时间分辨技术的基本知识全部整合资料.docx

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时间分辨技术的基本知识全部整合资料

时间分辨技术的原理

目前最先进的免疫检测技术：

1、时间分辨原理：

用三价稀土离子及其鳌合剂作为示踪物，代替荧光物质、同位素或酶，标记蛋白质、多胎、激素、抗体、核酸探针或生物流行性细胞，当反应体系发生后，用时间分辨仪器测定最后产物中荧光强度。

根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析之目的。

2、时间分辨原子标记物的特点：

●发射光和激发光有较大的STOKES位移——高特异性

●长寿命荧光，降低其他物质的荧光干扰——高灵敏度

●半衰期长达几十万年，试剂受干扰小——高稳定性

原子标记与大分子标记物的对比

原子标记物

大分子标记物

标记位点

多个,可达20个

只有1个

对被标记物蛋白活性的影响

影响小,基本无影响

影响大,经常影响蛋白活性

对被标记物空间结构的影响

无影响,保证稳定性

影响大,造成试剂的不稳定

受环境因素的影响

影响小

影响大,温度影响

3、波长分辨：

●标记离子的荧光激发光波长范围较宽，发射光光谱范围较窄，是类线光谱，有利于降低本底荧光强度，提高分辨率。

●激发与发射光之间有一个较大的STOKES位移，有利于排除非特异荧光的干扰，增强测量的特异性。

4、时间分辨：

●标记离子螯合物产生的荧光强度高，寿命长，有利于消除样品及环境中荧光物质对检测结果的影响。

●每一秒名检测样品1000次，取其中不受干扰的400次的均值作为测定值，有利于提高检测的准确性。

时间分辨技术取代酶免、放免是免疫检测技术发展的必然趋势！

RIA（放免）

●放射性（125I），对环境和身体的危害，已经为重视环保的国家逐步取消，如整个欧洲仅尚存几个放免试验室。

●125I半衰期短，导致试剂的有效期短，需每次定标，造成很大的浪费。

●由于标记物（125I）的不断变化，带来药盒批间、批内较大的变异，标准曲线无法保存备用。

ELESA（酶免）

●灵敏度、重复性不及放免，易造成漏检和假阳性。

●酶的纯度和反应过程容易受环境因素影响，导致稳定性、重复性不好。

与其它技术的相对优势：

（1）、是现有的免疫检测方法中灵敏度最高的

（2）、是现有的免疫检测方法中稳定性最好的

（3）、多标记检测是目前所有免疫检测技术中独一无二的

TRF技术与电化学发光的比较

时间分辨荧光

电化学发光

标记物

四种原子:

Eu,Sm,Te,Dy

一种原子:

钌

多标记技术

有

无

科研项目

能（1000多种科研项目）

无

试剂种类

58种临床,24种科研,共82种

40种临床,无科研

试剂价格

低

高

TRF与化学发光的比较

时间分辨荧光

化学发光

发光效率

95%

1%

重复检测

可无数次重复

不可重复

本底噪声

零本底

干扰大

灵敏级数

10-19

10-15　

标记物

原子

大分子化合物

标记位点

每个抗体可达20个

1个

标准曲线

稳定达一年以上

稳定2到4周

多标记

有,最多可达四标记

无

科研开发

有

无

时间分辨荧光免疫定量分析简介

时间分辨荧光分析（TimeresolvedFluoroimmunoassay,TRFIA）是一种非同位素免疫分析技术，它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。

解离增强镧元素荧光免疫分析是时间分辨荧光免疫分析中的一种。

它用具有双功能基团结构的螯合剂，使其一端与铕（Eu）连接，另一端与抗体/抗原分子上的自由氨基连接，形成EU标记的抗体/抗原，经过免疫反应之后生成免疫复合物。

由于这种复合物在水中的荧光强度非常弱，因此加入一种增强剂，使Eu3+从复合物上解离下来，自由Eu3+同增强剂中的另一种螯合剂螯形成一种胶态分子团，这种分子团在紫外光的激发下能发出很强的荧光，信号增强了百万倍。

