联检项目可行性报告.docx
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联检项目可行性报告
九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒
（间接免疫荧光法）
项
目
推
荐
书
注册证号：
国食药监械（进）字2010第3400365号
生产厂家：
西班牙VIRCELL公司
中国独家代理：
郑州安图生物工程股份有限公司
公司简介
代理公司：
安图生物
专业从事体外诊断产品的研发、生产和销售的高新技术企业
体外诊断试剂GMP认证（2001年，2003年，2008年）
体外诊断试剂ISO13485认证（2006年UL，2009年）
SFDA认证中心体外诊断试剂生产质量体系考核（2008年）
河南省二类体外诊断试剂生产质量体系考核（2008年）
医疗检测仪器（酶标仪/发光仪等）ISO13485/CE/IVDD认证
郑州安图生物成立于1998年，是从事体外诊断产品的研发、生产和销售的高新技术企业。
安图生物已经通过国家药品GMP认证、ISO13485-2003国际质量体系认证、国家体外诊断试剂质量体系考核。
通过河南省50户成长型高技术企业、河南省体外诊断试剂工程研究中心、河南省级企业技术中心、河南省免疫诊断试剂工程技术研究中心认定。
是河南省体外诊断行业的龙头企业，综合实力国内同行业中名列前茅。
公司主营业务涵盖体外诊断试剂、医学检验仪器、软件和临床医学检验服务领域。
产品品种包括：
传染病检测系列、肿瘤检测系列、内分泌检测系列、甲状腺功能检测系列、糖尿病检测系列、细菌和耐药检测系列、儿童发育检测等七大系列检测试剂，以及酶标仪、洗板机、发光仪、免疫自动化系统等四大系列检测仪器。
安图生物定位于发展民族产业：
高点起步，打造安图品牌；定位于专业性公司：
专注免疫和微生物诊断产品；定位于技术创新型企业：
保证核心竞争力的可持续性；定位于市场先导型企业：
保证企业健康、高速发展。
西班牙VIRCEL公司简介：
VIRCELL成立于1991年，专业从事微生物诊断试剂的开发和生产。
公司目前拥有近200个品种，涵盖多种检测方法：
酶联免疫分析免疫荧光分析细胞培养分子生物等，产品在全球范围销售，目前已销往50多个国家。
2008年销售分布：
VIRCELL公司相关质量认证：
1999年通过ISO9002:
1994质量认证；
2009年更新ISO9001:
2008质量认证；
2003年获得CE认证；
2005年获得ISO13485:
2005认证
产品销往全球50多个国家：
1、检验项目现状分析
2、VIRCELL产品优势及性能分析
3、收费标准及效益分析
4、产品技术参数
1、检验项目现状分析
目前市面上所见同类项目产品存在着以下几点缺陷：
1、一般产品多为国产酶联法，在产品灵敏度、特异性方面不是十分符合临床诊断；
2、没有一个厂家产品能同时涵括此9个项目，而且方法学不统一，使用科室在使用的过程中因操作的繁琐、复杂，难以做好有效的质量控制；
3、目前国内此九个项目文号齐全的厂家只有我公司拥有，其中几个项目（如肺炎衣原体、副流感病毒等）国内除我公司外其他厂家均为无证产品，按照我国目前现行法律，使用单位在使用时无法得到产品质量的有效保证，这样就使得使用单位使用后存在法律风险：
如因产品质量问题带来的医患纠纷时，使用单位无法得到法律的有效保护；而且面临着药监部门罚款，这样的话也使用单位不仅面临法律的制裁及经济上的损失，而且其专业地位也会因此而受到影响。
2、VIRCELL产品优势、临床意义及性能分析
产品优势：
全国独家九项全部拥有国家批准文号且方法学经典、统一，操作简单，质量可靠，既满足临床需要又规避法律风险；
性能稳定、无交叉反应；
产品经ISO9002CE认证，品质保证；
一卡九项，避免漏检；
有效期长达18个月。
临床意义：
呼吸道感染性疾病的早期、快速、准确诊断；
对病原体的鉴别诊断提供导向性依据；
指导临床合理用药。
产品性能：
九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒，采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM抗体，可检的病原体包括：
嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
用于呼吸道感染疾病的辅助诊断。
1.检测原理
间接免疫荧光法（IFA）（图1）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。
在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜观察结果。
图1：
九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒检测原理
2.试剂盒组成及用途
组分
成分和用途
载玻片
检测的物理载体，覆有聚四氟乙烯并包被有针对检测物的特异性抗原，包装袋内有一袋硅胶以防潮。
质控品
用于证明试剂盒及试验的有效性，含有人血清及防腐剂。
吸附剂
羊抗人IgG用来吸附人IgG避免干扰IgM检测，含有防腐剂。
FITC结合物
荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合物，含有染色液、防腐剂和蛋白稳定剂。
和抗原抗体复合物反应，并显色。
封闭介质
甘油缓冲液，便于观察。
磷酸盐缓冲液（PBS）
用于洗涤步骤，从反应介质中除去未结合的免疫球蛋白和结合物。
3.操作步骤
实验前准备
1）实验所需物品准备：
