旋性，读数用“＋”号表示；若为逆时针，则被测物为左旋性，读数
用“－”表示。
（三）葡萄糖溶液旋光度的测定
1．装管
到去测定管中的蒸馏水，用少量待测的葡萄糖溶液洗涤2～3次，装满待测液，
放入旋光仪中。
2．读数
旋转手轮，使三分视场的明亮度重新一致，读取刻度盘上的读数。
重复操作二
次，取平均值。
再减去或加上零位偏差，即为葡萄糖溶液的实际旋光度。
（四）注意事项：
1．葡萄糖溶液配好后，必须放置数小时，待其达到平衡后才能使用。
2．测定管使用后应立即洗净、晾干，以免过久打不开或发霉。
篇三：
实验_柱色谱
实验10柱色谱分离实验报告
--亚甲基蓝与荧光黄的分离
一实验目的
?
学习并掌握色谱法的原理及其应用。
?
学习并掌握柱色谱的实验操作技能。
二实验原理
色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。
色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。
色谱分离法的分类
（按操作条件的不同）
色谱分离法的分类
（按组分在固定相中的作用原理不同）
色谱法的应用
色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几个方面：
（1）分离混合物
（2）精致提纯化合物
（3）利用比移值（Rf）鉴定化合物
（4）跟踪反应进程
柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类。
前者常用氧化铝或硅胶为吸附剂。
后者以硅胶，硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收大量的液体为固定相。
当加入的洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流动，继续洗脱时，吸附能力弱的组分随溶剂首先流出。
在连续洗脱过程中，不同组分或不同色带就能分别收集，从而达到分离纯化的目的。
1吸附剂
常用的吸附剂：
氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭或纤维素粉。
选择吸附剂的首要条件：
不与被分离物或展开剂发生化学反应。
吸附能力与以下几点有关：
（1）吸附剂颗粒大小
（2）吸附剂含水量
柱色谱
2溶剂
通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。
先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依次洗脱。
常用洗脱剂的极性：
石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸
三实验步骤及注意事项
（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花，注意松紧要适度。
然后在棉花上铺一层粗硅胶或石英砂。
（2）将色谱柱垂直固定在铁架台上，往柱内加适量70%乙醇溶液，打开活塞，赶走气泡。
（3）再向柱中倒入适量70%乙醇溶液，打开活塞，控制滴速为1滴／秒，用小锥型瓶承接，同时通过漏斗慢慢装入5gAl2o3，使其逐渐沉入底部。
【在装吸附剂的过程中，应用质软的物体如试管夹、吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除气泡。
最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面。
】
（4）加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直径大小合适的小滤纸。
（5）当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二通活塞，立即用移液管加入1mL亚甲基蓝和荧光黄的乙醇混合液，尽量免待分离混合液粘附在柱的内壁上。
（6）打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，向柱内加入70%乙醇，打开二通活塞进行洗脱。
（7）用锥形瓶收集蓝色的亚甲基蓝溶液。
【洗脱时切勿使溶剂流干！
】
（8）当蓝色溶液收集完后，等柱内的70%乙醇溶液恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，加入适
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