因为这种分析方法使用了解离增强步骤，因此称为解离增强镧系元素荧光免疫分析。

乙肝病毒（HBV）标记物的检测方法常用测定乙肝病毒的抗原、抗体标记物，由60年代末70年代初的琼脂扩撒法，依次发展为血凝法→酶联免疫吸附（ELISA）、同位素免疫标记（RIA）→化学发光免疫分析、生物发光、电化学发光免疫标记和80年代中建立的稀土离子荧光标记（时间分辨荧光免疫分析）等不同的检测方法。

随着科学的发展和检验技术的进步，其方法每发展一步，乙肝标记物检出的灵敏度和准确性都得到不同的提高。

时间分辨荧光免疫分析（TRF）为近年新研制成功的用三价稀土离子作为示踪物，以单克隆抗体包被支持物与样品中抗原反应，再加入有铕（EU）标记的抗体，进行反应检测，可大大降低一般同位素和荧光标记受环境干扰缺点，提高了检测的灵敏度和准性，该TRF法检测乙肝病毒标记物较其他方法灵敏度高、特异性好，干扰因素少，TRF为目前检测乙肝病毒标记物最理想的方法。

TRF定量检测乙肝病毒“两对半”为临床诊断乙肝提供了新手段，有助于临床客观的分析HBV感染情况、疗效的观察和转归等情况的分析，至少可对下列情况更具有独特的诊断价值：

1、治疗前进行病毒定量检测，可以指导选择抗病毒药物，避免盲目用药。

2、治疗后定量间接判断体内病毒数量，有助于疗效的观察。

3、怀孕前进行定量测定，有助于选择有利于的怀孕时机。

乙肝孕妇进行定量检查，有助于使部分病人得到及时的正确的诊断

目前我科已正式开展了乙肝二对半的TRFIA定量分析，其每一项的正常值范围均是由我国卫生部根据美国雅培的标准而制定，其灵敏度，准确度，及精确度都有远远优于一般的ELISA法，乙肝两对半的定量制定将给临床提供一个关于乙肝诊断及疗效，预后判断的更可靠的实验结果。

1、极大地提高了检测的灵敏度时间分辨荧光免疫定量技术（TRFIA）检测HbsAg灵敏度可达0.2ng/ml,而酶标（EIASA）检测的灵敏度是2ng/ml,极大地提高检测的灵敏度。

因此，在急性乙肝早期能及早检出HbsAg，确证HBV感染，缩短窗口期；其次，可发现低浓度HbsAg携带者；在部分慢性乙肝患者中，由于机体缺乏对HBV包蟆蛋白的免疫应答，HbsAg表达较低，酶标检测可出现HbsAg和HbsAb均阴性的情况，TRF技术则可避免这些情况的发生，为正确判断病情提供依据。

2、能动态观察疗效和监测病情

1）定量分析HBsAg和HBsAb的浓度变化，可预见急性乙肝是否处于恢复期。

如HBsAg浓度降低，HBsAb浓度逐渐升高，可说明病情正往恢复期发展；反之，HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较低水平，则易发展为慢性乙肝或病毒携带者。

2）定量分析HBeAg和HBeAb的浓度变化，可反映病情变化和治疗效果。

定量测定能明确检测HBeAg和HBeAb转换的时期，即表现为HBeAg浓度下降和HBeAb升高的过程。

高浓度的HBeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高传染性。

高浓度的HBeAb一方面提示病情好转而在某些时候（如肝功能指标很差）则可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。

3）HBcAb浓度的高低可反映病毒感染的状态。

高浓度的抗-Hbc提示乙肝性感染，恢复期浓度降低。

慢性乙肝呈抗-Hbc持续高浓度。

而低浓度的抗-Hbc一般为恢复期或既往感染。

4）有利于对慢性肝炎活动性或非活动性的判断。

非活动性慢性乙肝各项指标相对稳定，活动性往往呈现进行性变化。

3、TRFIA和定量PCR技术可互相补充

血清HBV—DNA荧光定量PCR测定可以直接反映血液中病毒复制状态，具有很多临床应用价值，但不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态。