1000ml量筒、1000ml烧杯、离心管、微量移液器、温育湿盒、洗瓶、水平摇床、恒温箱、盖玻片、荧光显微镜。
2）PBS洗液的准备：
将1瓶PBS粉末倒入烧杯中，加入1L蒸馏水中，摇匀直至完全溶解，配好后储存在2-8ºC备用。
3）使用前，将所有试剂平衡至室温，将恒温箱调至37℃。
实验步骤
1）样本的稀释：
按1:
1比例稀释血清标本，即25µL血清加入25µLPBS中。
阴阳性对照不需要稀释。
2）用吸附剂处理稀释后的血清：
将30µL稀释后的血清加入150µL吸附剂中，彻底混匀。
阴阳性对照不需吸附剂处理。
处理后的血清要离心（13000r，10min）除去沉淀，以防干扰检测。
3）在载玻片的每孔中加15µL吸附剂处理过的血清。
在一个载玻片的每孔中加入15µL不稀释的阳性对照，在另一个载玻片的每孔中加入15µL不稀释的阴性对照。
4）将载玻片放入湿盒中，37℃温育90分钟。
5）用PBS洗液的缓慢水流冲洗载玻片（避免直接冲入孔内）后，浸泡在PBS中并放置在水平摇床上轻轻摇动10分钟。
将载玻片用蒸馏水缓慢水流冲洗（避免直接冲入孔内）。
6）载玻片自然风干。
7）每孔加入15µLFITC结合物溶液（不需稀释）。
8）将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。
9）重复6和7的洗涤步骤。
10）加几小滴封闭介质，小心盖上盖玻片。
11）尽快用荧光显微镜在400倍放大率下观察结果。
如果不能立即观察，可将其避光放置于2-8ºC不超过24小时。
简明操作程序：
4结果判断
有效性判断
每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。
观察到的荧光模式应为：
阳性对照：
腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核、胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性对照：
军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
阳性结果荧光图谱：
阴性结的荧光图谱：
样本结果判断
阳性结果：
可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性结果：
可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色
1.性能指标
.灵敏度和特异性
采用方法学对比进行阴阳性符合率分析，阳性符合率代表灵敏度，阴性符合率代表特异性，结果如下：
病原体
对比方法
样本数量
阳性符合率
阴性符合率
嗜肺军团菌
IFA
82
%
%
肺炎支原体
ELISA
62
%
%
Q热立克次体
IFA
74
%
%
肺炎衣原体
IFA
61
%
%
腺病毒
ELISA
74
%
%
呼吸道合胞病毒
ELISA
97
%
%
甲型流感病毒
ELISA
46
%
%
乙型流感病毒
ELISA
40
%
%
副流感病毒
ELISA
36
%
%
5.2精密度
分析内精密度
在相同实验条件下由同一个操作人员在同一次试验中对3份血清（2份阳性和1份阴性）分别进行5组加样检测。
结果：
滴度变化不超过一个稀释度。
分析间精密度
在5种不同条件下（不同操作人员或不同试验日期）对3份血清（2份阳性和1份阴性）进行检测。
结果：
滴度变化不超过一个稀释度。
交叉反应和干扰
病原体
干扰物质
样本例数
结果
嗜肺军团菌
肺炎支原体、肺炎衣原体和Q热立克次体、革兰氏阴性细菌（布鲁氏菌，沙门氏菌）和抗核抗体
20
无交叉反应或干扰
肺炎支原体
嗜肺军团菌、肺炎衣原体和Q热立克次体
12
立克次体
肺炎支原体、肺炎衣原体和嗜肺军团菌、同种属的细菌（发疹伤寒等的病原体）和抗核抗体
20
肺炎衣原体
嗜肺军团菌、Q热立克次体和肺炎支原体，同种属的细菌（发疹伤寒等的病原体）和抗核抗体
20
腺病毒
RSV、甲型和乙型流感病毒和副流感病毒
8
呼吸道合胞病毒
腺病毒、甲型和乙型流感病毒和副流感病毒或根据病毒分类（麻疹）
10
甲型流感病毒
RSV、乙型流感病毒、腺病毒和副流感病毒
8
乙型流感病毒
RSV、甲型流感病毒、腺病毒和副流感病毒
8
副流感病毒
RSV、甲型和乙型流感病毒和腺病毒
8
其它干扰研究
对25份类风湿因子阳性血清进行了2种病毒和2种细菌抗原IgG和IgM抗体的检测。
对另外两份血清进行了每种抗原IgG和IgM抗体的检测。
在IgM检测中，用抗IgG抗体对血清进行了吸附处理。
结果显示，吸附剂可以有效避免类风湿因子的干扰。
经验证，吸附剂也可以有效地避免IgG抗体过量造成的假阴性。
3、收费标准及效益分析
目前江西省九项收费标准合计为425元/例，该项目无需过多的设备投资，主要设备为荧光显微镜，此项目不仅能给使用单位带来可观的经济效益，更重要的是，规避了使用单位使用无证产品带来的法律风险、提高了使用单位的检测水平也就相应的提高了使用单位的专业地位，这样的社会效益和经济效益必将给使用单位带来更美好的发展前景！
赣发改收费字[2005]175号
项目
项目编号
三级医院
二级医院
一级医院
套用方法
合胞病毒
6
呼吸道合胞病毒抗体测定
20
15
12
副流感
8
副流感抗体检测
30
25
20
军团菌
2
军团菌抗体
50
40
30
Q热立克次体
2
细菌抗体检测
50
40
30
肺炎支原体
0
肺炎支原体血清学检测
40
32
24
腺病毒
1
40
32
24
荧光探针法
甲流
5
病毒血清学实验
80
70
60
乙流
5
病毒
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