HBV—DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合“两对半”各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态。

4、HBsAb的定量测定能够对乙肝的预防起到监督作用

HBsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。

HBsAb的含量在10mlU/ml以上病人ELISA检测即可呈阳性结果，但并不提示机体都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10—100mlU/ml之间的样本，定性虽为“阳性”，但此时机体对HBV的免疫力较弱，甚至不能预防HBV感染。

只有HBsAb的含量达到100mlU/ml以上时才可确定具有抵抗HBV入侵的作用。

作定量检测，可根据HBsAb的含量判断机体对HBV的免疫状态及乙肝苗的免疫效果。

因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。

乙肝两对半定量的临床意义

1、乙肝表面抗原（HBsAg）定量

●能极早地检出HBsAg，确证乙肝感染，几乎能与preSl同时检测出。

在乙肝病程中大大缩短了窗口期的时间。

●由于机体常缺乏对包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，可出现HBsAg、Anti-HBs均阴性的情况，定量检测HBsAg则可避免这些情况的出现。

●病毒发生变异后，病毒表达量较低，甚至“定性”检测不出抗原。

可检测出HBsAg，并极有可能同时检测出HBsAg、Anti-HBs。

●国内外学者研究表明HBsAg的细胞免疫应答与肝细胞损伤有一定关系。

血清中HBsAg含量和病人对HBsAg细胞免疫成反比关系，而肝功能改就则与此种细胞免疫成反比。

而定量检测HBsAg是反映这一关系的唯一手段。

●一般来说，慢性肝炎HBsAgCOI相对恒定：

而活动性肝炎HBsAgCOI往往较高且不稳定。

2、乙肝表面抗体（Anti-HBs）定量

●Anti-HBs的定量检测能够地机体是否真正具有“中和”HBV免疫力作为正确评价，避免误误导病人，对乙肝的预防起到监督作用。

●Anti-HBs含理在10—100IU/L之间的样本，乙肝两对半定性的结果为阳性，但此时机体对HBV并无中和作用，仍有感染HBV的危险。

只有定量检测Anti-HBs在100UI/L以上时才具有抵抗HBV入侵的作用。

因此，定量检测乙肝两对半对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防具有重要意义。

3、乙能e抗原（HBeAg）定量

●HBeAg是乙肝病毒在肝细胞在繁殖时出现的前C/C基因的产物，经蛋白酶水解后HBe蛋白质以非颗粒形式分泌入血清中。

在急性HBV感染时，血清中可出现HBeAg，但维持可测水平的时间很短暂（数天—数周）。

HBeAg阳性一般是提示有大量病毒存在，是急性乙肝恢复期的首选血清学指标。

●由前C基因突变HBV感染所致的急性或慢性乙肝，始终不出HBeAg，但HBV-DNA进行性复制。

HBeAg亦在高COI水平波动。

与前者HBeAg阳性慢性乙肝类型中的转换期比较，两对半定性均表现为小三阳，但后者主要表现在高HBeAgCOI值，忽高忽低的ALT值和HBV-DNA始终阳性。

4、乙肝e抗体（Anti-HBe定量

●由HBV野型株感染所引起的急性或慢性乙型肝炎，其自然史分为HBeAg阳性期和Anti-HBe阳性期。

定量监测能明确出HBeAg向Anti-HBe换的时期，即表现为HBeAgCOI下降（含量降低）和Anti-HBeCOI下降（含量升高）的过程。

因此，Anti-HBe定量与HBeAg定量联合检测对监测HBV感染的病程及药物的疗效观察有很好的实际意义。

●由前C基因突就株HBV感染所致异型慢性乙肝，由于患者始终不出现HBeAg。

因此，长期监测患者Anti-HBe含量对判断其预后和转归具有十分重要的价值。

5、乙肝核心抗体（Anti-HBc）定量

●乙肝病毒由外壳HBsAg和内核HBcAg组成。

乙肝病毒感染期间，一般会产生Anti-HBc，在HBcAg出现后即可从血清中检测到。

偶尔也有Anti-HBc阴性的HBV感染者，多见于免疫抑制的病人。

●在乙肝感染康复者HBsAg携带者中，Anti-HBc可长期存在。

因此，在特殊人群中开展Anti-HBc筛选试验对预防乙肝的传播有重要参考价值。

●Anti-HBc定量怀其他HBV试验一同检测有助于乙肝感染的诊断和监测。

在其他指标缺乏的情况下（如HBsAg阴性），Anti-HBc定量可能是现存HBV感染的唯一指标。

时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎病毒标志物

临床工作中发现少部分经酶联免疫吸附法（ELISA）检测仅乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和抗HBcIgG阳性的患者，病毒含量却很高。

为此，采用时间分辨免疫荧光分析法（TRF）对34例此类患者进行乙型肝炎标志物（HBVM）的检查，现将结果报道如下：

一、资料与方法

1.病例选择：

为2002年2月至9月住院或门诊患者，共34例，男21例，女13例，年龄5~58岁，平均（29.2±18.7）岁。

采静脉血分离血清，用ELISA进行HBV标志物（HBVM）检测及HBVDNA定量检查。

留取血清置-30℃保存。

（1）HBsAg、抗HBcIgG阳性，乙型肝炎e抗原（HBeAg）、抗-HBs、抗-HBcIgM阴性；

（2）HBVDNA含量＞104拷贝/ml;（3）近3个月未使用抗病毒药物。

每人进行2次抗原抗体检查，结果一致。

2次HBVDNA检查，结果相差1个数量级以下。

2.常规HBVM检测：

用ELISA法，试剂为上海科华生物工程股份有限公司产品，按产品说明书操作。

3.HBVDNA含理测定：

采用实时荧光定量PCR法，试剂盒购自广州中山医科大学达安基因诊断中心。

仪器为美国PerkinElmer公司GeneAmpE5700型PCR仪。

严格按说明书操作，检测灵敏度为103拷贝/ml。

4.TRF法检查HBVM：

试剂为上海新波生物技术有限公司产品，采用Anytest2000时间分辨检测仪。

严格按照说明书操作。

5.统计分析：

取HBVDNA含量的对数值进行成组设计的两样本均数比较，行t检验。

二、结果

1.HBVM：

用TRF法检查发现，34例患者中HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性者15例，HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性者14例，仅HBsAg、抗-HBc阳性者5例。

即用ELISA检查时HBeAg假阴性15例，抗-HBe假阴性14例（表1）。

2.HBVDNA含量：

HBeAg及抗-HBc均阴性组、HBeAg阳性组、抗-HBc阳性组HBVDNA含量的对数平均值分别为6.45±1.74、7.29±1.59、5.80±1.46。

将前者与后两组分别进行成组设计的两样本均数比较的t检验，t值分别为1.005、0.816，P值均＞0.05，差异无显著性。

三、讨论

HBVM的变化是评估HBV感染后病情转归的重要依据，也是抗病毒治疗的疗效考核指标之一。

通过TRF检查发现，大部分ELISA法检测为HBsAg、抗-HBc阳性模式的患者其实为HBeAg假阴性（15/34，44.12%）及抗-HBe假阴性（14/34，41.18%）。

仅少部分可能为病毒变异的结果。

研究发现，HBsAg、抗-HBc浓度显著高于正常，ELISA及TRF符全率为100%，抗-HBs浓度明显低于正常，两者符合率为100%。

而HBeAg、抗HBe浓度仅稍高于正常，因此ELISA易出现假阴性。

目前TRF主要用于激素的检测。

随着仪器及试剂的国产化，检测费用的降低，TRF因其突出的高敏感性、特异性强、无放射污染等特点，在HBVM的检测中有着广泛的应用前景。

作者单位：

410011长沙，中南大学湘雅二医院肝病研究中心

目前我院已正式开展了乙肝二对半的时间分辨定量分析，其每一项的正常值范围均是由我国卫生部根据美国雅培的标准而制定，其灵敏度，准确度，及精确度都有远远优于一般的ELISA法，乙肝两对半的定量制定将给临床提供一个关于乙肝诊断及疗效，预后判断的更可靠的实验结果。

时间分辨荧光免疫定量测定乙肝两对半的临床意义

◇极大地提高了检测的灵敏度

时间分辨荧光免疫定量技术（TRFIA）检测HBsAg灵敏度可达0.2ng/ml,而酶标（EIASA）检测的灵敏度是2ng/ml,极大地提高检测的灵敏度。

因此，在急性乙肝早期能及早检出HBsAg，确证HBV感染，缩短窗口期；其次，可发现低浓度HBsAg携带者；在部分慢性乙肝患者中，由于机体缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，酶标检测可出现HBsAg和HBsAb均阴性的情况，TRF技术则可避免这些情况的发生,为正确判断病情提供依据。

◇能动态观察疗效和监测病情

1）定量分析HBsAg和HBsAb的浓度变化，可预见急性乙肝是否处于恢复期。

如HBsAg浓度降低，HBsAb浓度逐渐升高，可说明病情正往恢复期发展；反之，HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较低水平，则易发展为慢性乙肝或病毒携带者。

2）定量分析HBeAg和HBeAb的浓度变化，可反映病情变化和治疗效果。

定量测定能明确检测HBeAg向HBeAb转换的时期，那表现为HBeAg浓度下降和HBeAb升高的过程。

高浓度的HBeAg还可以间接提示病毒处于高复制状态,具有较高的传染性.高浓度的HBeAb一方面提示病情好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）则可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。

3）HBsAb浓度的高低可反映病毒感染的状态。

高浓度的抗-Hbc提示乙肝急性感染，恢复期浓度降低。

慢性乙肝呈抗-Hbc持续高浓度。

而低浓度的抗-Hbc一般为恢复期或既往感染。

4）有利于对慢性肝炎活动性或非活动性的判断。

非活动性慢性乙肝各项指标相对稳定，活动性往往呈现进行性变化。

◇TRFIA和定量PCR技术可互相补充

血清HBV—DNA荧光定量PCR测定可以直接反映血液中病毒复制状态，具有很多临床应用价值，但不能完全反应病毒复制静息期细胞内HBV病毒状态。

HBV—DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合“两对半”各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态。

◇HBsAb的定量测定能够对乙肝的预防起到监督作用吗？

HBsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。

HBsAb的含量在100mlU/ml以上病人ELISA检测即可呈阳性结果，但并不提示机体都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10—100mlU/ml之间的样本，定性虽为“阳性”，但此时机体对HBV的免疫力较弱，甚至不能预防HBV感染。

只有HBsAb的含量达到100mlU/ml以上时才可确定具有抵抗HBV入侵的作用。

作定量检测，可根据HBsAb的含量判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的免疫效果。

因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。

时间分辨荧光免疫分析在乙肝的应用

中南大学湘雅二医院肝病研究中心教授：

杨旭

乙肝抗原体测定是诊断乙肝最常用的方法。

酶联免疫测定由于操作简便，成本低廉，敏感性和特异性较好，80年代中期以来就成为乙肝抗原体检测最主要的方法。

但是本法只能定性，作为定量测定的方法，其重复性很差。

据观察，不同乙肝感染者表面抗原的浓度相差800倍,e抗原的浓度相差100倍，仅用“阳性”来表示，实在太粗糙，太不科学，难以满足临床的需要。

观察指标的量化是提高诊断水平的基本要求，也是科学发展的必然趋势，因此，进入90年代以来，国外先后推出第四代检测方法：

化学发光法、电化学发光法。

但是这两个方法需要昂贵的设备，试剂成本高，难以普遍应用。

为了满足临床的需要，根据国情和省情，我科瞄准抗原抗体检测发展的方向，2002年10月引进具有世界先进水平的时间分辨荧光免疫检测仪，在省内率先建交时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）检测乙肝抗原抗体的新方法，我院也是国内少数应用本法检测乙肝的医院之一。

时间分辨荧光免疫分析的原理和通常的免疫测定方法基本相同，只是标记物和测定方法不同。

时间分辨荧光免疫分析以三价稀土离子（常用的是铕）及其螯合剂代替同位素、荧光素或酶，作为标记抗原或抗体的示踪物，检测未知的抗体或抗原，用特制的时间分辨荧光仪测定最后反应产物中荧光的强度，根据荧光强度来判断待测物质的浓度。

在免疫复合物中的稀土离子自身可产生微弱的荧光信号，而当加入增强液以后，稀土离子从免疫复合物中释放出来，受到激发光照射时，荧光强度可增强100万倍。

稀土离子发出性荧光不仅光度强，而且寿命长。

反应系统中许多物质也可以发出荧光，但他们的荧光的寿命极短，因此，通过简单的延时检测，就可以将特异性荧光与非特异性荧光区别开来，所以这个方法的名称冠以“时间分辨”。

时间分辨荧光免疫分析是一种超灵敏的高度特异性的检测技术，是今后抗原抗体检测发展的方向，其灵敏度比化学发光和电化发光高10倍~100倍，比放免法和酶标法高1000倍以上。

据我科现场测评，其特异性、敏感性和重复性均极强，几乎没有假阴性，假阳性率低于0.1%，同一标本连续20次检测CV＜1%，同一批（10个）连续3天检测CV=0.9%，检测后反应板连续3天重复阅读CV＜1%。

这一方法的建立必将极大的提高我科的乙肝诊断水平，使我们对乙肝感染者的病情、预后、病毒复制程度、抗病毒药物的疗效等的判断更变科学。

乙肝时间分辨荧光免疫分析试剂盒共5项，包括表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体和核心抗体，可任选1项或多项，全套需备血3ml（不加抗凝剂），记账后（每项45元）标本送传染科实验室，当天下午出结果。

时间分辨荧光免疫测定技术在HBV—M定量检测及临床应用分析

【摘要】目的研究乙肝病毒感染者血清免疫学标志物，利用时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）检测其含量结果与ELISA法结果的任合程度、灵敏度、特异性；了解TRFIA测定HBV-M的准确性、可行性及临床应用价值。

方法分别用TRFIA和ELISA法测定260例随机血清标本HBV-M结果及含量。

结果HBsAg（ELISA）阳性36例，TRFIA阳性40例，x2=4,P＜0.05,两法符合率98.46%；抗-HBs（ELISA）阳性130性，TRFIA阳性160例，x2=30，P＜0.01，两法符合率88.5%；HBeAg（ELISA）阳性17例，TRFIA阳性18例，x2=1，P＞0.05，两法符合率99.6%；抗-HBe（ELISA）阳性86例，TRFIA阳性73例,x2=6.76，P＜0.01，两法符合率90.4%；抗-HBc（ELISA）阳性54例，TRFIA阳性72例，x2=15.6，P＜0.01，两法符合率91.5%；结论TRFIA法与ELISA法比较，特异性、敏感性都高，TRFIA作用于HBV-M含量检测可为临床间接反映病毒的感染状况，同时也为临床疗效提供动力学观察及接种乙肝疫苗提供依据。

关键词HBV-M时间分辨荧光免疫分析技术酶联免疫吸附试验

【文献标识码】A【文章编号】1606-8106（2004）06-0486-02

Thetime-resolvedfluoroimmunoassayTRFIAusedinthe

HBV-Mrationtestandtheanalysisonclinicalapplication

CaiYihe

DepartmentofLaboratory,ChaozhouCentralHospital,Guangdong521021.

【Abstract】ObjectivetostudythesubstanceofbloodimmunityHBV-M,Applying,thetechnologyofTRFI-Atotesttheresultandthencompareitwitht